XAF1转录变异体在胃肠道肿瘤细胞株中的表达及意义

目的探讨XAF1不同转录变异体在胃肠道肿瘤中的表达情况及在肿瘤中的可能作用。方法培养18株肿瘤细胞及正常转化细胞,取正常人胃黏膜组织及外周血淋巴细胞作为对照,RT-PCR方法检测XAF1 3种不同转录变异体的的表达情况;用人重组IFN-α作用于MGC803细胞24 h后,RT-PCR方法检测XAF1 3种不同转录变异体的改变情况。结果 XAF1A及XAF1B在胃肠道肿瘤细胞株及正常转化细胞中多不表达或低表达,高表达XAF1A的肿瘤细胞株(KATOⅢ、COLO205、HCT116、ESO)同时表达XAF1C,IFN-α能同时上调XAF1的不同转录变异体。结论 XAF1C与XAF1A、XAF1B在细胞凋亡上可能起相互拮抗作用,XAF1C的高表达可能与肿瘤细胞的转移有关。与XAF1A一样,XAF1B、XAF1C也可被干扰素诱导。

XAF1转录变异体在结直肠肿瘤中的差异表达

背景:X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)能与XIAP结合而拮抗其caspase抑制活性,从而促进细胞凋亡,已被认定是一种肿瘤抑制基因。在多种肿瘤细胞中可检测到XAF1转录变异体,但不同转录变异体在结直肠肿瘤中的表达情况尚不明确。目的:检测XAF1及其转录变异体在不同结直肠组织中的表达,初步探讨其在结直肠肿瘤发生、发展中的作用。方法:收集结直肠癌及其配对癌旁组织、增生性息肉、腺瘤和正常结直肠黏膜组织样本,以免疫组化法和蛋白质印迹法检测XAF1蛋白表达,RT-PCR检测XAF1转录变异体表达。结果:与正常结直肠黏膜相比,XAF1蛋白在增生性息肉、腺瘤和癌组织中的胞核表达强度显著降低(P<0.05),胞质表达强度有所增高(P>0.05),总体表达强度显著降低(P<0.05)。结直肠癌组织中的XAF1A蛋白表达显著低于相应癌旁组织(P<0.05)。转录变异体XAF1A、XAF1B、XAF1C mRNA在结直肠肿瘤中的表达均显著低于正常结直肠黏膜(P<0.05)。结论:XAF1及其转录变异体在结直肠肿瘤和正常结直肠黏膜中存在差异表达,腺瘤阶段即已出现XAF1表达下降并由胞核向胞质易位。转录后修饰可能影响XAF1基因功能。

猪FoxN1基因转录变异体亚细胞定位研究

Fox N1基因主要表达于胸腺上皮细胞和皮肤角质细胞,在胸腺发育、T细胞增殖、毛发生长、指甲发育等方面发挥重要作用。Fox N1基因存在多种转录变异体,人类Fox N1基因已发现18种转录变异体。转录变异体的存在使基因差异表达和蛋白质多样性存在可能。为深入研究转录变异体生物学功能,研究将前期发现的猪Fox N1基因3种转录变异体分别连入p EGFP-N1载体内,构建各自融合蛋白,转入猪PK15细胞,利用荧光显微镜观察转录变异体亚细胞定位情况。结果表明,p EGFP-N1空载体转染表达绿色荧光蛋白在PK15细胞核和细胞质均匀分布,而重组载体p EGFP-N1-Fox N1(a/b/c)表达的融合蛋白仅在细胞核内均匀分布。结果可为3种转录变异体后续功能研究奠定基础。

FAM92A1新转录变异体的鉴定及功能研究

目的:对高度保守新基因FAM92A1的变异体进行鉴定和功能分析。方法:利用RT-PCR和序列测定检测FAM92A1基因新的转录变异体;分别构建FAM92A1三个转录变异体的真核表达质粒(pFAM92A1-271,pFAM92A1-251,pFAM92A1-289),转染SKOV3细胞,用MTT、流式细胞仪分析FAM92A1基因各转录本在过表达情况下对细胞增殖及细胞周期的影响;通过构建其融合蛋白表达载体pFAM92A1-EGFP转染细胞,分析其蛋白的亚细胞分布。结果:发现了FAM92A1两个新的转录变异体FAM92A1-251、FAM92A1-289,三者结构相似,都具有保守结构域DUF1208;FAM92A1-271、FAM92A1-251和FAM92A1-289过表达均可抑制细胞增殖,改变周期分布且阻碍细胞由S期进入G2期,形成S期阻滞;FAM92A1-271融合蛋白在细胞中的分布与DNA分布基本一致,主要定位于细胞核。结论:FAM92A1基因存在至少9种转录变异体,参与细胞增殖及细胞周期活动调节,是一与细胞周期活动相关的重要基因。

生存素转录变异体在胃癌中的表达及其与细胞增殖、凋亡的关系

目的 研究生存素各转录变异体表达及其与胃癌细胞增殖和凋亡的关系。方法 采用实时荧光定量RT PCR技术 ,对 77例胃恶性肿瘤患者的肿瘤组织和正常胃黏膜的成对冰冻标本进行mRNA定量检测。对相同病例的石蜡标本 ,采用DNA缺口原位末端标记 (TUNEL)技术检测肿瘤细胞凋亡 ,免疫组化 (Ki 6 7)检测细胞增殖。结果 与患者正常胃黏膜比较 ,肿瘤组中 3个转录变异体表达水平显著上调 (P <0 .0 0 0 1)。野生型生存素在胃癌中的表达率为 10 0 .0 % (77/77) ,生存素 2B表达率是 79.2 % (6 1/77) ,并且高表达组为早期胃癌 (P =0 .0 0 1)、分化型胃癌 (P =0 .0 0 7)以及浸润浅的胃癌组织 (P =0 .0 31) ;生存素△Ex3在胃癌中的表达率为 6 4 .9% (5 0 /77) ,并且高表达组的凋亡指数显著降低(P =0 .0 19,r =0 .2 6 7)。本实验未发现生存素的 3个转录变异体表达水平与肿瘤细胞增殖指数相关。结论 生存素 2B的表达与肿瘤的分期、分化和肿瘤浸润深度相关 ,表明生存素 2B可能是野生型生存素和生存素 △Ex3的天然拮抗物 ;同时还发现生存素 △Ex3在胃癌组织中的表达与凋亡指数负相关。

Plunc基因AF172993序列不是complete CDS

目的明确Plunc基因AF172993序列是complete CDS还是transcript variant。方法利用RT-PCR方法扩增Plunc基因CDS区编码序列,将该序列克隆入pEGFP-N1真核表达载体中。正反双向测序分析,所得序列除了与AF172993序列两两比对,还与nr和人类基因组数据库进行比对分析。结果新克隆序列在CDS区658位C取代了AF172993序列A,遗传密码子由AAG改变成CAG,相应氨基酸编码也从Gln变为Lys。与人类基因组比对,Plunc基因CDS区658位C碱基能与人类20号染色体基因组2094188位C碱基完全匹配。结论AF172993序列658位A为突变位点,改变了氨基酸编码,实际为Plunc基因的变异体。GenBank数据库注释该序列错误。

4型登革病毒NS2A蛋白通过UXT-V1逃避宿主免疫的机制研究

目的探讨4型登革病毒NS2A蛋白通过泛转录表达因子剪接变异体1(UXT-V1)逃避宿主免疫的机制。方法在HEK-293T细胞中,4型登革病毒感染后过表达NS2A蛋白,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰素-β(IFN-β)、白细胞介素-8(IL-8)、干扰素诱导蛋白54(ISG54)的表达量;通过荧光素酶报告实验检测NS2A蛋白对IFN-β与核因子κB(NF-κB)通路的影响;通过免疫共沉淀检测NS2A蛋白与UXT-V1的相互作用;通过核蛋白抽取检测IRF3和p65的核定位。结果4型登革病毒NS2A蛋白与宿主UXT-V1存在相互作用。此外,4型登革病毒NS2A蛋白抑制宿主IFN-β、IL-8和ISG54的mRNA水平,阻断IRF3和p65的核转移,抑制宿主IFN-β与NF-κB通路。结论4型登革病毒NS2A蛋白通过与UXT-V1的相关作用阻断宿主固有免疫关键因子IRF3和p65的核定位,抑制宿主IFN-β与NF-κB通路,最终到达其免疫逃避的目的。