转录共刺激因子对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关蛋白的影响

目的:探讨转录共刺激因子(TAZ)对结直肠癌基质金属蛋白酶及相关增殖蛋白的影响,分析其影响结直肠癌肿瘤生物学行为的可能作用机制。方法:采用合成TAZ小干扰RNA(TAZ-siRNA)转染结直肠癌细胞株HCTT116抑制TAZ表达,检测细胞活性、侵袭迁移能力、细胞凋亡,采用实量定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TAZ与基质金属蛋白酶mRNA表达,采用Western blot法相关蛋白表达。结果:转染组TAZ mRNA与蛋白表达均明显低于对照组与空白组(t=27.116、17.600、24.051、16.168,P<0.01);HCT116细胞活性、侵袭迁移能力均明显低于对照组与空白组,细胞凋亡率均明显高于对照组与空白组(t=12.944、17.613、20.489、12.639、18.324、20.051,P<0.01);基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等mRNA表达均明显低于对照组与空白组,金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达均明显高于对照组与空白组(t=13.588、10.041、6.678、13.164、10.479、6.705,P<0.05或<0.01);B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达均明显低于对照组与空白组,bcl-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt C)表达均明显高于对照组与空白组(t=9.358、7.670、15.205、19.163、5.937、17.063,P<0.05或<0.01)。结论:抑制转录共刺激因子(TAZ)能够抑制结直肠癌肿瘤细胞增殖与转移,可能与调节基质金属蛋白酶、相关蛋白表达水平有关。

抑制具有PDZ结合域的转录共刺激因子表达对结直肠癌细胞株HCT116凋亡的影响及机制

目的探讨RNA干扰技术沉默具有PDZ结合域的转录共刺激因子（TAZ）基因表达对结直肠癌细胞凋亡的影响及其机制。方法合成TAZ的小干扰RNA（TAZ—siRNA）以80nmol／L转染结肠癌细胞株HCT116，抑制TAZ表达；转染48h后细胞计数法（CCK-8）检测细胞的活性，流式细胞仪实验检测细胞凋亡率，实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）和Westernblot检测转染各组HCT116细胞TAZ、B细胞淋巴瘤／白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）和细胞色素C（CytC）基闲mRNA和蛋白表达。结果TAZ—siRNA能有效沉默HCTI16细胞TAZ基因的表达（24h抑制率为40．5％，48h抑制率为82．5％，72h抑制率为69．8％）。有效抑制HCT116细胞中TAZ表达后，转染组细胞的活性（1．01±0．12）明显低于阴性对照组和COH—siRNA组（1．73±0．12和1．68±0．09）；凋亡率在TAZ—siRNA组、阴性对照组、con—siRNA组分别为（33．20±0．35）％、（11．674-0．12）％和（12．03±0．11）％。TAZ—siRNA转染后HCT116中TAZ和bcl-2基因和蛋白表达下调，而bax和CytC基因表达升高和蛋白的表达上调（P〈0．05）。结论利用RNA十扰技术沉默结直肠癌HCTI16细胞TAZ基因后可以显著抑制细胞的活性，并能明显促进细胞凋亡，其机制可能是TAZ通过调控线粒体相关凋亡途径影响细胞凋亡。

甜橙黄酮调节YAP/TAZ轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探究甜橙黄酮(Sinensetin, SIN)调节Yes相关蛋白(YAP)/PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:免疫组织化学和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测120例宫颈癌组织、癌旁组织中YAP、TAZ表达。以不同浓度SIN(0、5、10、25、50、100、200μg/mL)处理宫颈癌细胞,检测细胞活力。将SiHa细胞分为对照(control)组、SIN低、中、高剂量(SIN-L、M、H)组、SIN-H+XMU-MP-1组,EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测YAP、TAZ、PCNA、Bax、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平。构建宫颈癌裸鼠模型,分为NC组、SIN组、SIN-H+XMU-MP-1组,测量肿瘤质量与体积,HE染色观察肿瘤组织形态,免疫组化法检测肿瘤组织Ki67、YAP、TAZ蛋白表达。结果:120例宫颈癌组织中YAP阳性率、TAZ阳性率显著升高(P<0.05);宫颈癌组织中YAP、TAZ mRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌细胞CaSki、C-33A、HeLa、SiHa细胞活力随着SIN浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择SiHa作为后续实验细胞,选择25、50和100μmol/L的SIN作为后续实验浓度。与对照组相比,SIN-L、M、H组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著下降,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05);与SIN-H组相比,SIN-H+XMU-MP-1组细胞EdU阳性率、迁移细胞数、侵袭细胞数、PCNA、Bcl-2、N-cadherin蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05)。SIN能够抑制肿瘤体积和质量,促进肿瘤组织坏死,降低Ki67、YAP、TAZ阳性表达。结论:SIN能够抑制宫颈癌细胞增殖和上皮间质转化,促进凋亡,其作用机制可能与抑制YAP/TAZ轴有关。

TAZ蛋白在血管紧张素Ⅱ诱导的高血压小鼠主动脉纤维化中的作用及其机制

目的探讨PDZ结合域的转录共刺激因子(TAZ)蛋白在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压小鼠主动脉纤维化中的作用及其机制。方法将18只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ+维替泊芬(Ve)组,每组6只。AngⅡ组和AngⅡ+Ve组小鼠皮下植入注满AngⅡ的渗透压微量泵,持续14 d释放AngⅡ(1.1 mg·kg^(-1)·d^(-1))诱导小鼠高血压模型;正常对照组小鼠不进行AngⅡ干预。AngⅡ+Ve组小鼠隔日腹腔注射1次Ve(60 mg·kg^(-1))至实验结束;AngⅡ组和正常对照组小鼠隔日腹腔注射等量生理盐水。造模结束后,采用尾动脉测压法测定小鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率;使用水合氯醛麻醉小鼠,打开胸腔,分离主动脉,采用苏木精-伊红染色法检测小鼠主动脉厚度,Masson染色法检测小鼠主动脉纤维化情况,Western blot法检测TAZ、转化生长因子-β(TGF-β)、母亲信号蛋白同源物3(Smad3)、磷酸化母亲信号蛋白同源物3(p-Smad3)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)表达。结果3组小鼠SBP、DBP比较差异有统计学意义(F=79.900、40.650,P<0.05)。AngⅡ组和AngⅡ+Ve组小鼠SBP、DBP显著高于正常对照组,AngⅡ+Ve组小鼠SBP、DBP显著低于AngⅡ组(P<0.05)。3组小鼠心率比较差异无统计学意义(F=0.090,P>0.05)。3组小鼠主动脉壁厚度比较差异有统计学意义(F=6.791,P<0.05);AngⅡ组小鼠主动脉壁厚度显著高于正常对照组(t=3.435,P<0.05),AngⅡ+Ve组小鼠主动脉壁厚度显著低于AngⅡ组(t=2.598,P<0.05),AngⅡ+Ve组与正常对照组小鼠主动脉壁厚度比较差异无统计学意义(t=0.361,P>0.05)。3组小鼠主动脉壁胶原纤维面积百分比比较差异有统计学意义(F=357.700,P<0.05)。AngⅡ组和AngⅡ+Ve组小鼠主动脉壁胶原纤维面积百分比显著高于正常对照组(t=25.810、4.882,P<0.05),AngⅡ+Ve组小鼠主动脉壁胶原纤维面积百分比显著低于AngⅡ组(t=20.580,P<0.05)。AngⅡ组小鼠主动脉中TAZ、TGF-β、p-Smad3、collagenⅠ蛋白相对表达量显著高于正常对照组(P<0.05);AngⅡ+Ve组小鼠主动脉中TAZ、TGF-β、p-Smad3、collagenⅠ蛋白相对表达量显著低于AngⅡ组(P<0.05);AngⅡ+Ve组小鼠主动脉中TGF-β蛋白相对表达量显著高于正常对照组(P<0.05),TAZ、p-Smad3、collagenⅠ蛋白相对表达量与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组小鼠主动脉中Smad3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=46.010,P>0.05)。结论TAZ可通过增加纤维化相关蛋白p-Smad3及collagenⅠ表达,激活Hippo通路,促进AngⅡ诱导的高血压小鼠主动脉增生和纤维化。

多发性骨髓瘤患者骨髓Flk1^+间充质干细胞的成骨能力降低

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓F lk1+间充质干细胞(F lk1+MSCs)的成骨特性,探讨其与多发性骨髓瘤骨病的关系。方法分离并鉴定MM患者骨髓源F lk1+MSCs;利用实时定量RT-PCR检测F lk1+MSCs成骨诱导前后成骨指标的表达,诱导2周后用Von-Kossa染色法测定钙盐沉积;同时测定F lk1+MSCs中转录共刺激因子(TAZ)的表达。结果MM患者骨髓F lk1+MSCs在体外经成骨诱导后,其成骨指标的表达较正常人明显降低,Von-Kossa染色也可见矿化基质沉积相应减低。同时F lk1+MSCs中TAZ的表达在MM中较正常人明显下调(P<0.05)。结论多发性骨髓瘤患者的骨髓F lk1+MSCs成骨能力较正常人减低,此因素可能参与了MM患者骨病的发病环节,而TAZ表达的减弱可能在此过程中发挥一定作用。

肾癌组织YAP1/TAZ蛋白表达与临床病理特征及患者远期生存的相关性研究

目的检测肾癌组织Yes相关蛋白1(Yes-associated protein 1,YAP1),PDZ结合域的转录共刺激因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)蛋白表达,并探讨其与临床病理特征及患者远期生存的关系。方法前瞻性选取安徽医科大学第二附属医院2016年1月~2018年10月收治的132例肾癌患者。根据三年内是否死亡将其分为死亡组(n=20)和生存组(n=108)。采用免疫组织化学二步法检测YAP1,TAZ蛋白表达,用COX回归分析探讨患者死亡的危险因素。结果手术组切缘正常组织YAP1,TAZ蛋白阳性表达率分别为22.41%和17.24%,癌组织YAP1,TAZ蛋白阳性表达率分别为53.45%和48.28%,对应癌组织高于切缘正常组织(χ^(2)=11.864,12.680,P=0.001,0.000)。穿刺活检癌组织YAP1和TAZ蛋白阳性表达率分别为77.14%和62.86%。临床分期、有副肿瘤综合征、有远处转移、伴下腔静脉癌栓、组织学分级与癌组织YAP1蛋白阳性表达率均呈正相关(χ^(2)=8.664~21.321,P=0.000~0.003),与TAZ蛋白阳性表达率也呈正相关(χ^(2)=6.518~25.529,P=0.000~0.001);癌组织YAP1,TAZ蛋白阳性表达与肾癌三年内生存率均呈正相关(χ^(2)=10.273,12.657;P=0.001,0.000);临床分期Ⅲ~Ⅳ期[风险比(hazard ratio,HR)=3.550,P=0.016]、有副肿瘤综合征(HR=4.267,P=0.012)、组织学Ⅲ~Ⅳ级(HR=5.382,P=0.001)、癌组织TAZ蛋白阳性表达(HR=5.760,P=0.007)、伴下腔静脉癌栓(HR=6.508,P=0.005)、有远处转移(HR=7.330,P=0.003)、癌组织YAP1蛋白阳性表达(HR=7.877,P=0.001)均是肾癌三年内死亡的危险因素。结论肾癌组织YAP1和TAZ蛋白阳性表达率高,且与临床分期、组织学分级、副肿瘤综合征、远处转移和下腔静脉癌栓有关,上述病理特征与癌组织YAP1和TAZ蛋白阳性表达均是患者远期生存的影响因素。

TAZ蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的:观察TAZ蛋白在正常胃黏膜、癌前病变及胃癌组织中的表达,分析其与胃癌临床病理因素的关系及意义.方法:应用免疫组织化学方法检测129例胃癌组织及其配对的正常组织中TAZ和-catenin蛋白的表达.结果:TAZ蛋白在慢性萎缩性胃炎(66.67%)、肠上皮化生(69.57%)、异型增生(71.88%)和胃癌组织(75.19%)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(20.93%);β-catenin蛋白在慢性萎缩性胃炎(62.96%)、肠上皮化生(73.91%)、异型增生(65.63%)和胃癌组织(65.89%)中表达的阳性率均显著高于正常胃黏膜(24.81%);胃癌中TAZ蛋白表达上调与管状腺癌分化程度(P<0.05),Lauren分型(P<0.01)、浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.01)、远处转移(P<0.05)相关;β-catenin表达上调与浸润深度(P<0.01),淋巴结转移(P<0.05),远处转移(P<0.05)相关;TAZ和β-catenin蛋白表达成正相关(r=0.246,P<0.01).结论:胃癌中TAZ和β-catenin可能协同参与胃癌的发生发展及侵袭转移过程.

TAZ在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

背景与目的:TAZ(具有PDZ结合域的转录共刺激因子)是由400个氨基酸构成并与14-3-3蛋白结合,内含一个WW结构域和PDZ结合基序的转录共刺激因子,其在正常机体内参与基因转录调节和细胞信号转导。然而,近年研究发现其在多种肿瘤中表达升高,并参与肿瘤的发生、发展。本研究检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中TAZ mRNA及蛋白表达情况,并探讨其临床意义。方法:取58例NSCLC患者癌组织、远癌组织(距肿瘤边缘>5 cm)和20例肺良性病变组织,并将远癌组织和肺良性病变组织作为对照组与肺癌组比较,采用实时荧光定量PCR法(real-time qPCR)和Western blot检测显示TAZ mRNA及其蛋白表达。结果:实时荧光定量PCR法检测显示,肺癌组织中TAZ mRNA的表达高于远癌及肺良性病变组织,差异有统计学意义(P<0.05);Western blot检测显示,肺癌组织中TAZ蛋白表达显著高于远癌及肺良性病变组织;NSCLC患者癌组织中TAZ mRNA的表达量与其肿瘤大小、分化程度和p-TNM分期相关(P<0.05)。结论:NSCLC患者癌组织中TAZ参与肿瘤的发生、发展,TAZ可作为NSCLC预后评价指标。

Hippo信号通路对心血管疾病影响的研究进展

Hippo信号通路是一条由一系列蛋白激酶和转录因子组成的高度保守的激酶链,因其在维持成年人心脏稳态和调节损伤反应中起重要作用而越来越受到关注,成为研究的热点之一。本文对Hippo信号通路在动脉粥样硬化、高血压病、心肌梗死、心力衰竭、肺动脉高压等不同疾病中的调控机制进行综述,并探讨下一步可以深入研究的方向。