信号转导和转录激活因子3/CC趋化因子配体2信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响实验研究

目的:探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)/CC趋化因子配体2(CCL2)信号通路对乳腺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人乳腺癌细胞株(HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)。采用蛋白印迹法检测HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1和MCF-10A细胞磷酸化STAT3(p-STAT3)、STAT3、CCL2蛋白表达。选取p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高的人乳腺癌细胞进行后续实验。将MCF-7细胞分为对照组、STAT3抑制剂(WP1066)Ⅰ组(2μmol/L WP1066)、Ⅱ组(4μmol/L WP1066)、Ⅲ组(8μmol/L WP1066)。分别采用细胞计数试剂盒-8、划痕实验、Transwell实验检测MCF-7细胞活力、迁移率及侵袭能力。采用蛋白印迹法检测MCF-7细胞p-STAT3、STAT3、CCL2、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达。结果:与MCF-10A细胞比较,HCC1937、MCF-7、MDA-MB-231、ZR-75-1细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达升高(均P<0.05)。其中MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2蛋白表达最高,因此选用MCF-7细胞进行后续实验。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞活力、迁移率、侵袭数目依次降低(均P<0.05)。与对照组比较,STAT3抑制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组MCF-7细胞p-STAT3/STAT3蛋白比值、CCL2、MMP-2及MMP-9蛋白表达依次降低(均P<0.05)。结论:乳腺癌细胞中STAT3/CCL2呈高表达,抑制STAT3/CCL2信号通路能够降低乳腺癌细胞活力,减少迁移和侵袭。

转录因子二聚化配体3(TFDP3)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌分子分型的相关性研究

目的:本研究旨在分析总结癌-睾丸抗原TFDP3在乳腺癌中的表达规律,探究TFDP3表达与乳腺癌分型及发病进程关系。方法:通过对不同分型及分期的乳腺癌组织切片进行免疫组化检测,分析TFDP3在其中的表达情况,并结合样本来源患者的临床信息,对TFDP3的表达与乳腺癌分子分型、分期及预后的相关性进行统计分析。同时,通过Western Blot检测了5种乳腺癌细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3、T47D及MCF-10A)中TFDP3的表达情况,并通过细胞免疫荧光实验,检测TFDP3在细胞中的定位。结果:TFDP3在已检测的乳腺癌样本中的表达率为49%。乳腺癌临床分子分型标记物HER2的表达与TFDP3的表达呈正相关,但乳腺癌的分期、临床病理分型以及临床分子分型标记物ER、PR的表达均与肿瘤组织中TFDP3的表达无相关性。结论:TFDP3在各在乳腺癌组织中高表达,其表达量与HER2的表达量呈正性相关。这为研究已TFDP3为靶点的乳腺癌免疫治疗,提供了新的依据。

CXC趋化因子配体16和信号转导与转录激活因子3在恶性胃肠道间质瘤组织中的表达及其对患者预后的影响

目的分析恶性胃肠道间质瘤组织中CXC趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16)、信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)表达水平,并探讨其对患者预后的影响。方法选取2014年1月至2017年1月于江苏省苏北人民医院行手术治疗的恶性胃肠道间质瘤患者116例为研究对象,选取其中100例患者相对应的癌旁正常胃肠道组织作为对照。采用免疫组织化学法测定恶性胃肠道间质瘤组织和癌旁正常胃肠道组织中CXCL16、STAT3的表达水平,分析CXCL16、STAT3表达水平与恶性胃肠道间质瘤临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法分析CXCL16、STAT3表达水平与恶性胃肠道间质瘤患者生存状况的关系。采用Cox回归分析影响恶性胃肠道间质瘤患者预后的因素。结果CXCL16、STAT3在恶性胃肠道间质瘤组织中的阳性表达率均显著高于其在癌旁正常胃肠道组织中的阳性表达率(均P<0.05);CXCL16、STAT3在恶性胃肠道间质瘤组织中的表达水平与其病理性核分裂象、危险度分级、浸润深度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。Kaplan-Meier法显示CXCL16阴性恶性胃肠道间质瘤患者平均生存时间显著长于CXCL16阳性恶性胃肠道间质瘤患者(P<0.05),STAT3阴性恶性胃肠道间质瘤患者平均生存时间显著长于STAT3阳性恶性胃肠道间质瘤患者(P<0.05)。Cox回归分析显示,病理性核分裂象、浸润深度、STAT3阳性表达是恶性胃肠道间质瘤患者预后的影响因素(均P<0.05)。结论恶性胃肠道间质瘤组织中CXCL16、STAT3的表达情况与患者预后关系密切,可为评估患者预后提供参考。

微小RNA-338-3p调控信号转导和转录激活因子1对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1表达和细胞凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-338-3p(miR-338-3p)对表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药肺癌细胞株PC-9/GR中程序性死亡配体1(PD-L1)表达和细胞凋亡的影响及相关机制。方法 体外培养PC-9细胞、PC-9/GR细胞,采用0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00μmol/L吉非替尼处理确定用药浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-338-3p表达。将PC-9/GR细胞分为对照组、miR-338-3p NC组(转染miR-338-3p NC)、miR-338-3p组(转染miR-338-3p模拟物)和信号转导和转录激活因子1(STAT1)抑制剂组(转染miR-338-3p模拟物+100μmol/L氟达拉滨)。4组均添加1.00μmol/L吉非替尼,转染后qRT-PCR检测细胞中miR-338-3p表达;MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白印迹(WB)法STAT1、p-STAT1、PD-L1、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 当吉非替尼浓度升高至1.00μmol/L时,PC-9细胞与PC-9/GR细胞增殖率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与PC-9细胞相比,PC-9/GR细胞中miR-338-3p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后,qRT-PCR结果显示,miR-338-3p组、STAT1抑制剂组的miR-338-3p表达水平均高于miR-338-3p NC组、对照组,差异有统计学意义(P>0.05)。与miR-338-3p NC组相比,miR-338-3p组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平降低,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与miR-338-3p组相比,STAT1抑制剂组PC-9/GR细胞增殖率及细胞中PD-L1、Bcl-2蛋白表达水平升高,凋亡率及细胞中p-STAT1/STAT1、Bax蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-338-3p可抑制EGFR-TKI耐药肺癌细胞株PC-9/GR细胞中PD-L1表达,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与激活STAT1有关。

IFN-γ通过激活STAT3促进甲状腺上皮细胞分泌CXC趋化因子配体10(CXCL10)

目的探讨γ干扰素(IFN-γ)对甲状腺细胞分泌趋化因子的作用及机制。方法 HE染色检测桥本甲状腺炎组织中淋巴细胞浸润情况,免疫组织化学染色检测IFN-γ的表达。用500 U/mL IFN-γ处理Nthy-ori 3-1甲状腺细胞后,利用Western blot法检测信号转导子及转录激活子3(STAT3)及磷酸化的STAT3的水平。用STAT3抑制剂Stattic处理后,ELISA测定CXC趋化因子配体10(CXCL10)的变化,TranswellTM法检测淋巴细胞的迁移能力。结果与正常甲状腺组织比较,桥本甲状腺炎组织中淋巴细胞浸润较多,IFN-γ表达水平较高。与对照组比较,IFN-γ处理增加甲状腺细胞p-STAT3水平,增加CXCL10分泌和淋巴细胞迁移,而Stattic处理后CXCL10分泌减少,淋巴细胞迁移减少。结论 IFN-γ激活STAT3促进甲状腺上皮细胞分泌趋化因子,增加淋巴细胞的迁移。

趋化因子配体21对小鼠脑出血后继发性炎性损伤的作用研究

目的研究趋化因子配体21(CCL21)在小鼠脑出血后继发性脑损伤中的作用。方法将60只C57BL/6J小鼠采用简单随机方法分为假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组)及脑出血CCL21单抗干预组(ICH+anti-CCL21组),每组20只。采用基底节区注射Ⅶ型胶原酶法,建立小鼠脑出血模型。小鼠脑出血后72 h对3组小鼠进行神经损伤功能评分,干湿重法检测患侧半脑脑组织含水量,尼氏染色检测神经细胞损伤,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测Janus激酶2(JAK2)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路蛋白变化情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血肿灶周肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-4、IL-10的基因表达水平。结果与Sham组比较,ICH组小鼠神经功能评分增高[(15.0±1.0)分比(2.4±0.9)分],脑水肿加重,神经细胞损伤增加,神经细胞凋亡增多,差异均有统计学意义(均P<0.05)。小鼠脑血肿灶周围组织的p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高,促炎因子TNF-α、IL-1β的基因表达水平增加,抗炎因子IL-4、IL-10的基因表达水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与ICH组比较,采用CCL21单抗干预的脑出血小鼠神经功能损伤评分[(9.2±1.3)分]降低,脑水肿程度减轻,神经细胞损伤减少及神经细胞凋亡减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。CCL21单抗干预可明显增加小鼠脑血肿灶周围组织的p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,减少促炎因子TNF-α、IL-1β的基因表达水平,同时增加抗炎因子IL-4、IL-10的基因表达水平,差异均有统计学意义(均P<0.05)。JAK2、STAT3蛋白的表达水平在各组中均相对稳定,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论CCL21单抗干预显著减少了小鼠脑出血后的神经功能损害,可能是通过激活JAK2/STAT3从而抑制其下游炎性因子TNF-α、IL-1β而引起,提示了脑出血后继发性神经炎性反应的病理生理机制,为脑出血的治疗提供了可能的实验依据和分子靶点。

血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平在急性心肌梗死患者经皮冠状动脉介入术后近期预后预测中的价值

目的 探讨血清可溶性髓样细胞触发受体样转录因子-1(sTLT-1)、C-X3-C趋化因子配体1(CX3CL1)、N-末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)水平在急性心肌梗死(AMI)患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后近期预后预测中的价值。方法 选取116例行PCI治疗的AMI患者作为研究对象,其中术后3个月内发生不良心血管事件的患者为预后不良组(34例),未发生不良心血管事件的患者为预后良好组(82例)。比较两组一般临床资料,以及术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平。应用二元logistic回归分析AMI患者PCI术后预后不良的影响因素,分析不同血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP差值水平AMI患者预后不良的相对危险度。结果 两组左室射血分数(LVEF)、支架数目、支架直径差异均有统计学意义(均P<0.05);预后不良组术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平均高于预后良好组,术后1d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平差值均低于预后良好组(均P<0.05);LVEF、支架数目、支架直径,以及术后1 d、术后1个月血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平及其差值均是AMI患者PCI术后预后不良的危险因素(均P<0.05);血清ΔsTLT-1、ΔCX3CL1、ΔNT-proBNP高水平患者预后不良的危险度是低水平者的0.462、0.336、0.417倍。结论 血清sTLT-1、CX3CL1、NT-proBNP水平为AMI患者PCI术后预后不良的独立危险因素,其水平变化情况可帮助临床预测预后。

E2F1对TFDP3表达的调控及其对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响

目的:构建含TFDP3基因启动子和荧光素酶报告基因的重组载体pGL3-TFDP3-promoter,观察E2F1对TFDP3转录及表达的调控作用以及TFDP3对E2F1诱导肿瘤细胞凋亡的影响。方法:以人前列腺癌PC3细胞系基因组DNA为模板,PCR扩增TFDP3启动子序列并克隆入荧光素酶报告基因载体,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA瞬时单独或共同转染PC3细胞,测定荧光素酶活性以观察E2F1对TFDP3启动子的调控作用,Western blotting检测pCMV-E2F1-HA转染对PC3细胞内TFDP3表达的影响,流式细胞术检测TFDP3与E2F1相互作用对前列腺癌细胞凋亡的影响。结果:成功构建TFDP3基因启动子重组质粒pGL3-TFDP3-promoter,与E2F1表达载体pCMV-E2F1-HA共转染PC3细胞后,TFDP3启动子诱导的荧光素酶活性较单独转染pGL3-TFDP3-promoter显著升高[(1.14±0.06)vs(0.61±0.05),P<0.05]。转染pCMV-E2F1-HA的PC3细胞的TFDP3蛋白表达是未转染细胞的2.7倍[(0.24±0.03)vs(0.09±0.02),P<0.05]。pCMV-E2F1-HA转染后PC3细胞凋亡率较未转染组显著上升[(7.10±0.003)%vs(2.66±0.001)%,P<0.05],而pCMV-E2F1-HA与pcDNA3.1-TFDP3共转染后细胞凋亡率较pCMV-E2F1-HA组显著下降[(4.92±0.002)%vs(7.10±0.003)%,P<0.05]。结论:E2F1可增强TFDP3启动子的活性,增加TFDP3蛋白的表达,其可能通过此机制抑制E2F1诱导的前列腺癌细胞凋亡。

PD-L1和FOXP3在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的探讨程序性死亡配体1(PD-L1)和叉头翼螺旋转录因子3(FOXP3)在甲状腺乳头状癌(PTC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集2018年1月至2020年2月接受甲状腺切除术患者的组织标本160例,其中PTC 140例,结节性甲状腺肿20例。采用免疫组化染色法检测PTC和结节性甲状腺肿组织中PD-L1和FOXP3的表达情况,分析两者表达与PTC临床病理特征的关系以及两者表达的相关性。结果纳入的140例PTC病例中,86例PD-L1阳性表达,其中低表达37例、中表达26例、高表达16例、极高表达7例,PD-L1表达阳性率为61.4%;84例FOXP3阳性表达,其中低表达37例、中表达19例、高表达8例、极高表达20例,FOXP3的阳性表达率为60.0%。在结节性甲状腺肿组织中,PD-L1和FOXP3表达均为阴性,与两者在PTC组织中的表达水平比较,差异有统计学意义(P=0.000,P=0.001)。PD-L1表达与TNM分期、包膜侵犯、腺外侵犯、远处转移和合并桥本氏甲状腺炎(HT)有关(P<0.05),与年龄、性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移和肿瘤病灶无关(P>0.05)。FOXP3表达与年龄、包膜侵犯、腺外侵犯和TNM分期有关(P<0.05),而与性别、T分期、中央区淋巴结转移、侧方淋巴结转移、肿瘤病灶、远处转移和合并HT均无关(P>0.05)。在PTC组织中,PD-L1与FOXP3表达呈正相关(r=0.732,P=0.000)。结论PD-L1和FOXP3在PTC组织中表达上调,两者表达与TNM分期和肿瘤局部浸润有关,且两者表达呈正相关。

人PD-L1基因启动子区STAT3结合元件的筛选

目的:检查信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)对人胶质瘤细胞程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)基因转录和表达的影响,同时筛选PD-L1基因启动区可能的STAT3结合元件。方法:培养U251细胞,给予STAT3抑制剂(BP-1-102)或DMSO处理,9 h后用流式细胞术检查细胞表面PD-L1蛋白的表达情况。将PD-L1基因启动子全长荧光素酶报告质粒(pGL3-PD-L1-FL)转染U251细胞,再给予BP-1-102或DMSO处理,9 h后检查细胞内荧光素酶活性。将PD-L1基因启动子全长和各截短(pGL3-PD-L1-1~4)荧光素酶报告质粒和STAT3过表达质粒(pCMV-STAT3)共转染HEK293细胞,再测定荧光素酶活性,初步确定STAT3的结合区域。应用生物信息学软件预测PD-L1基因启动子上STAT3的结合元件,并开展结合元件突变实验确定有效性。结果:BP-1-102可明显下调U251细胞中PD-L1的基因转录和蛋白表达。此外,将pGL3-PD-L1-FL、pGL3-PD-L1-1~4和pCMV-STAT3共转染HEK293细胞后,pGL3-PD-L1-4的启动活性显著低于其他质粒,提示STAT3可能结合于PD-L1基因启动子-200~0 nt区域。生物信息学软件预测发现,此区域含有2个STAT3的结合元件,分别位于-194^-184 nt和-135^-125 nt部位。进一步研究揭示突变-194^-184 nt和-135^-125 nt元件均可显著下调pGL3-PD-L1-FL的荧光素酶活性,联合突变更为明显。结论:本研究成功筛查出STAT3在人PD-L1基因启动子上的可能结合区域,为后续研究胶质瘤细胞中STAT3相关的PD-L1基因转录调控奠定了基础。

氟化物对成骨细胞OPGL mRNA和M-CSF mRNA表达的影响

目的 探讨氟对成骨细胞的骨保护蛋白配体 (OPGL)mRNA和巨噬细胞集落刺激因子 (M CSF)mR NA表达的影响。方法 应用酶消化法分离小鼠乳鼠成骨细胞 ,取第 3代成骨细胞 ,加入不同浓度的氟 6h ,提取细胞总RNA ,通过逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,观察成骨细胞分泌的OPGL和M CSF表达的变化。结果 在氟的作用下 ,成骨细胞的OPGLmRNA和M CSFmRNA的表达呈上升趋势 ,但未达到统计学差异水平。结论 氟有可能通过上调OPGL和M CSF的表达 。

雌激素受体β基因多态性与血脂水平的研究

目的:探讨中国人群雌激素受体β(ERβ)基因多态性的分布情况及其与血脂水平的关系。方法:采用PCR-RFLP技术检测湖北地区131例正常人的ERβ基因RsaI和AluI酶切多态性,同时检测血脂水平。结果:分析ERβ基因RsaI和AluI两个酶切位点的基因多态性,分别以Rr型、aa型最多,而以RR型、AA型最少,其分布在男女组间无显著性差异(P>0.05)。ERβRsaI和AluI不同基因型间血清TC、TG、HDL-C、LDL-C、apoAI、apoB水平均有一定差异,但无统计学意义(P>0.05)。结论:ERβ基因RsaI和AluI酶切多态性可能不影响人群的血脂水平。

食管癌组织中PD-L1、Vim、Zeb1的表达与放疗敏感性的关系分析

目的研究食管癌(EC)癌组织中程序性死亡受体配体1(PD-L1)、波形蛋白(Vim)和锌指结构E-box结合蛋白1(Zeb1)表达水平与放疗敏感性的关系。方法选取2016年10月至2019年10月本院中晚期EC患者106例,行食管肿瘤胃镜活检并将标本进行免疫组化分析,然后采用三维适形调强放疗(IMRT)进行根治性放疗,根据放疗后4周时疗效将患者分为敏感组和耐受组,比较两组免疫组化分析结果并分析各指标与EC放疗敏感性的关系。结果106例EC患者放疗效果显示完全缓解(CR)37例,部分缓解(PR)34例,稳定(SD)23例,进展(PD)为12例,敏感组(CR+PR)癌组织程序性死亡受体配体1(PD-L1)、波形蛋白(Vim)、锌指结构E-box结合蛋白1(Zeb1)和信号传导和转录激活因子3(STAT3)阳性率均低于耐受组,差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示肿瘤最大径>1.5 cm、分化程度低以及PD-L1、Vim、Zeb1和STAT3阳性是EC放疗敏感性的独立危险因素,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman秩相关分析显示,EC患者肿瘤组织PD-L1、Vim和Zeb1阳性率与STAT3均呈明显正相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EC肿瘤组织PD-L1、Vim和Zeb1蛋白在放疗耐受患者中阳性表达率更高,且其与放疗敏感相关蛋白STAT3表达水平具有明显正相关性,可作为评估EC放疗敏感性的参考指标。

瘦素对TRAIL诱导大鼠肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的了解瘦素对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及调控机制。方法 MTT比色法、流式细胞术检测瘦素对外源性TRAIL诱导HSC-T6细胞增殖和细胞凋亡的影响;采用Western印迹检测信号传导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(pSTAT3)、Bcl-2。结果 TRAIL抑制HSC-T6细胞增殖、诱导HSC-T6细胞凋亡,而瘦素使TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡明显减少(P<0.05);当TRAIL诱导HSC-T6细胞凋亡时加入瘦素,pSTAT3、Bcl-2表达上调。结论瘦素可以使外源性TRAIL诱导的HSC-T6细胞凋亡减少,可能与瘦素促使STAT3磷酸化,Bcl-2表达上调有关。

基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型的建立

目的构建信号传导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription factor 3,STAT3)二聚化抑制剂筛选模型,为STAT3抑制剂筛选提供实验方法。方法分别构建pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体,利用脂质体转染技术将二者共转入HEK-293T细胞,利用ECFP和EYFP 2种荧光蛋白之间能量共振转移,检测磷酸化STAT3分子的二聚化水平,并检测Stattic对二聚化的影响。结果成功构建了pECFP-N1-STAT3和pEYFP-N1-STAT3的荧光报告载体。将2种荧光报告载体共转染HEK-293T细胞后,Western Blot检测结果显示STAT3以及p-STAT3的表达水平明显增加。以458nm波长激发ECFP,其发射波长可激发EYFP。加入STAT3二聚化抑制剂Stattic后,荧光强度降低,且呈现一定的剂量依赖性。结论基于荧光共振能量转移技术的STAT3二聚化抑制剂筛选模型构建成功。

程序性死亡受体-配体1抑制药联合洛铂对卵巢癌细胞上皮间质转化的作用

目的探究抑制程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达联合洛铂对卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,并将细胞分为对照组(不做处理)、洛铂组(0.5μg·mL^(-1)洛铂处理24 h)、洛铂+NC组(转染NC inhibitor慢病毒质粒后使用0.5μg·mL^(-1)的洛铂处理细胞24 h)和洛铂+inhibitor组(转染PD-L1 inhibitor慢病毒质粒后使用0.5μg·mL^(-1)的洛铂处理细胞24 h)。用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞存活率;用平板克隆形成实验检测细胞增殖;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况;用TUNEL法检测细胞凋亡率。结果对照组、铂组、洛铂+NC组、洛铂+inhibitor组细胞克隆形成数分别为(443.45±24.37)、(271.46±20.44)、(268.38±19.98)和(126.35±14.26)个,增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达水平分别为0.95±0.07、0.70±0.08、0.71±0.06和0.38±0.04,TUNEL阳性细胞率分别为(4.06±0.31)%、(9.39±0.52)%、(9.68±0.49)%、(20.37±1.67)%,上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)蛋白水平分别为0.31±0.05、0.52±0.05、0.53±0.04和0.91±0.07,N-钙黏着蛋白(N-cadherin)蛋白表达水平分别为0.98±0.10、0.70±0.07、0.68±0.08和0.29±0.04,磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)蛋白水平分别为0.88±0.07、0.65±0.04、0.63±0.05和0.31±0.04,洛铂组、洛铂+NC组、洛铂+inhibitor组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),洛铂+inhibitor组上述指标与洛铂组、洛铂+NC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PD-L1抑制药联合洛铂可显著抑制细胞增殖、EMT并诱导凋亡,这可能与抑制JAK2/信号转导与转录激活因子3(STAT3)通路有关。

p-STAT3、PD-L1在膀胱尿路上皮癌中的表达及与临床病理特征的关系

目的探讨磷酸化信号转导和转录活化因子3(p-STAT3)、程序性死亡分子1配体(PD-L1)在膀胱高级别浸润性尿路上皮癌组的表达及其临床意义。方法选取上海市第一人民医院病理中心2013年1月至2018年12月病理诊断的膀胱高级别浸润性尿路上皮癌患者74例,采用免疫组织化学法检测p-STAT3、PD-L1表达情况;采用Pearson相关分析膀胱高级别浸润性尿路上皮癌组织p-STAT3、PD-L1表达相关性;收集患者临床病理资料,分析p-STAT3、PD-L1表达与患者临床病理特征的关系。结果膀胱高级别浸润性尿路上皮癌组织p-STAT3、PD-L1阳性率分别为63.5%、66.2%;膀胱高级别浸润性尿路上皮癌组织p-STAT3与PD-L1表达呈正相关(r=0.248,P=0.033);p-STAT3、PD-L1阳性表达与患者肿瘤分期有关(P<0.05)。结论膀胱高级别浸润性尿路上皮癌组织p-STAT3、PD-L1表达上调,p-STAT3可能参与PD-L1的表达调控。

延胡索酸水合酶缺陷型肾细胞癌中PD-L1表达及其临床病理免疫特征

目的探讨延胡索酸水合酶(FH)缺陷型肾细胞癌的细胞程序性死亡配体1(PD-L1)的表达情况、临床病理特征、免疫组织化学表达及分子特征,探寻免疫治疗在FH缺陷型肾细胞癌中的应用前景。方法对福建医科大学附属第一医院2020年1月至2022年10月收集的6例FH缺陷型肾细胞癌的PD-L1表达情况、临床资料、组织学形态、免疫表型、二代测序基因检测进行总结并随访预后。结果患者均为男性,年龄37~72岁,平均年龄45.7岁。4例高级别FH缺陷型肾细胞癌病例均可见2种或2种以上的结构混杂存在,以乳头状结构最常见,还可见到腺管状、腺泡状、筛状、巢团状、囊性变、实性结构混杂存在,癌细胞WHO/国际泌尿病理协会(ISUP)核分级为3~4级。2例低级别FH缺陷型肾细胞癌病例表现为巢团状、腺管状排列,嗜酸性、絮状胞质及小的胞质内空泡。6例2-琥珀酸半胱氨酸(2SC)均为强阳性,5例FH表达丢失、GATA3阳性,4例高级别病例肿瘤浸润的CD4、CD8阳性的T淋巴细胞平均值分别是180.3/mm^(2)、130.5/mm^(2),PD-L1联合阳性评分(CPS)分别是20、50、5、30,Ki-67阳性指数分别为20%、20%、10%、30%;2例低级别病例肿瘤浸润的CD4、CD8阳性的T淋巴细胞平均值分别是123.0/mm^(2)、100.5/mm^(2),PD-L1 CPS评分均为1,Ki-67阳性指数均为3%。高通量测序3例检测到FH基因体系突变,2例检测到FH基因胚系突变,1例未测出FH基因突变。结论FH缺陷型肾细胞癌以高级别形态常见,低级别形态少见。FH和2SC是诊断FH缺陷型肾细胞癌特征性的免疫组织化学标志物,GATA3阳性对诊断具有提示作用。高级别FH缺陷型肾细胞癌肿瘤浸润的CD4、CD8阳性的T淋巴细胞增加,PD-L1高表达,抗PD-L1免疫治疗将可作为患者的治疗选择。

苦参碱对K562细胞NKG2D配体表达的影响及其机制研究

目的 探讨苦参碱对白血病细胞表面NK细胞活化性受体凝集素样同型二聚体（NKG2D）配体表达的影响及可能的分子机制.方法 用流式细胞术检测苦参碱处理前后慢性髓性白血病细胞系K562细胞表面NKG2D四种配体分子MICA/B、ULBP1、2、3表达的改变,观察不同浓度苦参碱作用后K562细胞对人NK细胞杀伤的敏感性.Western blot分析苦参碱处理前后K562细胞信号转导与转录活化因子3（STAT3）表达的改变.结果 与未处理组相比,苦参碱处理可显著诱导K562细胞表面ULBP1和ULBP2分子的表达,尤以ULBP2增高最为显著.0.8 mg/ml苦参碱处理后,K562细胞ULBP1和ULBP2表达平均荧光强度（MFI）由处理前的220和615分别增加至429和1 614,MICA/B和ULBP3表达则无明显改变.苦参碱（浓度分别为0.2、0.5和0.8 mg/ml）处理可增强NK细胞对K562细胞的杀伤作用.效靶比5：1时,NK细胞对K562细胞杀伤百分率由处理前的29.2％分别增加至32.8％、38.1％和40.5％.苦参碱对K562细胞STAT3总蛋白表达没有明显影响,但可显著抑制磷酸化STAT3水平.结论 苦参碱可诱导K562细胞NKG2D的配体表达上调,增强K562细胞对NK细胞杀伤敏感性,其分子机制与细胞内STAT3的活性抑制相关.

尖锐湿疣患者疣体病变皮损组织中Fas、FasL及Foxp3表达与HPV DNA载量的相关性研究

目的探讨尖锐湿疣患者皮损组织中人凋亡相关因子(Fas)、人凋亡相关因子配体(FasL)及翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)表达与HPV DNA载量的相关性。方法选择2015年1月-12月在医院治疗的尖锐湿疣患者皮损组织100份为尖锐湿疣组,选择包皮环切术正常包皮组织50例为正常包皮组;HPV DNA采用PCR荧光检测,Fas、FasL及Foxp3采用免疫组化法检测;比较尖锐湿疣组织与正常包皮组织中Fas、FasL及Foxp3表达,比较不同HPV DNA载量尖锐湿疣组织中Fas、FasL及Foxp3表达,分析Fas、FasL及Foxp3表达与HPV DNA载量的相关性。结果尖锐湿疣组织中Fas阳性率显著低于正常包皮组(P<0.05),而FasL阳性率显著高于正常包皮组(P<0.05);HPV DNA高载量组Fas阳性率显著低于低载量组,而FasL显著高于低载量组(P<0.05);尖锐湿疣组Foxp3阳性标记指数及阳性率显著高于正常包皮组(P<0.05);HPV DNA高载量组Foxp3阳性标记指数及阳性率显著高于低载量组(P<0.05);相关性分析结果显示:尖锐湿疣组织中Fas表达与HPV DNA载量呈显著负相关(r=-0.281);FasL与HPV DNA载量呈显著正相关(r=0.346);Foxp3与HPV DNA载量呈显著正相关(r=0.413)。结论尖锐湿疣组织中Fas表达下降,与HPV DNA呈负相关,FasL及Foxp3表达上升,与HPV DNA呈正相关。