BECN1、性别决定区Y盒转录因子9表达与甲状腺癌患者临床特征及预后的关系研究

目的探讨BECN1、性别决定区Y盒转录因子9(SOX9)表达与甲状腺癌患者临床特征及预后的关系。方法取106例甲状腺癌患者的甲状腺癌组织及癌旁组织,比较甲状腺癌组织及癌旁组织中BECN1、SOX9表达情况;比较不同临床特征甲状腺癌患者甲状腺癌组织中BECN1、SOX9表达情况;进行为期3年的随访。结果BECN1、SOX9阳性均主要定位于细胞质中。甲状腺癌组织中SOX9阳性表达率明显高于癌旁组织,BECN1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Ⅰ~Ⅱ期、高分化、无淋巴结转移的甲状腺癌患者甲状腺癌组织中BECN1阳性表达率分别高于Ⅲ~Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移患者,SOX9阳性表达率分别低于Ⅲ~Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。BECN1阳性表达患者的平均生存时间为(35.26±8.39)个月,明显长于阴性表达患者的(30.16±7.35)个月;SOX9阳性表达患者的平均生存时间为(31.20±8.03)个月,明显短于阴性表达患者的(35.74±6.99)个月,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多因素Logistic回归模型结果显示,淋巴结转移、分化程度、BECN1及SOX9表达均是甲状腺癌患者预后的影响因素(P﹤0.05)。结论甲状腺癌组织存在BECN1低表达、SOX9高表达,不同临床分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移状态患者BECN1及SOX9表达存在差异,且BECN1及SOX9表达与患者预后密切相关。

大鼠肝再生的肝细胞干性变化中性别决定区转录因子2 mRNA和其他非编码RNA的表达变化与作用

目的了解大鼠肝再生(LR)0 h和2 h时性别决定区转录因子2(SOX2)基因及其mRNA相互作用的微小RNA(miRNA,miR)和环状RNA(circRNA)的表达变化、相互作用和调节肝细胞干性变化的途径与方式。方法按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,按Smedsrod等方法分离肝细胞,用大规模定量检测技术测定大鼠肝再生中肝细胞的mRNA、miRNA合称内源竞争RNA(ceRNA)的表达变化,用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网,用ceRNA综合分析等方法解析它们的表达相关性和作用相关性。结果PH后0 h和2 h时,SOX2 mRNA的比值为1.00±0.09和2.15±0.48,miR-3558-3p为4.53±0.10和0.81±0.16,circRNA_18404为1.24±0.04和11.10±0.57,circRNA_18045为1.97±0.47和4.44±0.23。同时,PH后0 h时,SOX2促进的富含AT的交互域5A(ARID5A)、激活转录因子3(ATF3)、BTG抗增殖因子2(BTG2)等8个细胞去分化相关基因表达下调,抑制的细胞分化相关基因干扰素调节因子6(IRF6)和生长抑素(SST)表达上调。PH后2 h时,SOX2促进的ARID5A、ATF3、BTG2等8个细胞去分化相关基因表达上调,抑制的细胞分化相关基因SST表达下调、IRF6未发生有意义表达变化。结论上述circRNA抑制的miRNA、miRNA抑制的SOX2 mRNA以及SOX2调节的细胞干性相关基因的表达相关性和作用相关性有利于PH后0 h时肝细胞处于分化状态和PH后2 h时肝细胞处于干性状态。

血管内皮生长因子和性别决定区Y框蛋白2在胃癌中的表达及与预后的关系

目的探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)在胃癌组织中的表达及其与临床病理和预后的意义。方法收集2012年3月至2017年12月皖北煤电集团总医院病理科存档的胃癌手术标本40例,应用免疫组化检测40例胃癌和32例癌旁组织中VEGF和SOX2的表达情况,观察胃癌病人VEGF和SOX2的表达情况并分析与不同病理特征和生存的相关性。结果①胃癌组织中VEGF与SOX2的表达率分别为70.0%及65.0%,癌旁组织中分别是46.4%及37.5%,均差异有统计学意义(P<0.05)。②VEGF的高表达与胃癌病人低分化、局部更深浸润、出现淋巴结转移及高临床分期有关(P<0.05),SOX2的高表达与胃癌病人出现淋巴结转移及高临床分期有关(P<0.05)。③Spearman相关性分析发现,在胃癌中VEGF的表达与SOX2的表达呈正相关关系(r=0.375,P=0.017)。生存分析显示胃癌病人中VEGF及SOX2同时高表达与VEGF或SOX2单独高表达或不表达相比具有较差的预后(P<0.05)。结论VEGF和SOX2的高表达水平可能促进胃癌的发生、发展和侵袭,并且预示着病人有着更差的预后,有望成为胃癌诊断、治疗和预后判断的一个靶标。

血管内皮生长因子和性别决定区Y-17对慢性心力衰竭的诊断价值

目的本研究旨在探索血管内皮生长因子(vascular endothelialgrowth factor,VEGF)与性别决定区Y-17(sex determining region Y-box 17,SOX17)作为血清学标志物在慢性心力衰竭诊断中的价值。方法选取2020年1月-2021年1月在上海交通大学医学院附属仁济医院住院治疗的慢性心力衰竭患者50例,设立为观察组,50名健康者设立为对照组。使用ELISA测定2组研究对象血清VEGF、SOX17含量,比较2组之间差异、进行Logistics回归分析,构建风险值计算公式、蛋白质相互作用网络、和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopediaof Genes and Genomes,KEGG)信号通路富集分析。通过受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线,评估VEGF、SOX17以及风险值诊断效能。结果观察组血清VEGF含量高于对照组(P<0.001)血清,SOX17含量高于对照组(P<0.001);SOX17(OR=1.32,95%CI[0.96,1.36])和VEGF(OR=1.41,95%CI[1.06,1.62])(P<0.05)。风险值计算公式为:风险值=-2.96+0.01×血清SOX17含量+0.02×血清VEGF含量。SOX17、VEGF、风险值的曲线下面积(AUC)分别为0.67、0.76、0.81,最佳临界值以及对应的敏感度和特异度分别为115.89 pg/mL(0.48,0.82)、79.32pg/mL(0.76,0.74)、0.60(0.78,0.82)。结论VEGF和SOX17均可以独立用于慢性心力衰竭的诊断,并且诊断效能良好。VEGF和SOX17联合构建的风险值作为诊断指标,其效能高于两者独立作为诊断指标。

宫颈癌组织中微小RNA-585、性别决定区Y-box 9 mRNA的表达变化及其临床意义

目的观察宫颈癌组织微小RNA-585(microRNA-585,miR-585)、性别决定区Y-box 9(SOX9)mRNA的表达情况,并探讨其临床意义。方法选择宫颈癌患者80例(观察组)、子宫良性病变患者40例(对照组),保留宫颈癌及宫颈良性病变组织,qRT-PCR法检测宫颈癌和宫颈良性病变组织miR-585、SOX9 mRNA,分析miR-585、SOX9 mRNA的表达与宫颈癌患者临床病理参数及预后的关系。Target Scan7.2预测分析miR-585与SOX9 mRNA的靶向关系;Pearson线性相关分析分析miR-585与SOX9 mRNA在宫颈癌组织中表达的相关性。结果与对照组比较,观察组miR-585相对表达量低,SOX9 mRNA宫相对表达量高(P均<0.05)。宫颈癌组织miR-585、SOX9 mRNA表达与肿瘤FIGO分期、淋巴结转移和浸润深度有关(P均<0.05)。miR-585低表达宫颈癌患者和SOX9 mRNA高表达宫颈癌患者5年生存率显著降低(χ^2分别为7.11、6.57;P均<0.05)。SOX9的3′UTR区存在miR-585的结合位点;宫颈癌组织中miR-585与SOX9 mRNA的表达呈负相关(r=-0.315,P=0.006﹚。结论宫颈癌组织中miR-585表达降低,SOX9 mRNA表达升高,两者表达呈负相关,并与宫颈癌患者的不良不良参数和预后相关,可能协同参与宫颈癌的发生发展。

Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9和周期素依赖性激酶4在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义

目的 探究Y染色体性别决定区相关高速泳动族框因子9(SOX9)和周期素依赖性激酶4(CDK4)在结直肠息肉、结直肠癌中的表达及意义。方法 选取中国人民解放军第八十二集团军医院2015年1月至2017年6月收治的结直肠癌病人病理组织标本(结直肠癌组)94例及癌旁正常结直肠组织(正常结直肠组)39例,另取同时期结直肠息肉病人结直肠息肉组织(结直肠息肉组)51例。采用免疫组织化学SP染色法检测SOX9、CDK4的表达情况,分析SOX9、CDK4表达与结直肠癌病人临床病理参数之间的关系;对结直肠癌病人进行术后复查随访,分析结直肠癌病人生存情况。结果 SOX9在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为10.26%(4/39)、27.45%(14/51)、76.59%(72/94),差异有统计学意义(P<0.05);CDK4在正常结直肠组织、结直肠息肉组织和结直肠癌组织中的阳性表达率分别为7.69%(3/39)、21.57%(11/51)、54.84%(51/94),差异有统计学意义(P<0.05);正常结直肠组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠息肉组织、结直肠癌组织(P<0.05),结直肠息肉组织中SOX9、CDK4蛋白表达水平低于结直肠癌组织(P<0.05)。结直肠癌病人病理组织SOX9、CDK4表达与肿瘤分化程度、临床分期、是否合并淋巴结转移有关(P<0.05);结直肠癌组织SOX9与CDK4表达呈正相关(r=0.58,P<0.001),由TCGA数据库检索结直肠癌组织SOX9、CDK4基因表达相关性显示,二者之间亦呈正相关(r=0.40,P<0.001);SOX9高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为44.6%、72.4%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=8.31,P=0.004);CDK4高表达、低表达病人术后3年累积生存率分别为25.6%、76.5%,两组比较Log-rank检验差异有统计学意义(χ^(2)=36.36,P<0.001)。结论 SOX9和CDK4在结直肠癌组织、结直肠息肉组织、正常结直肠组织中的阳性表达率逐渐降低,与结直肠癌肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移情况及预后有关,可能参与结直肠癌的发生发展过程。

子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白-2表达及与血管生成的关系

目的检测子宫内膜癌中性别决定区Y框蛋白(SOX)-2、血管内皮生长因子(VEGF)的表达,关注二者与白细胞分化抗原(CD)34标记的微血管密度(MVD)的关系。方法 56例子宫内膜癌根治手术后存留的蜡块组织作为观察组,25例无明显病变的子宫内膜组织作为对照组,采用免疫组化方法检测两组中SOX-2、VEGF和CD34的表达。结果两组中SOX-2和VEGF表达的阳性率及MVD值差异显著。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值与肿瘤的最大径和Ki67标记的增殖指数密切相关。VEGF的阳性率与淋巴结转移和脉管累犯密切相关。观察组中SOX-2和VEGF的阳性率和MVD值均与年龄、分化程度无明显相关性。相关分析显示观察组中SOX-2和VEGF、SOX-2和MVD值之间无明显相关性。结论子宫内膜癌中SOX-2低表达、VEGF和MVD高表达对肿瘤的发生和进展均有重要作用。子宫内膜癌中SOX-2对血管的形成无明显作用。

转录因子OCT4、SOX2在胃癌中的表达及临床意义

目的观察POU5fl转录因子-4(OCT4)及性别决定基因相关转录因子-2(SOX2)在胃癌组织表达的变化及其与胃癌病理特征的相关性。方法 48例胃癌组织作为研究对象,48例胃正常组织作为对照(距离肿瘤病灶>10 cm)。利用免疫组化检测手段比较OCT4及SOX2在胃癌组织及胃正常组织的变化,分析其与胃癌各病理指标的相关性。结果 OCT4及SOX2在胃癌组织阳性表达率分别为75.0%及25.0%,胃正常组织分别为27.1%及64.6%,癌组织与正常组织比较差异均有统计学意义(P<0.005);OCT4与SOX2蛋白在癌组织表达呈负相关性(r=-3.29,P=0.002<0.05)。经过分析后发现OCT4在胃癌组织的表达与淋巴结转移和TNM分期及分化程度有关(P<0.05),SOX2在胃癌组织的表达与胃癌的TNM分期和淋巴结转移及分化程度有关(P<0.05)。结论胃癌的发生可能与OCT4升高、SOX2的下调有关,OCT4及SOX2的联合检测可作为预测胃癌发展的靶指标。

尾型同源盒转录因子2基因及转录因子性别决定区Y框蛋白2在结直肠癌中的表达及其临床意义

尾型同源盒转录因子2基因（CDX2）与结直肠癌的发生和分化密切相关，性别决定区Y框蛋白2（SOX2）在肿瘤细胞的自我更新中起重要作用。本研究旨在探讨对结直肠癌患者CDX2和SOX2的蛋白表达水平与临床病理特征的相关性。

SOX9通过转化生长因子β信号通路调节角膜内皮损伤后内皮-间质转化过程

目的探究性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y-box protein 9,SOX9)是否会调控角膜内皮细胞损伤后的角膜上皮-间质转化(endothelial-to-mesenchymal transition,EndMT)过程及具体机制。方法转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低人角膜内皮细胞B4G12中SOX9的表达,使用甲萘醌构建体外B4G12细胞损伤模型,设4个分组:si-NC组(转染siRNA-阴性对照)、si-SOX9组(转染siRNA-SOX9)、si-NC+甲萘醌组(转染siRNA-阴性对照后添加外源性甲萘醌做损伤处理)、si-SOX9+甲萘醌组(转染siRNA-SOX9后添加外源性甲萘醌做损伤处理)。通过实时荧光逆转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot检测各组细胞中EndMT关键因子Snail家族转录抑制因子2(snail family transcriptional repressor 2,SNAIL2)及相关信号通路关键因子表达变化,阐明SOX9调控EndMT过程的功能和机制。结果转染siRNA-SOX9敲低细胞SOX9表达后,给予甲萘醌细胞损伤处理,观察到细胞中SNAIL2的表达会随SOX9的敲低而降低,同时观察到转化生长因子β(transforming growth factor beta,TGF-β)信号通路中SNAIL2的上游关键因子Smad2/Smad3的表达也随着SOX9的敲低而降低。结论SOX9通过TGF-β信号通路调控角膜内皮损伤后EndMT过程。

有多少基因参与哺乳动物的性别决定

哺乳动物性别决定的遗传机制到目前为止仍然没有弄清楚。人类和小鼠的y连锁及x连锁锌指基因(Zincfingergenes)已经克隆出来,且被确认。最初认为y连锁锌指基因是睾丸决定因子(testisdetermingfactor),但目前看来,这个基因似乎不是启动一系列导致性别决定反应的主管基因(mastergene)。人类睾丸决定基因定位在y染色体短臂的非同源区,很接近标志人伪常染色体区(Pseudoautosomalregion)边端的Alu重复序列。近来发现这个区有一个新的基因,有可能是雄性决定因子。在人类、实验小鼠及田鼠中,性别决定出现的异常情况表明,睾丸发育依赖于睾丸决定基因及其与x连锁基因、常染色体基因的共同作用。卵巢发育可能依赖于睾丸决定因子的缺失,也可能还依赖于参与性别决定的常染色体基因及x连锁基因转录物的选择性拼接(alternativesplicing)。

RUNX1通过调节SOX2转录促进食管鳞状细胞癌干性

目的:探讨RUNT相关转录因子1(RUNX1)在食管鳞状细胞癌中的表达及其对细胞干性的影响。方法:从GEPIA数据库和GEO数据库(GSE111011)获取RUNX1的表达情况,使用TCGA数据库分析基因表达相关性。利用Western blot检测RUNX1、SOX2、OCT4、KLF4和c-MYC蛋白表达情况。利用qRT-PCR技术检测CD271、CD44、CD54、SOX2和RUNX1的mRNA水平,双荧光素酶报告基因实验检测SOX2启动子活性。通过细胞成球培养和流式细胞术检测侧群细胞和CD271^(+)/CD44^(+)细胞的数量反映细胞干性。结果:GEPIA数据库、GEO数据库和Western blot结果均显示RUNX1在食管癌中高表达。在Eca-109细胞中敲低RUNX1后,抑制SOX2表达和细胞干性(P<0.01)。在KYSE-150细胞中过表达RUNX1后,促进SOX2表达和细胞干性增加(P<0.01)。在KYSE-150细胞中同时过表达RUNX1和敲低SOX2后,RUNX1促进的细胞干性增加被逆转(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示RUNX1促进SOX2启动子活性,在转录水平调节SOX2表达。结论:RUNX1在食管鳞状细胞癌中高表达,并通过在转录水平调节SOX2表达,从而促进细胞干性。

微RNA-214靶向性别决定区Y-box 4对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖凋亡的影响

目的探讨微RNA(miR)-214靶向性别决定区Y-box 4(SOX4)对RA滑膜成纤维细胞增殖、凋亡的影响。方法收集2017—2019年商丘市第一人民医院就诊的45例RA患者的滑膜组织样本和30例接受关节置换手术的关节创伤患者的滑膜组织样本,分别作为RA组和对照组。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测滑膜组织中miR-214和SOX4表达水平;ELISA法检测患者血清RF、CRP浓度,采用血沉动态分析仪检测ESR浓度,Pearson相关分析miR-214及SOX4与患者血清RF、CRP、ESR相关性。采用Lipofectamine 3000将人成纤维样滑膜细胞(HFLS)-RA细胞分为对照组、miR-214 mimic组、mimic-NC组、miR-214 mimic+pcDNA3.1-SOX4组。通过CCK8检测各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测相关指标蛋白表达水平。2组比较采用独立样本t检验,多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果与对照组(4.6±0.7,1.9±0.7)和HFLS细胞(1.00±0.06,1.00±0.09)比,miR-214在RA患者组织(2.6±0.9)和HFLS-RA(0.30±0.05)中低表达(t=10.026,P<0.05;t=15.815,P<0.05);SOX4在RA患者组织(4.6±0.9)和HFLS-RA(3.89±0.41)中高表达(t=14.772,P<0.05;t=12.020,P<0.05)。RA组患者血清RF、ESR、CRP表达水平[(46±7)U/ml、(46.4±9.6)mm/1 h、(34.8±9.8)mg/ml]较对照组[(16±4)U/ml、(9.2±2.0)mm/1 h、(2.1±0.7)mg/ml]显著升高(t=22.906,P<0.05;t=25.338,P<0.05;t=22.314,P<0.05)。患者血清RF、CRP、ESR与miR-214呈负相关(r=-0.574,P<0.05;r=-0.448,P<0.05;r=-0.549,P<0.05),与SOX4、ESR呈正相关(r=0.492,P<0.05;r=0.369,P<0.05;r=0.325,P<0.05)。转染miR-214 mimic 24 h后细胞活力、Ki-67和p-p65/p65蛋白表达量较对照组和mimic-NC组显著下降(F_(24 h)=16.980、F_(48 h)=42.735、F_(72 h)=164.448、F_(Ki-67)=290.112、F_(p-p65/p65)=223.548,P<0.05),细胞凋亡率和Bax蛋白表达量显著升高(F=344.360,P<0.05;F=106.376,P<0.05)。过表达SOX4可逆转miR-214的作用。结论miR-214靶向SOX4抑制RA滑膜成纤维细胞增殖,并促进凋亡,其机制可能与miR-214抑制NF-κB信号通路有关。

转化生长因子β1及Ras同源基因家族成员A在软骨细胞分化过程中对细胞形态和细胞骨架的影响

背景:骨关节炎的重要病理变化是关节软骨的退变,转化生长因子β1和Ras同源基因家族成员A分别在维持关节软骨稳态和骨关节炎的发生发展中起重要作用。目的:探讨转化生长因子β1、Ras同源基因家族成员A在软骨细胞分化过程中对细胞形态、骨架及相关因子表达的影响,以及转化生长因子β1与Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9之间的相互调控关系。方法:外源性添加转化生长因子β1不同质量浓度、不同时间刺激ATDC5细胞,检测Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的蛋白表达情况;转化生长因子β1、LY-364947(一种有效的ATP竞争性转化生长因子β受体Ⅰ抑制剂)、溶血磷脂酸(Ras同源基因家族成员A激动剂)不同组合处理ATDC5细胞72 h,检测Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9、转化生长因子β的蛋白表达情况,并观察细胞形态、细胞骨架的变化情况。结果与结论:①随着转化生长因子β1作用质量浓度和时间的增加,Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9蛋白表达水平显著升高(P<0.001);②相比空白对照组,溶血磷脂酸能够显著提高Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9蛋白表达水平(P<0.001),但溶血磷脂酸对转化生长因子β的蛋白表达水平没有影响(P>0.05),转化生长因子β1+溶血磷脂酸处理细胞使Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9和转化生长因子β的蛋白表达水平都显著升高(P<0.001),LY-364947使Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的蛋白表达水平降低(P<0.001),并且显著减弱了溶血磷脂酸对Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的激活作用(P<0.001);③相比未经处理的空白对照组,转化生长因子β1、溶血磷脂酸、转化生长因子β1+溶血磷脂酸处理ATDC5细胞后,细胞形态伸长、胞内肌动蛋白丝排列更加有序,聚集在细胞边缘的肌动蛋白丝增多,LY-364947使细胞形态变为多边形,肌动蛋白丝排列紊乱,细胞边缘的肌动蛋白丝减少;LY-364947+溶血磷脂酸对细胞形态和骨架的改变情况与LY-364947处理组有类似的结果;④提示在ATDC5细胞中,转化生长因子β1对Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的蛋白表达水平有浓度剂量和时间叠加作用,转化生长因子β1可能是Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的上游因子,转化生长因子β1通过调控Ras同源基因家族成员A、性别决定区Y框蛋白9的表达调节细胞骨架的功能,进而参与调节骨关节炎的发生发展过程。

SOX转录因子家族在生殖细胞命运决定中的调控作用

SOX(SRY-related HMG-box)是一类含有HMG box DNA结合结构域的转录因子,自第一个SOX成员—性别决定基因SRY发现以来,先后共发现了20个成员。SOX不仅在胚胎发育、组织自稳态、神经发育、视网膜发育、骨组织形成等方面发挥重要调控功能,而且在生殖细胞的发生、分化和成熟等过程中也有重要的调控作用,如SOX17能调控胚胎干细胞向生殖细胞分化的过程中,使胚胎干细胞在体外可以诱导形成生殖细胞,为解决人类的不育问题带来了曙光。该文对近年来SOX家族在生殖细胞发育和命运决定方面的研究进展情况作一简述。

lncRNA CYTOR靶向miR-139-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)细胞骨架调节因子RNA(CYTOR)靶向微小RNA-139-5p(miR-139-5p)对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制。方法体外传代培养三阴性乳腺癌细胞株HCC1806,取传3代、对数生长期、生长状态良好的细胞进行后续实验。通过starBase数据库预测lncRNA CYTOR与miR-139-5p的结合位点,通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-139-5p的靶向关系。取HCC1806细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组。阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组分别转染NC mimics、lncRNA CYTOR siRNA、miR-139-5p mimics、lncRNA CYTOR siRNA+miR-139-5p mimics,转染48 h更换新鲜培养基,继续培养24 h。空白对照组常规培养,不予转染。收集各组上述细胞,采用RT-qPCR法检测miR-139-5p、性别决定区Y框蛋白8(SOX8)mRNA表达,采用EdU法检测细胞增殖能力,采用Western blotting法检测ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)、SOX8表达。结果经starBase数据库预测,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA CYTOR与miR-139-5p存在靶向调控关系。lncRNA CYTOR沉默组、miR-139-5p过表达组、lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量均高于空白对照组和阴性对照组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于空白对照组和阴性对照组(P均<0.05);lncRNA CYTOR沉默+miR-139-5p过表达组miR-139-5p相对表达量高于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组,SOX8 mRNA相对表达量、EdU阳性细胞比例以及ABCG2、SOX8蛋白相对表达量均低于lncRNA CYTOR沉默组和miR-139-5p过表达组(P均<0.05);而空白对照组与阴性对照组、lncRNA CYTOR沉默组与miR-139-5p过表达组miR-139-5p、SOX8 mRNA相对表达量以及EdU阳性细胞比例和ABCG2、SOX8蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论lncRNA CYTOR可通过靶向miR-139-5p调控ABCG2和SOX8表达,从而促进三阴性乳腺癌细胞增殖。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞生物学行为及SOX18、MMP-7、VEGFA表达的影响

目的探讨普萘洛尔对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)增殖、凋亡、迁移及成管能力,以及对性别决定区Y框18(sex determining region Y-box 18,SOX18)、基质金属蛋白酶-7(matrix metalloproteinase-7,MMP-7)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达的影响。方法以不同浓度的普萘洛尔处理HUVEC,采用CCK-8法检测细胞活力,选出最佳浓度及时间。实验分为对照组,普萘洛尔不同浓度(50、100、150μmol/L)组,采用流式细胞术、细胞划痕实验和成管实验观察HUVEC凋亡、迁移和管腔形成情况,Western blot和实时荧光定量PCR法检测SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达水平。结果与对照组相比,普萘洛尔不同浓度组细胞凋亡率升高(P<0.05),且随药物浓度增加显著升高(P<0.05);普萘洛尔不同浓度组伤口愈合率降低,成管节点数和成管总长度减少,SOX18、MMP-7、VEGFA蛋白及mRNA表达下调(P<0.05)。结论普萘洛尔可抑制HUVEC的增殖、迁移、成管能力并促进细胞凋亡,降低SOX18、MMP-7和VEGFA表达水平。

SOX14对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的观察性别决定区Y框基因转录因子(SOX)14在膀胱癌组织中的表达情况,探讨其对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集2019年12月至2022年6月温州医科大学附属第一医院手术切除的膀胱癌组织(37例)和癌旁组织(14例),采用qRT-PCR法检测癌组织和癌旁组织中、膀胱癌细胞和正常尿路上皮细胞中SOX14 mRNA的表达水平。使用过表达和敲低SOX14载体转染膀胱癌细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测并比较不同转染细胞增殖、迁移和侵袭能力的差异。结果膀胱癌组织中SOX14 mRNA相对表达量显著低于癌旁组织,5637、T24、EJ、J82和RT4等5种膀胱癌细胞中SOX14 mRNA相对表达量均显著低于正常尿路上皮细胞。相比相应对照组,过表达SOX14后膀胱癌细胞存活率、细胞迁移和侵袭能力均显著降低;敲低SOX14后膀胱癌细胞存活率、细胞迁移和侵袭能力均显著升高。结论SOX14在人膀胱癌组织和细胞中低表达。调控SOX14 mRNA的表达水平能影响膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。提示SOX14可能是治疗膀胱癌的新靶点。

LncRNA H19靶向调控miR-19b-3p/SOX9通路对脂肪间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的:分析长链非编码核糖核酸(LncRNA)H19靶向调控miR-19b-3p/性别决定区Y框转录因子9(SOX9)通路对脂肪间充质干细胞(ADMSC)向成骨细胞分化的影响。方法:体外培养人ADMSC细胞并鉴定,将ADMSC细胞分为对照组(常规培养)、H19组(转染LncRNA H19慢病毒过表达载体)、LncRNA-NC组(转染慢病毒空载体)、miR-19b-3p组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-19b-3p模拟物慢病毒载体)、miR-NC组(共转染LncRNA H19慢病毒过表达载体和miR-NC慢病毒载体),检测各组LncRNA H19、miR-19b-3p、SOX9及含锌指的成骨细胞特异性转录因子(Osx)、骨钙素(OCN)和RUN相关转录因子2(RUNX2)表达。观察各组ALP染色和茜素红染色情况,比较细胞增殖活力、ALP活性,分析各组SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达,验证LncRNA H19和miR-19b-3p的靶向关系。结果:与对照组、LncRNA-NC组比,H19组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量增加,miR-19b-3p表达降低(P<0.05),与H19组、miR-NC组比,miR-19b-3p组LncRNA H19和SOX9、Osx、OCN、RUNX2的mRNA表达及SOX9、BMP-2、OPN蛋白表达、ALP活性、矿化结节形成量降低,miR-19b-3p表达增加(P<0.05)。各组细胞24h、48h、72h的吸光度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。LncRNA H19和miR-19b-3p间存在靶向关系。结论:LncRNA H19能负向调控miR-19b-3p,上调SOX9,有助于人ADMSC细胞向成骨细胞分化。