日本血吸虫RNA聚合酶转录因子SⅢ-p15真核正反义表达载体的构建和鉴定

目的 构建日本血吸虫 RNA聚合酶 转录延长因子 S - p15真核正反义表达载体 ,为进一步鉴定该因子的生物学功能奠定基础。方法 采用表达序列标签法从日本血吸虫成虫 c DNA文库中获得了 1个 RNA聚合酶转录因子 (S - p15 )全长 c DNA序列 ,克隆及序列测定后 ,将该片段正向及反向插入到真核表达载体 pc DNA 3中。重组载体采用氨苄青霉素 L B培养基筛选、双酶切、PCR及测序鉴定。结果 经鉴定 ,S - p15 - pc DNA3真核正反义表达载体构建成功。结论 构建成功 S -p15 - pc DNA3真核正反义表达载体 ,为下一步鉴定其生物学功能奠定基础。

茎用莴苣2个WRKYⅢ亚族转录因子基因的克隆与表达

为了揭示WRKYⅢ亚族转录因子基因在茎用莴苣不同生物学过程中的作用,该研究在茎用莴苣品种‘永安红’中克隆得到了2个WRKYⅢ亚族转录因子基因LsWRKY 08和LsWRKY 37,并对其进行了序列比对、进化树构建、qRT-PCR分析、互作网络及启动子分析,为深入研究茎用莴苣WRKYⅢ亚族转录因子的功能、提高茎用莴苣的产量和品质奠定理论基础。结果表明:(1)LsWRKY08和LsWRKY37转录因子分别含有945和930 bp的开放阅读框,分别编码314和309个氨基酸。(2)qRT-PCR分析表明,LsWRKY 08基因在叶片中的表达量比在根和茎中的表达量高,其中在茎膨大过程中,其表达量逐渐降低,而在干旱、高温、低温、盐等非生物胁迫中的表达量均比对照提高,且LsWRKY 08基因在SA处理中表达量较对照明显增加;LsWRKY 37基因在根中的表达量比在叶和茎中高,其在茎膨大过程中的表达模式与LsWRKY 08基因不同,LsWRKY 37基因在不同非生物胁迫下的表达模式存在差异。(3)互作网络分析发现,LsWRKY08和LsWRKY37可与植物防御相关蛋白以及其他转录因子存在互作;启动子鉴定发现,LsWRKY 08和LsWRKY 37基因启动子区存在多个顺式作用元件,其中LsWRKY 37启动子含有W-box元件,表明LsWRKY 37可能与其他WRKY转录因子之间存在自我调节和交叉调节。研究认为,LsWRKY 08和LsWRKY 37基因能响应不同非生物胁迫以及激素处理,但2个基因之间表达模式存在差异,推测同一亚族的转录因子基因功能可能存在差异,且LsWRKY08和LsWRKY37转录因子可通过与其他蛋白相互作用或受其他基因调控来参与不同的生物学过程。

“锌指”结构:蛋白质和DNA相互作用的一种模式

锌指结构是DNA结合蛋白的基本模型之一,它广泛存在于真核细胞与基因调控有关的蛋白质中。文章综述了锌指蛋白的发现、存在、结构模型、与DNA结合特点和生物功能,以及近期的研究重点。

乳腺癌中KiSS-1与核因子-κBp50和基质金属蛋白酶9的表达之相互关系及其临床病理意义

目的探讨KiSS-1、核因子（NF）-κBp50和基质金属蛋白酶9（MMP-9）在乳腺癌组织中的表达和相互关系及其临床病理意义。方法应用免疫组织化学EliVision法检测152例标本（乳腺癌92例，乳腺增生30例，癌旁乳腺30例）和伴有癌转移的腋窝淋巴结54枚中KiSS-1、NF—κBp50及MMP-9蛋白表达情况。应用原位杂交方法检测50例乳腺癌组织、20例癌旁乳腺组织中KiSS-1 mRNA的表达。应用CMIAS真彩图像分析仪对免疫组织化学和原位杂交结果进行积分吸光度（IA）值测定，并计算其平均IA值。结果（1）与癌旁乳腺组织表达比较，KiSS-1基因在乳腺癌组织学分级Ⅰ～Ⅱ级中（13．59±6．24）明显高于Ⅲ级（9．53±4．57）、TNM分期高（Ⅰ～Ⅱ期12．35±6．15，Ⅲ～Ⅳ期7．53±4．93）、在淋巴结转移率高的乳腺癌中的表达减弱（9．61±5．25，无转移组为13．06±5．89）甚至缺失；其在淋巴结转移灶（3．47±1．59）中的表达（IA值）明显低于其相应的原发灶（10．02±3．80）。乳腺癌组织中KiSS-1mRNA表达（10．84±4．90）与KiSS-1蛋白表达（11．67±6．22）有较好的一致性。（2）NF-κBp50、MMP-9在乳腺癌组织中表达上调，其上调程度随着乳腺癌分化程度的降低、TNM分期的增加、淋巴结转移及瘤块增大而逐渐增高。结论KiSS-1蛋白在乳腺癌分化程度低、淋巴结转移组中的表达下降，并分别与NF—κBp50、MMP-9蛋白表达呈负相关；NF-κBp50与MMP-9蛋白在乳腺癌中表达呈正相关，KiSS-1蛋白可能参与了乳腺癌的转移扩散。

我国东北地区两家系原发性开角型青光眼的OPTN基因新突变研究

目的研究我国东北地区两家系原发性开角型青光眼（POAG）的致病基因并确定其基因突变位点。方法病例对照实验。对两家系POAG患者进行临床研究和系谱分析。采集L家系6例患者和6例健康成员与C家系4例患者和4例健康成员的静脉血，提取基因组DNA。通过连锁分析，确定致病基因的染色体位点后，应用聚合酶链反应（PCR）扩增OPTN基因外显子，直接测序确定致病的基因突变位点。结果L家系POAG患者的OPTN基因第10外显子发生错义突变，1274位点AAA变为GAA，对应的赖氨酸替换为谷氨酸（Lys322Glu）。L家系中健康成员、C家系全部成员及87名正常人均未发现该位点突变。结论OPTN基因新突变（Lys322Glu）是L家系POAG的致病基因。

MIR166基因家族在陆生植物中的进化模式分析(英文)

MicroRNA(miRNA)是一类广泛存在于真核生物中的具有转录后水平调控功能的内源非编码小分子RNA。在植物中,miRNA通过对靶基因的剪切或沉默来实现对植物生命活动的调控,它是基因表达调控网络的重要组成部分。miR165/166(miR166)是陆生植物中最为古老的MIRNA家族之一,它通过对3型同源异域型-亮氨酸拉链(HD-ZIP III)等靶标的调控,在植物的众多发育时期起着关键的调控作用。本文分析了MIR166基因在陆生植物中的进化关系,并对MIR166在基部陆生植物小立碗藓(Physcomitrella patens)中的复制及进化进行了研究。此外,HD-ZIP III蛋白是植物中重要的一类转录因子,miR166对HD-ZIP III基因的调控作用在陆地植物保守的存在,本文对HD-ZIP III基因和miR166在进化中的相互作用进行了初步的探讨。

番茄SlHB8基因的克隆及其对非生物胁迫的响应

HD-Zip Ⅲ转录因子家族在植物的生长发育中发挥着重要作用。以Micro-Tom番茄为试材,采用RT-PCR、荧光定量PCR以及生物信息学的方法,研究了番茄SlHB8基因的序列特征、表达模式以及在非生物胁迫下的响应,以期为鉴定SlHB8基因在番茄中的功能奠定基础。结果表明:番茄中含有1个编码HD-Zip Ⅲ转录因子的基因SlHB8。该基因全长2 523 bp,编码841个氨基酸,含有HD、bZip、START和MEKHLA 4个保守结构域,与拟南芥的ATHB8同源性最高。SlHB8在番茄各组织中均有表达,在茎中的表达量最高。高低温、干旱、伤害、乙烯、水杨酸处理均能诱导该基因下调表达,而赤霉素、脱落酸、生长素处理均能使该基因的表达先增加再下降。利用PLACE和PlantCARE对SlHB8启动子区域的顺式作用元件进行预测分析发现,SlHB8启动子含有赤霉素、脱落酸、水杨酸、热激、伤害、干旱等顺式作用元件。表明SlHB8可能在番茄的非生物胁迫应答中发挥重要调控作用。