黄芪甲苷对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的探究黄芪甲苷对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞损伤的保护作用及对转录启动因子1(SIRT1)/磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)通路的调控机制。方法将肺泡上皮细胞分为对照组、感染组、黄芪甲苷低浓度组(10μmol/L)、黄芪甲苷中浓度组(20μmol/L)、黄芪甲苷高浓度组(40μmol/L)、黄芪甲苷+SIRT1抑制剂组(40μmol/L黄芪甲苷+200 nmol/L EX527)。MTT和BrdU实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;实时荧光定量PCR(qRT-RCR)检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1、AMPK、p-AMPK蛋白的表达。结果与对照组相比,感染组细胞的存活率、BrdU阳性细胞率、Bcl-2 mRNA水平、SIRT1、p-AMPK蛋白表达及p-AMPK/AMPK明显降低(P<0.05),细胞凋亡率、促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量、Bax和cleaved Caspase-3 mRNA表达明显升高(P<0.05);与感染组相比,黄芪甲苷不同浓度处理组细胞的存活率、BrdU阳性细胞率、Bcl-2 mRNA水平、SIRT1、p-AMPK蛋白表达及p-AMPK/AMPK升高(P<0.05),凋亡率以及IL-6、IL-1β、TNF-α的含量、Bax和cleaved Caspase-3 mRNA表达明显降低(P<0.05)。与黄芪甲苷高浓度组相比,黄芪甲苷高浓度+EX527组细胞存活率、BrdU阳性细胞率、Bcl-2 mRNA水平、SIRT1、p-AMPK蛋白表达及p-AMPK/AMPK降低(P<0.05),细胞凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α的含量、Bax和cleaved Caspase-3 mRNA表达升高(P<0.05)。结论黄芪甲苷可以通过调控SIRT1/AMPK通路对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞起到保护作用。