YTH结构域家族蛋白2和叉头蛋白转录因子3在肺腺癌中的表达关系研究

目的 分析YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)及叉头蛋白转录因子3(FOXO3)在肺腺癌病人中的表达及与预后的关系。方法 收集2020年1月至2021年5月在郑州大学第一附属医院行手术治疗的肺腺癌病人癌组织及对应的癌旁组织(距离癌组织5 cm以上)80对,收集病人临床病理资料;利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库查询YTHDF2、FOXO3基因在肺腺癌中的表达水平;采用免疫组织化学法检测YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的表达情况;分析YTHDF2、FOXO3蛋白水平与肺腺癌病人临床病理资料的关系;分析肺腺癌中YTHDF2与FOXO3基因表达水平的相关性;对病人进行为期3年的随访,分析病人3年累积生存率。结果 YTHDF2、FOXO3蛋白在肺腺癌组织中的高表达率分别为34.00%、26.00%,明显低于癌旁正常组织中79.48%、61.54%(P<0.05)。YTHDF2蛋白表达情况与肺腺癌病人年龄、淋巴结转移和分化程度相关(P<0.05);与TNM分期、性别无关(P>0.05);FOXO3蛋白表达情况与肺腺癌病人性别和分化程度相关(P<0.05);肺腺癌组织中YTHDF2蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为53.30%、14.00%,经log-rank比较,差异有统计学意义(P<0.05);FOXO3蛋白高表达组和低表达组病人3年累积生存率分别为64.50%、12.20%,经Log-Rank比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 YTHDF2、FOXO3在肺腺癌组织中均低表达,与病人肿瘤分化程度及3年累积生存率有关,有望成为评估肺腺癌病人预后的生物标志物。

雌激素对卵巢颗粒细胞雌激素受体-β和转录因子叉头蛋白3表达的影响

目的探讨雌激素(E2)对雌激素受体-β(ER-β)与转录因子叉头蛋白3(FoxO3)的表达及其对卵巢颗粒细胞增殖与凋亡的影响。方法利用添加1μmol/L的E2或100 nmol/L ICI182.780的TCM199培养基体外培养卵巢颗粒细胞;采用WST比色法检测不同培养条件下卵巢颗粒细胞的增殖;RT-PCR和Real-time PCR检测ER-β与FoxO3 mRNA的表达,采用细胞免疫荧光和Western blotting检测ER-β与FoxO3的表达。结果 E2能促进卵巢颗粒细胞增殖,而ICI182.780抑制卵巢颗粒细胞增殖;RT-PCR扩增结果与理论值符合,Real-time PCR结果显示,ICI182.780与E2比较,ER-βmRNA表达下调,FoxO3 mRNA表达上调(P<0.05);Western blotting法结果显示,ER-β和FoxO3蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),灰度值分析显示添加E2中ER-β蛋白表达升高,FoxO3蛋白下降(P<0.05),添加ICI182.780中的ER-β表达下调,FoxO3表达上调,与E2比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E2可提高ER-β的表达,降低FoxO3的表达,影响卵巢颗粒细胞的增殖与凋亡。

转录因子叉头框蛋白O3a对前列腺癌细胞上皮间质转化的影响

目的探讨转录因子叉头框蛋白O3a(FOXO3a)对前列腺癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞LNCaP、DUl45、PC-3中FOXO3a表达水平,选择FOXO3a表达最低的前列腺癌细胞系转染pcDNA-FOXO3a、pcDNA-NC构建FOXO3a过表达细胞系(pc-FOXO3a)和阴性对照(NC),采用MTT法、流式细胞法检测细胞活性和凋亡情况,Transwell试验、划痕试验检测细胞侵袭和迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测钙黏附蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)、Snail、c-Myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、剪切型胱天蛋白酶-3(Cleaved-Cas-3)、Bcl-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt1水平。运用氯化锂(Wnt/β-catenin信号通路激活剂)作用于pcDNA-FOXO3a前列腺细胞,分析细胞活性、凋亡和上皮间质转换(EMT)情况。结果LNCaP、DUl45、PC-3细胞中FOXO3a表达水平均显著低于RWPE-1细胞[(0.23±0.04)、(0.53±0.05)、(0.42±0.06)比(1.02±0.08)](P<0.05),其中LNCaP细胞中FOXO3a表达水平最低。pc-FOXO3a LNCaP细胞活性、单个视野细胞侵袭数目、划痕迁移率显著低于NC LNCaP细胞(P<0.05),细胞凋亡率显著高于NC LNCaP细胞(P<0.05);pc-FOXO3a LNCaP细胞N-cadherin、Vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、Wnt1水平显著低于NC LNCaP细胞(P<0.05),而E-cadherin、Cleaved-Cas-3、Bax水平显著高于NC LNCaP细胞(P<0.05)。LiCl-pc-FOXO3a LNCaP细胞活性、单个视野细胞侵袭数目、划痕迁移率、N-cadherin、Vimentin、Snail水平显著高于LiCl-pc-FOXO3a-Ctrl LNCaP细胞(P<0.05),细胞凋亡率、E-cadherin水平显著低于LiCl-pc-FOXO3a-Ctrl LNCaP细胞(P<0.05)。结论FOXO3a表达升高可降低前列腺癌细胞活性、促进细胞凋亡,抑制细胞EMT,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。

AMP依赖的蛋白激酶/叉头转录因子O3a信号通路及氧化应激介导紫铆因诱导人食管癌细胞凋亡作用的研究

目的探讨紫铆因(Butein)诱导人食管癌EC109细胞凋亡的作用及AMP依赖的蛋白激酶(AMPK)/叉头转录因子O3a(FOXO3a)信号通路、氧化应激在该过程中发挥的作用。方法常规培养EC109细胞,分别给予Butein处理,首先检测EC109细胞的活力、迁移能力、氧化应激水平及凋亡指标Caspase 3的活性。采用Western blot法检测细胞内AMPK、FOXO3a的磷酸化水平及凋亡调节蛋白Bim、Bcl2相关X蛋白(Bax)的表达水平。用Compound C阻断AMPK后检测相关指标。建立裸鼠皮下肿瘤模型,给予Butein和Compound C处理,检测裸鼠体重和肿瘤体积。结果 Butein处理后,细胞活力下降(P<0.05);细胞间距增加(P<0.05);Caspase 3活性、NADPH氧化酶活性、ROS含量升高(P<0.05);总GSH下降,提示凋亡增加、氧化应激增强;p-AMPK磷酸化水平、p-FOXO3a磷酸化水平升高(P<0.05);Bim、Bax表达升高(P<0.05);Compound C处理逆转了这一过程。裸鼠皮下肿瘤检测发现Butein抑制在体肿瘤增殖,阻断AMPK可以逆转该抑制作用。结论 Butein能显著促进食管癌EC109细胞凋亡。该作用可能是通过激活AMPK/FOXO3a信号通路来实现的。

叉头框转录因子D3蛋白表达与胃癌相关病理学参数的关联性

目的:探讨叉头框转录因子D3(FOXD3)蛋白表达与胃癌相关病理学参数的关联性。方法:选取2018-03~2019-11我院胃癌患者109例,对比胃癌组织及癌旁组织FOXD3蛋白阳性率,对比不同病理参数(性别、年龄、肿瘤直径、分化程度、临床分期、浸润深度、是否有淋巴结转移)FOXD3蛋白阳性表达情况,分析FOXD3蛋白阳性率与胃癌病理学参数关系。结果:胃癌组织FOXD3蛋白阳性率78.90%(86/109)高于癌旁组织28.44%(31/109,P<0.05);低分化程度、浸润程度T3~T4、淋巴结转移患者FOXD3蛋白阳性率高于中高分化程度者、浸润程度T1~T2、无淋巴结转移者,差异有统计学意义(P<0.05);中、低分化程度FOXD3蛋白阳性率是高分化的5.143倍;浸润程度为T3~T4是T1~T2的2.909倍;有淋巴结转移是无淋巴结转移的1.966倍,分化程度、浸润程度、淋巴结转移与FOXD3蛋白阳性率显著相关(P<0.05)。结论:胃癌患者FOXD3蛋白呈异常高表达,且其表达与分化程度、浸润程度、淋巴结转移密切相关,临床可据此判断患者病情程度,为制定针对性治疗措施提供参考依据。

电针对失神经大鼠腓肠肌中叉头蛋白转录因子3A/肌萎缩F-box蛋白及成肌分化抗原的影响

目的:观察电针干预对失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中叉头蛋白转录因子3A(fork-head protein,FOXO3A)、肌萎缩F-box蛋白(muscle atrophy F-box,MAFbx)和成肌分化抗原(myogenic differentiation antigen,Myod1)蛋白及基因表达的影响,探讨电针延缓大鼠失神经肌萎缩的可能机制。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,每组6只。采用钳夹坐骨神经法制备大鼠失神经腓肠肌萎缩模型。电针组选取大鼠术侧"足三里""环跳"穴进行治疗,每日1次,每次10min,连续干预14d后取材。计算各组大鼠腓肠肌湿重比,HE染色测定大鼠术侧腓肠肌纤维截面积和直径,Western blot检测大鼠术侧腓肠肌中FOXO3A、MAFbx、Myod1蛋白的相对表达量,实时荧光定量PCR检测大鼠术侧腓肠肌中FOXO3A、MAFbx及Myod1mRNA的相对表达量。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径均显著下降(P<0.01),电针组高于模型组(P<0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌中FOXO3A、MAFbx、Myod1蛋白及mRNA表达量显著升高(P<0.01);与模型组相比,电针干预后FOXO3A、MAFbx蛋白及mRNA表达量显著降低(P<0.01),Myod1蛋白及mRNA表达量显著升高(P<0.01)。结论:电针可能通过抑制FOXO3A、MAFbx的表达同时上调Myod1的表达,影响骨骼肌蛋白水解的速率和肌卫星细胞分化的水平,在延缓失神经肌萎缩的同时促进肌萎缩修复。

联合检测外周血TIRAP、FOXO3a、HBP预测脓毒症患者近期预后的价值及意义

目的探讨联合检测外周血TOLL/白介素-1受体相关蛋白(TIRAP)、叉头蛋白转录因子3a(FOXO3a)、肝素结合蛋白(HBP)对脓毒症患者近期预后的预测价值。方法回顾性收集2020年1月—2022年12月本院205例脓毒症患者的临床资料,根据28 d生存情况分为生存组157例、死亡组48例。统计两组外周血TIRAP、FOXO3a、HBP及急性生理功能和慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)、序贯器官衰竭评估(SOFA)评分。分析TIRAP、FOXO3a、HBP与APACHEⅡ、SOFA评分的相关性。采用Logistic回归方程分析TIRAP、FOXO3a、HBP交互作用对脓毒症近期预后的影响。评价TIRAP、FOXO3a、HBP联合预测脓毒症近期预后的价值。结果死亡组入院第1、3、7天外周血TIRAP、HBP水平及APACHEⅡ、SOFA评分高于生存组,FOXO3a水平低于生存组(P<0.05);入院第1天,脓毒症死亡患者TIRAP、HBP水平与APACHEⅡ、SOFA评分呈正相关,FOXO3a与APACHEⅡ、SOFA评分呈负相关(P<0.05);TIRAP×FOXO3a×HBP在脓毒症近期预后中存在交互作用(P<0.05);入院第1天外周血TIRAP+FOXO3a+HBP联合预测预后的曲线下面积(AUC)大于TIRAP+FOXO3a、TIRAP+HBP、FOXO3a+HBP,预测效能更佳(P<0.05)。结论脓毒症预后不良患者外周血TIRAP、HBP水平升高,FOXO3a水平降低,其水平变化与病情严重程度、近期预后有关,联合检测其水平可提高近期预后的预测效能。

DNA甲基转移酶1和叉头蛋白转录因子O亚型3a在结肠癌中的表达关系研究

目的通过检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和叉头蛋白转录因子O亚型(FOXO)3a在结肠癌患者血清中的水平,分析两者在结肠癌中的关系以及联合检测预测结肠癌发生的诊断效能。方法选取2019年9月至2020年9月西安国际医学中心医院确诊并收治的结肠癌患者105例作为结肠癌组,65例同期经活检确诊的结肠息肉患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中DNMT1、FOXO3a水平;Pearson相关分析结肠癌患者血清中DNMT1、FOXO3a的相关性;采用受试者工作特征曲线对DNMT1、FOXO3a水平在结肠癌中的诊断价值进行评估。结果对照组与结肠癌组患者血清中DNMT1水平分别为0.93±0.28和1.34±0.35,与对照组相比,结肠癌组患者中DNMT1水平显著升高,差异具有统计学意义(t=7.990,P<0.001);两组患者血清中FOXO3a水平分别为1.04±0.39和0.69±0.18,与对照组相比,结肠癌组患者中FOXO3a水平降低,差异具有统计学意义(t=7.940,P<0.001)。DNMT1和FOXO3a的水平在结肠癌患者血清中呈负相关(r=-0.687,P<0.001)。DNMT1预测结肠癌发生的曲线下面积(AUC)为0.843,敏感性为71.40%,特异性为90.80%;FOXO3a预测结肠癌发生的AUC为0.812,敏感性为88.60%,特异性为67.70%;二者联合预测结肠癌发生的AUC为0.859,敏感性为89.50%,特异性为92.30%;与FOXO3a单独检测相比,二者联合检测对结肠癌的预测价值更高(Z=1.982,P=0.047)。结论结肠癌患者血清中DNMT1水平升高,FOXO3a水平则降低,二者在结肠癌患者血清中呈负相关,二者联合检测能够有效提高结肠癌的诊断价值。

CD4＋CD25＋叉头框蛋白p3＋调节性T细胞在结直肠癌中抑制肿瘤免疫的机制

目的 探讨CD4＋CD25＋叉头框蛋白p3（Foxp3）-＋调节性T细胞在结直肠癌中抑制肿瘤免疫的机制。方法收集结直肠癌组织48例,息肉组织22例,正常组织21例,采用免疫组织化学法检测Foxp3-＋调节性T细胞及白细胞介素（IL）-10阳性肿瘤细胞在上述组织中的含量,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Foxp3及信号转导与转录激活因子（STAT3）mRNA在不同组织中的基因表达,同时采用x2检验分析上述指标与肿瘤临床病理特征之间的关系。结果 Foxp3及IL-10在结直肠癌组织中阳性细胞表达率分别为45.8%和68.8%,较息肉组织（13.6%和31.8%）及正常组织（9.5%和23.8%）显著升高（P〈0.01）,肿瘤组织中Foxp3及STAT3 mRNA的相对表达量分别为0.644±0.059、0.343±0.036,较息肉组织（0.322±0.020、0.212±0.028）及正常组织（0.309±0.016、0.202±0.021）明显升高（P〈0.01）,结直肠癌组织中Foxp3与STAT3基因表达量呈正相关（r=0.526,P〈0.05）,Foxp3与IL-10蛋白表达呈正相关（r=0.314,P〈0.05）,肿瘤组织中Foxp3的表达量与组织学分级、淋巴结转移、TNM分期明显相关（P〈0.05）,与年龄、性别无明显相关（P〈0.05）。结论 CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞通过Foxp3及其他相关抑制性细胞因子的表达抑制肿瘤免疫,进而引起肿瘤免疫逃逸,从而促进肿瘤的发生发展。

结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9的表达变化观察

目的观察结直肠癌组织中卷曲螺旋结构域蛋白12(CCDC12)、转录因子叉头框蛋白O3a(FOXO3a)、Twist蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的变化,同时探讨上述四指标与结直肠癌患者病情之间的关系。方法老年结直肠癌患者82例,取患者的结直肠癌组织及癌旁正常肠黏膜组织,采用免疫组化SP法检测癌组织及癌旁组织中的CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白,比较癌组织及癌旁组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率,比较不同临床病理参数的结直肠癌患者癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率。采用Kendall相关分析结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist与MMP-9蛋白阳性表达率的关系。结果结直肠癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率分别为75.61%、52.44%、63.41%、79.27%,癌旁组织中分别为19.51%、93.90%、17.07%、23.17%,与癌旁组织比较,结直肠癌组织中CCDC12、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率高,FOXO3a蛋白阳性表达率低(P均<0.05)。分化程度高、TNM分期高、存在浆膜浸润、存在淋巴结转移的结直肠癌患者癌组织中CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率高(P均<0.05)。结直肠癌组织中的CCDC12、Twist蛋白表达与MMP-9蛋白表达呈正相关(r分别为0.368、0.353,P<0.01),FOXO3a蛋白与MMP-9蛋白表达呈负相关(r=-0.205,P<0.01)。结论结直肠癌组织中的CCDC12、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率升高,FOXO3a蛋白阳性表达率降低;CCDC12、FOXO3a、Twist、MMP-9蛋白阳性表达率与结直肠癌患者病情有关。直肠癌组织中CCDC12、Twist与MMP-9蛋白表达有正相关关系,FOXO3a与MMP-9蛋白表达有负相关关系。

玉泉丸对糖尿病肾病大鼠AMPK/FOXO3a通路及肾损伤的影响

目的:探究玉泉丸对糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/叉头框转录因子3a(FoxO3a)通路的影响。方法:90只大鼠随机选取12只为空白组,其余大鼠采用高脂高糖膳食辅以链脲佐菌素腹腔注射构建DN模型。筛选模型成功大鼠60只分为DN组、二甲双胍组(0.045 g/kg),玉泉丸高、中、低剂量组(8.64、4.32、2.16 g/kg),每组12只。各给药组分别灌胃给予相应的药物,1次/d,连续给药8周。检测大鼠24 h尿微量白蛋白(U-mAlb)水平;血糖仪检测空腹血糖(FBG)水平;计算肾脏指数;并检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平和肾组织匀浆中活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)含量;HE染色观察肾脏组织形态变化;荧光显微镜观察肾脏组织凋亡情况;Western blot检测肾脏AMPK、FOXO3a及其磷酸化蛋白表达。结果:与空白组相比,DN组大鼠肾小管上皮细胞损伤严重,大鼠FBG、U-mAlb、血清Scr、BUN、肾脏指数、肾脏组织ROS、MDA、肾小管上皮细胞凋亡数量显著升高(P<0.05),体重、肾脏组织SOD、CAT、p-AMPK/AMPK、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达显著降低(P<0.05);与DN组相比,二甲双胍组和玉泉丸高、中剂量组大鼠肾脏组织病理损伤明显减轻,FBG、U-mAlb、血清Scr、BUN水平、肾脏指数、肾脏组织ROS、MDA、肾小管上皮细胞凋亡数量明显下降(P<0.05),体重、肾脏组织SOD、CAT含量、p-AMPK/AMPK、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论:玉泉丸可能通过激活AMPK/FOXO3a通路抑制DN大鼠氧化应激反应和肾脏细胞凋亡,减轻肾损伤。

血清IRAK4、FOXO3a水平与新生儿支气管肺发育不良的关系

目的探讨新生儿支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)与血清白细胞介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4,IRAK4)和转录因子叉头框蛋白O3a(forkhead box O3,FOXO3a)表达水平之间的关系。方法选取2019年3月至2022年5月在海南省人民医院新生儿科出生且住院的260例新生儿作为研究对象,并将发生BPD的新生儿纳入研究组(n=99),未发生BPD的新生儿纳入对照组(n=161)。采用酶联免疫吸附试验检测两组血清IRAK4、FOXO3a表达水平,并分析BPD临床病理特征和血清IRAK4、FOXO3a水平之间的关系。采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清IRAK4、FOXO3a水平对BPD的预测价值。统计学方法采用t检验、方差分析、χ^(2)检验和Pearson相关性分析。结果研究组患儿IRAK4表达水平高于对照组[(1.07±0.33)与(0.65±0.18)ng/L,t=13.265,P<0.001],FOXO3a表达水平低于对照组[(0.53±0.15)与(0.83±0.24)g/L,t=11.164,P<0.001]。Pearson相关性分析结果显示,BPD患儿血清IRAK4、FOXO3a表达水平之间呈负相关(r=-0.582,P<0.001)。BPD患儿血清IRAK4、FOXO3a的表达水平与患儿性别、分娩方式无关(P值均>0.05);与胎龄、体质量、病情程度有关(P值均<0.05)。IRAK4表达水平随着胎龄、体质量的减少及病情程度的加重而升高,FOXO3a表达水平随着胎龄、体质量的减少及病情程度的加重而降低。血清IRAK4、FOXO3a表达水平预测BPD的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.813(95%CI:0.754~0.873)、0.791(95%CI:0.728~0.855);IRAK4、FOXO3a二者联合预测BPD的AUC为0.910(95%CI:0.870~0.949)。结论BPD患儿血清IRAK4呈高表达,血清FOXO3a呈低表达,二者联合检测对新生儿BPD有较高的诊断价值。

Toll样受体4激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤的预防作用及其作用机制

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)激动剂LPS腹腔注射对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的预防作用及其作用机制。方法 将60只大鼠根据随机数字表法分为LPS干预组(0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg,均为小剂量)、维拉帕米干预组、模型组、假手术组,每组15只。构建MIRI模型前7 d,LPS干预组给予0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、1 mg/kg LPS腹腔注射,维拉帕米干预组给予2.5%维拉帕米(2 mg/kg)腹腔注射,假手术组与模型组给予等容量生理盐水腹腔注射;均每日1次。然后,除假手术组外,其余组大鼠进行缺血再灌注处理。处理后72 h,采用超声检测各组大鼠心功能,苏木精—伊红(HE)染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测算各组大鼠心肌梗死面积;采用Western blotting法检测大鼠心肌组织FoxO3a、pFoxO3aS253、Beclin-1及LC蛋白。结果 与假手术组比较,模型组大鼠左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(LVFS)减小(P均<0.05);心肌损伤严重,心肌梗死面积百分比升高(P均<0.05);心肌组织中pFoxO3aS253蛋白相对表达量降低(P<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量升高(P均<0.05)。与模型组比较,维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠LVEF、LVFS增加(P均<0.05);0.1 mg/kg及0.5 mg/kg LPS干预组大鼠心肌病变改善不明显,维拉帕米干预组和1 mg/kg LPS干预组大鼠心肌纤维水肿、断裂、坏死及炎细胞浸润程度均减轻;维拉帕米干预组及LPS干预组大鼠心肌梗死面积百分比降低(P均<0.05),pFoxO3aS253蛋白相对表达量升高(P均<0.05),FoxO3a、Beclin-1、LC蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论 小剂量TLR4激动剂LPS可预防大鼠MIRI,其作用机制可能与促使FoxO3a磷酸化及抑制Beclin-1、LC激活有关。

母鼠长期低剂量锰染毒对子代大鼠睾丸氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响

目的探讨氯化锰长期低剂量染毒对子代大鼠睾丸中氧化应激状态及生精细胞凋亡的影响。方法健康雌性SD大鼠32只随机分为对照组,低、中、高剂量组,每组8只。锰染毒组分别腹腔注射2、4和8 mg/kg MnCl_2·4H_2O,对照组腹腔注射等容生理盐水,1次/d,5 d/周,共8周。与正常雄性SD大鼠交配受孕后,雌鼠在妊娠期和哺乳期继续染毒。每组随机取8只12周龄子代雄性大鼠断头处死后取材,HE染色观察睾丸生精小管结构;q RT-PCR、免疫组织化学、Western blot分别检测叉头蛋白转录因子O 3a(Fox O3a)、与Bcl-2相互作用的细胞死亡调节子(Bim)、半胱天冬酶9(Caspase-9)m RNA和蛋白的表达;TUNEL技术检测生精细胞凋亡。结果 (1)HE染色可见各锰染毒组睾丸生精小管呈现不同程度的形态学改变。随着锰染毒剂量的增加,生精细胞层数逐渐减少,各级生精细胞排列紊乱、数量减少或缺如,管腔内成熟的精子数目减少;(2)中、高剂量组精子密度、精子活动率降低,而精子畸形率上升(P<0.05);(3)各锰染毒组大鼠睾丸组织内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性随锰染毒剂量的增加而降低(P<0.05);而睾丸组织内丙二醛(MDA)含量和活性氧(ROS)水平随锰染毒剂量的增加逐渐升高(P<0.05);(4)在m RNA和蛋白水平,Fox O3a的表达随锰染毒剂量的增加逐渐上升(P<0.05);低剂量组Bim m RNA表达量未见变化,但在中、高剂量组则降低,而细胞死亡调节因子表达量则随锰染毒剂量的增加逐渐增加(P<0.05);(5)Caspase-9 m RNA和蛋白表达量在各锰染毒组均升高,且随锰染毒剂量的增加逐渐增加(P<0.05);(6)各锰染毒组大鼠均可见生精细胞凋亡,其凋亡指数高于对照组,且随锰染毒剂量的增加而上升(P<0.05)。结论长期低剂量锰染毒可抑制子代大鼠睾丸内抗氧化酶活性或(和)增加MDA含量,提高睾丸组织ROS水平,促进Fox O3a和Bim表达,启动Caspase-9信号通路,最终导致子代大鼠生精细胞的凋亡。

黄连素抗食管癌EC109细胞的作用及其机制

目的:研究黄连素(berberine,BBR)的抗食管癌作用及其机制。方法:给予50,100,200μmol/L BBR处理EC109细胞24 h,检测EC109细胞的活力及迁移能力。Western印迹检测pAkt,蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),叉头转录因子O3(forkhead Class box O3,FOXO3),B淋巴细胞瘤-2(B-cel l lymphoma-2,bcl-2)及Bax的表达水平,特别是FOXO3的细胞核转位情况。建立裸鼠皮下肿瘤模型,腹腔注射BBR,明确BBR的抗食管癌作用。结果:BBR处理EC109细胞后,细胞活力下降,划痕实验检测细胞间距增大(P<0.05)。BBR降低了Akt的磷酸化水平,pAkt/总Akt下降;细胞质内的FOXO3下降;细胞核内的FOXO3升高;bcl-2表达水平下降;Bax则显著升高。在体研究发现BBR剂量依赖地抑制了肿瘤生长。结论:BBR能显著抑制食管癌EC109细胞的增殖、迁移以及在体增殖能力,该作用可能是通过抑制Akt磷酸化水平、增加FOXO3细胞核转位进而促进细胞凋亡来实现的。

五味子乙素对溃疡性结肠炎模型大鼠的干预及作用机制研究

目的:研究五味子乙素对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠的干预作用及其机制。方法:采用TNBS诱导大鼠UC模型,分别灌胃给予五味子乙素低(20 mg·kg^(-1))、中(40 mg·kg^(-1))、高(80 mg·kg^(-1))剂量或柳氮磺吡啶片(SASP,25 mg獉kg^(-1))治疗7 d。末次给药24 h后处死大鼠,观察结肠组织形态变化,HE染色并进行组织病理学评分。Western Blot和Real-time PCR法检测结肠组织中Th17特异性转录因子维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和Treg特异性转录因子叉头蛋白P3(FoxP3)的表达情况。结果:与模型组相比,五味子乙素低、中、高剂量组大鼠结肠组织形态均有显著改善且病理评分显著降低(P<0.05或P<0.01),其中五味子乙素高剂量组的疗效最为显著,与SASP组效果相当(P>0.05);五味子高剂量组大鼠结肠组织中的FoxP3蛋白和基因水平显著升高(P<0.05或P<0.01),RORγt蛋白和基因表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),与SASP组效果相当(P>0.05),均比五味子低剂量组更显著(P<0.05或P<0.01)。结论:五味子乙素能较显著地改善结肠组织溃疡,抑制肠道炎症反应,具有一定的临床价值。其作用机制与其上调大鼠结肠组织中FoxP3的表达、降低RORγt表达有关。

甲状腺乳头状癌患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的检测及临床意义

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的标志物及其在甲状腺乳头状癌(PTC)患者外周血中含量的变化和临床意义。方法:选择40例PTC患者(PTC组)及34例甲状腺腺瘤(TA)患者(对照组),以CD4+CD25+FoxP3+及CD4+CD25+CD127low/-为标记物,通过流式细胞术检测2组患者外周血中CD4+CD25+Treg的比例,分析其与PTC临床病理特征的关系。结果:与对照组比较,PTC组患者外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg的比例明显升高(P<0.05);PTC组中不同临床分期、有无颈淋巴结转移患者,外周血中CD4+CD25+CD127low/-Treg的比例组间比较均差异有统计学意义(均P<0.05)。PTC组患者外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例明显升高(P<0.05);PTC组中不同临床分期、有无颈淋巴结转移患者,外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg的比例均差异有统计学意义(均P<0.05)。外周血中CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的比例与CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞的比例在PTC组和对照组呈正相关(r=0.889,P<0.05)。结论:CD4+CD25+CD127low/-可以作为鉴定外周血中CD4+CD25+Treg细胞的标志物。PTC患者外周血CD4+CD25+Treg细胞水平显著增加,且与PTC不同临床分期、有无颈淋巴结转移等因素密切相关,CD4+CD25+CD127low/-Treg细胞可能参与了PTC的发生、发展。

黄芪甲苷通过调控FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路抑制去卵巢大鼠骨质疏松的作用

目的：通过调控转录因子叉头框蛋白O3a（FoxO3a）/分泌型糖蛋白2（Wnt2）/β-连环蛋白（β-catenin）通路评价黄芪甲苷对去卵巢大鼠骨质疏松的作用,并探讨其作用机制。方法：雌性SD大鼠随机均分6组,分别为假手术组,模型组,阳性药组（尼尔雌醇,1.5 mg·kg-1）,黄芪甲苷低、中、高剂量组（20,40,80 mg·kg-1）,每组8只。通过摘除大鼠双侧卵巢复制绝经后大鼠骨质疏松模型。术后6周,灌胃给药,每日1次,连续8周。酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测大鼠骨钙素（bone gla protein,BGP）,降钙素（calcitonin,CT）,骨保护素（osteoprotegerin,OPG）,核转录因子-κB（NF-κB）受体活化因子配体（receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL）,丙二醛（malondialdehyde,MDA）,过氧化氢酶（catalase,CAT）,谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）含量,双能X射线骨密度检测仪分别测定股骨和腰椎的骨密度值（bone mineral density,BMD）,采用三点弯曲法测量胫骨生物力学指标,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠股骨组织中β-catenin,FoxO3a,Wnt2,p66（shc）,p-p66（shc）蛋白的表达。结果：与模型组比较,黄芪甲苷组CT和OPG水平显著升高,BGP和RANKL水平则显著降低（P〈0.05,P〈0.01）;黄芪甲苷显著升高腰椎、股骨的BMD和胫骨的最大载荷及最大应力（P〈0.05,P〈0.01）;同时,黄芪甲苷显著降低MDA水平（P〈0.05）,升高CAT,SOD和GSH-Px水平（P〈0.05,P〈0.01）。Western blot显示,黄芪甲苷显著降低p-p66（shc）/p66（shc）水平（P〈0.05）;升高β-catenin和Wnt2蛋白表达水平（P〈0.05,P〈0.01）,抑制FoxO3a蛋白表达水平（P〈0.01）。结论：黄芪甲苷能够有效缓解氧化应激介导的去卵巢大鼠的骨质疏松,该作用可能与其调节FoxO3a/Wnt2/β-catenin通路有关。

大鼠失神经腓肠肌细胞内Fox03a及MuRF-1的表达规律

目的探讨失神经大鼠腓肠肌细胞中叉头蛋白转录因子3a（fork-head protein，FoxO3a）及MuRF-1的表达规律。方法72只Wistar大鼠随机分为12组，每组6只，切断大鼠右侧坐骨神经，左侧行假手术，分别于术后0、1、2、3、4、5、6、7、10、14、21、28d各处死一组大鼠，取右侧腓肠肌，于-70℃冰箱保存。分别使用实时荧光定量PCR法和Western Blot法对其中的FoxO3a和MuRF-1的基因和蛋白进行检测。结果MuRF-1的基因表达在失神经第4天达到峰值（18.12倍），失神经14d后下降至正常。FoxO3a的基因表达在失神经第6天达到峰值（7．06倍），而后虽缓慢下降，但仍高表达。FoxO3a和MuRF-1的蛋白含量随失神经时间的延长逐渐升高。结论FoxO3a和MuRF-1的表达和蛋白改变与失神经骨骼肌萎缩关系密切，可以作为药物治疗和基因治疗的靶点之一。

硫必利对Aβ25-35诱导Neuro-2a细胞损伤的保护作用

目的探讨硫必利对β-淀粉样蛋白Aβ25-35诱导小鼠脑神经母细胞瘤(Neuro-2a)损伤的保护作用及其潜在机制。方法将细胞实验分为7组:空白对照组、模型组和第1实验组至第5实验组。用Aβ25-35(100μmol·L^-1)处理细胞,作为模型组。第1实验组至第5实验组是在模型组基础上,加入5个不同质量浓度(3,10,30,100,300 ng·mL^-1)硫必利处理24 h。用MTT法测定细胞活力,以蛋白质印迹法测定磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/叉头框蛋白O转录因子3(FoxO3)信号传导蛋白的磷酸化情况(灰度值)。结果空白对照组、模型组和第1实验组至第5实验组的细胞活力分别为(100.00±4.00)%,(54.57±4.24)%,(59.26±8.51)%,(64.17±7.84)%,(73.20±7.04)%,(94.52±12.03)%和(98.31±11.24)%。第3实验组至第5实验组与模型组比较,细胞活力均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。空白对照组、模型组和第4实验组的p-FoxO3蛋白表达水平分别为1.05±0.13,1.42±0.18和8.57±3.42;这3组的p-AktThr473蛋白表达水平分别为1.00±0.11,1.31±0.23和1.58±0.26;第4实验组与模型组相比,p-FoxO3、p-AktThr473蛋白表达差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论硫必利通过激活PI3K/Akt/Foxo3通路来对抗Aβ25-35在Neuro-2a中的凋亡作用。