转录因子增强子结合蛋白-4基因沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

目的观察内源性转录因子增强子结合蛋白-4(AP-4)沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将人子宫内膜癌细胞(HEC-1-A和RL95-2)分为NC组、si#1组、si#2组,si#1组转染siTFAP4片段1,si#2组转染si-TFAP4片段2,NC组转染对照siRNA。采用Hoechest 33258染色观察凋亡核形态,采用Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术测算细胞凋亡率,采用real-time PCR技术检测存活素(Survivin)mRNA表达,采用生物信息学分析预测Survivin编码基因BIRC5的启动子区域内是否存在AP-4的结合位点,采用染色体免疫共沉淀技术验证AP-4是否结合到BIRC5的启动子区域,采用双荧光素酶报告系统检测BIRC5的启动子转录激活情况。结果在HEC-1-A、RL95-2细胞中,与NC组相比,si#1组、si#2组凋亡核型细胞数均增加,细胞凋亡率均增加,Survivin mRNA相对表达量均减少(P均<0.05)。BIRC5的启动子区域内存在一个高置信度的AP-4结合位点,沉默HEC-1-A、RL95-2细胞内源性AP-4后能降低AP-4对BIRC5启动子区域的结合并抑制其转录激活状态。结论沉默内源性AP-4能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,其机制可能为降低了AP-4对Survivin的转录激活,从而诱导了肿瘤细胞的凋亡。

潜在转化生长因子β结合蛋白4影响肿瘤细胞伪足形成抑制结直肠癌转移的分子机制研究

目的 探究潜在转化生长因子β结合蛋白4(latent transforming growth factor beta binding protein 4,LTBP4)通过影响肿瘤细胞伪足形成从而遏制结直肠癌细胞转移的分子机制。方法 在结直肠癌细胞株DiFi中使用小干扰si-LTBP4敲减LTBP4,在结直肠癌细胞株HCT15中使用LTBP4过表达质粒过表达LTBP4。使用人源慢病毒在DiFi细胞株中稳定敲减/不敲减LTBP4构建稳转细胞株shLTBP4和shNC。Western blot法检测LTBP4、原肌球蛋白4(tropomyosin 4,TPM4)、金属基质蛋白酶14(matrix metalloproteinase-14,MMP14)及酪氨酸激酶底物5(tyrosine kinase substrate 5,TKS5)等蛋白。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测LTBP4及TPM4的表达。Transwell迁移实验检测敲低/过表达LTBP4后结直肠癌细胞的体外转移能力。使用裸鼠尾静脉注射shLTBP4或shNC稳转细胞株构建裸鼠肺转移模型及阴性对照,检测结直肠癌细胞敲减LTBP4后的体内转移能力。转录组测序检测差异基因表达情况。鬼笔环肽染色观察敲低LTBP4后细胞骨架改变及侵袭性伪足形成情况。结果 qPCR实验检测发现,LTBP4在DiFi、HCT8和KM12C细胞株中均高表达(均P<0.05),在HCT15和KM12SM细胞株中均低表达(均P<0.01)。Westen blot检测发现,LTBP4在DiFi、HCT8和KM12C细胞株中均高表达(均P<0.01),在HCT15、KM12SM及RKO细胞株中均低表达(均P<0.05)。在高表达LTBP4的DiFi细胞株中转染小干扰si-LTBP4,敲低LTBP4,转染后72 h后进行transwell迁移实验发现,肿瘤细胞迁移能力增强(P<0.01);而在低表达LTBP4的HCT15细胞株中过表达LTBP4,72 h后肿瘤细胞迁移能力减弱(P<0.01)。裸鼠肺转移模型在通过尾静脉注射稳转细胞株shLTBP4以及shNC 5周后进行小动物活体荧光成像发现,敲减LTBP4后,小鼠肺部荧光信号增强(P<0.01)。高通量转录组测序发现,在DiFi细胞株中敲减LTBP4使细胞骨架蛋白TPM4的表达量增加(P<0.01),维持细胞运动功能(如肌动蛋白丝束收缩、应力纤维改变和肌动蛋束的调节)相关通路显著富集(均P<0.05)以及细胞形态改变相关通路(如轴突伸展调节、突触前膜、核孔和活性离子跨膜传输等)显著富集(均P<0.05)。Western blot、qPCR及免疫荧光实验验证DiFi细胞株中敲减LTBP4促进细胞运动相关蛋白TPM4的表达(均P<0.01)。结论 LTBP4可以通过调控TPM4的方式抑制侵袭性伪足的形成从而遏制结直肠肿瘤细胞的转移。

慢性心力衰竭患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3和转录因子GATA结合蛋白4与心室重构及心功能的相关性

目的探究慢性心力衰竭(CHF)患者血清环状RNA同源域相互作用激酶3(circHIPK3)和转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与心室重构及心功能的相关性。方法选取2021年6月至2023年6月河南科技大学第一附属医院收治的152例慢性心力衰竭(CHF)患者为观察对象,作为CHF组,选取同期健康体检者110例,作为对照组,参照纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级标准将CHF患者分为Ⅰ~Ⅱ级(53例)、Ⅲ级(50例)、Ⅳ级(49例),采用实时荧光定量PCR法检测血清样本中circHIPK3表达水平,酶联免疫吸附法检测血清中GATA4蛋白水平,彩色多普勒超声心动图检测心室重构及心功能指标:左心室质量指数(LVMI)、左心室重构指数(LVRI)、左心室后壁厚度(LVPW)、左室舒张内径(LVEDD)、左心室短轴缩短率(LVFS)、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF),多因素logistic回归分析CHF患者心功能分级的影响因素,Pearson法分析CHF患者血清circHIPK3、GATA4与LVMI、LVRI、LVPW、LVEDD、LVFS、CO、LVEF的相关性。结果与对照组比较,CHF患者血清中circHIPK3[(1.14±0.25)比(1.89±0.59)]、GATA4[(17.26±2.52)pg/ml比(26.94±4.24)pg/ml]水平显著升高,差异存在统计学意义(t=12.538、21.363;P<0.05),circHIPK3、GATA4水平随心功能分级的增加而升高。circHIPK3、GATA4、LVMI是心功能分级为Ⅲ~Ⅳ级的独立危险因素,CO、LVEF是保护因素(P<0.05)。CHF患者血清中circHIPK3、GATA4水平与LVMI、LVPW、LVEDD呈正相关,与LVRI、LVFS、CO、LVEF呈负相关(P<0.05);CHF患者血清中circHIPK3与GATA4呈正相关(P<0.05)。结论circHIPK3、GATA4在CHF患者血清中呈现高表达,与心室重构、心功能指标存在一定关联性,可能对该病的诊治、预后评估有重要参考价值。

激活增强子结合蛋白4在胃癌中的表达及其临床意义

目的:探讨激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4,AP4)在胃癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR和Western blot检测胃癌细胞株BGC823和正常胃上皮细胞中AP4 mRNA和蛋白的表达;应用RT-PCR及免疫组化法检测90例胃癌组织中AP4 mRNA和蛋白的表达;进一步采用Log-rank检验和Cox回归模型对结直肠癌患者的预后因素进行分析,并用Kaplan-Meier计算不同AP4表达情况患者的生存率曲线。结果:与正常胃上皮细胞相比,胃癌细胞株BGC823中AP4 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(均P <0. 05);在胃癌组织中,AP4 mRNA的表达水平也明显高于配对的癌旁组织(3. 848±0. 426 vs 1. 411±0. 405,P <0. 05);在蛋白水平,胃癌组织也显著高于配对的癌旁组织,且AP4蛋白表达与胃癌的脉管浸润(P <0. 05)、浸润深度(P <0. 05)及TNM分期(P <0. 05)相关,而与患者的性别、年龄、分化程度、肿瘤位置、淋巴结转移和远处转移无关(均P> 0. 05); Kaplan-Meier单因素回归分析显示,AP4蛋白是影响胃癌患者预后的重要因素(P <0. 05),进一步Cox多因素回归分析显示AP4蛋白是胃癌患者的独立预后因素(P <0. 05)。结论:AP4高表达与胃癌的发生、发展、转移及预后关系密切,可能成为协助胃癌诊断和治疗的新的生物标志物。

多嘧啶结合蛋白3与信号转录及转录激活因子在胃癌组织中的表达及临床病理意义

目的探讨PTBP3与STAT3在胃癌组织中的表达与临床病理因素的关系。方法采用免疫组化染色方法检测100例胃癌组织和癌旁组织中PTBP3、STAT3的表达,分析与临床病理因素之间的关系,并且比较两种蛋白不同表达组间患者的预后。结果PTBP3、STAT3在胃癌组织中表达水平(分别为72%、63%)明显高于癌旁组织(分别为23%、19%),差异具有统计学意义(P<0.05);两者表达与胃癌患者的肿瘤大小、浸润深度、分化程度及淋巴结转移情况关系密切(P<0.05),两者在胃癌组织中表达呈正相关(r=0.306,P<0.05)。两种蛋白阴性表达组的生存率高于阳性组(P<0.05)。结论PTBP3、STAT3蛋白的表达与胃癌的临床病理学特征关系密切,两种蛋白阴性表达组患者预后明显优于阳性表达组。二者的联合检测将有助于胃癌的诊断以及恶性程度和预后的评估。

羟基积雪草苷对KKay小鼠附睾脂肪中蛋白激酶A、叉头转录因子1及转录因子CCAAT增强子结合蛋白β表达的影响

目的观察羟基积雪草苷对KKay小鼠体重的影响。方法将16只10周龄雄性肥胖糖尿病模型小鼠KKay/TaJcl适应性喂养1周后,随机分为模型组8只和羟基积雪草苷组8只(MA组),其中模型组以去离子水灌胃,MA组以羟基积雪草苷40 mg/(kg·d)灌胃,连续干预9周。每天记录每只小鼠的体质量及饮食量,通过HE染色观察KKay小鼠附睾脂肪组织的病理学变化,Western blot法检测附睾脂肪中蛋白激酶A(PKA)、叉头转录因子1(FOXO1)、转录因子CCAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)的磷酸化表达水平。结果与模型组小鼠比较,MA组可明显抑制小鼠的体质量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。附睾脂肪的HE染色结果显示,羟基积雪草苷干预KKay小鼠9周后,与模型组比较,MA组的附睾脂肪组织明显变的紧密,并且细胞大小也明显缩小。与模型组比较,羟基积雪草苷干预9周后可明显促进小鼠附睾脂肪组织中PKA蛋白的磷酸化,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,羟基积雪草苷可明显抑制小鼠附睾脂肪组织中FOXO1蛋白的磷酸化,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,羟基积雪草苷干预9周后,可明显抑制小鼠附睾脂肪中C/EBPβ蛋白磷酸化的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论羟基积雪草苷可以明显抑制小鼠体质量增加,促进PKA蛋白的磷酸化表达,抑制FOXO1、C/EBPβ蛋白的磷酸化表达,对肥胖症具有潜在的治疗效果。

肺癌组织中CCAAT/增强子结合蛋白-α的表达变化及意义

目的观察转录因子CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBPα)在肺癌中的表达变化,并探讨其意义。方法采用PV-9000免疫组织化学法,检测30例肺癌患者肺癌组织及其正常肺组织中C/EBPα的表达水平。结果 C/EBPα在肺癌组织中的表达较正常肺组织表达下调(χ2=28.71,P<0.05)。C/EBPα表达与肿瘤大小和肿瘤分化程度有关(P<0.05)。C/EBPα表达是肺癌患者5年总体生存率的独立预后影响因素,低表达患者平均生存期明显短于高表达患者。结论 C/EBPα在肺癌组织中低表达,与肺癌的大小、分化程度关系密切,可作为评估肺癌患者预后的有价值指标。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3和叉头样转录因子O4在胃癌组织中的mRNA表达水平及临床意义探讨

目的：探讨胃癌组织中胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）和又头样转录因子04（FOX04）在的表达及与胃癌，临床病理参数及预后的关系。方法：筛选本院手术切除的胃癌组织及相应癌旁组织标本各75例，应用RT-PCR技术检测胃癌组织和对应的癌旁组织中IGFBP-3和FOX04mRNA表达，分析其与胃癌临床病理参数间的关系。结果：胃癌组织中IGFBP-3mRNA和FOX04mRNA阳性检出率分剐为16．67％（12例）、19．44％（14例），明显低于癌旁组织中IGFBP-3mRNA（84．72%，61例）、FOXO4mRNA（86．11％。62例）的阳性检出率（p〈0．01）。胃癌组织中IGFBP-3和FOXO4mRNA的表达显著低于癌旁组织（P〈0．01）。胃癌标本组织中IGFBP-3和FOX04mRNA的表达与胃癌患者的年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤部位无关（P〉0．05），而与浸润深度、分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈显著性相关（P〈0．01）。1年期随访：23例死亡，49例存活；死亡组患者入院时胃癌标本组织中IGFBP-3和FOXO4mRNA表达显著低于存活组（P〈0．01）。结论：IGFBP-3和FOXO4mRNA在胃癌组织中低表达，与胃癌的临床病理参数和患者的预后密切相关。

非肌性肌球蛋白重链9、信号转导和转录激活因子4、尿激酶型纤溶酶原激活物单核苷酸多态性与新疆维吾尔族特发性膜性肾病相关性

目的探讨非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)(rs12107)、信号转导和转录激活因子4(STAT4)(rs3024912)、尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)(rs4065)位点单核苷酸多态性与特发性膜性肾病相关性。方法对2012年12月-2016年12月在新疆维吾尔自治区人民医院肾活检确诊的90例维吾尔族特发性膜性肾病(IMN)患者为病例组,90例维吾尔族健康对照,采用基因测序方法分析rs12107、rs3024912、rs4065位点单核苷酸多态性(SNP),分析其基因型与IMN易感性及IMN肾功能相关性。结果病例组rs12107位点CC基因型、C等位基因频率(46.67%,63.33%)高于对照组(28.89%,48.33%),差异有统计学意义(P=0.013,P=0.004);C等位基因携带者患IMN的风险是T等位基因的2倍(OR=1.85,95%CI=1.21-2.81);rs12107位点CC基因型较non-CC基因型的患者发生肾功能衰竭的风险高(OR=4.38,95%CI=1.80-2.92,P=0.002);病例组rs3024912位点GG基因型、G等位基因频率(50.00%,61.11%)高于对照组(28.89%,45.00%),差异有统计学意义(P=0.013,P=0.002);G等位基因携带者患IMN的风险是T等位基因的2倍(OR=1.92,95%CI=1.26-2.92);rs3024912位点GG基因型的患者是非GG基因型的患者发生肾功能衰竭风险的3倍(OR=3.20,95%CI=1.28-8.01,P=0.012);rs4065位点只有TT一种基因型,未见到TC、CC基因型。结论新疆维吾尔族MYH9基因rs12107位点存在C/T多态性,CC基因型在IMN患者中的频率高于正常对照组,且与IMN肾功能进展相关。STAT4基因rs3024912位点GG基因型既是IMN的功能基因,亦是其易感基因。uPA rs 4065位点未发现T/C多态性。

蛋白精氨酸N-甲基转移酶4上调八聚体结合转录因子4表达促进胃癌细胞的干性

目的探讨蛋白精氨酸N-甲基转移酶(protein arginine N-methyltransferase,PRMTs)调控八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor4,Oct4)的表达及其对胃癌细胞"干性"的影响。方法以pc DNA3.1载体构建PRMT4过表达质粒,转染至人胃腺癌MKN45细胞;倒置相差显微镜下观察肿瘤细胞成球能力的变化;qRT-PCR和Western blot检测胃癌干细胞标志物CD44、Lgr5及"干性"维持分子Nanog、Oct4的改变;继而构建含Oct4基因启动子荧光素酶报告载体,分析PRMT4对Oct4启动子活性的影响;最后采用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)实验证实PRMT4与Oct4基因启动子结合情况。结果 MKN45细胞转染蛋白精氨酸N-甲基转移酶-4基因过表达载体后,形成肿瘤干细胞球的能力显著增强;随后qRT-PCR及Western blot检测结果显示胃癌干细胞标志物CD44、Lgr5的mRNA及蛋白水平上调;此外,过表达PRMT4可明显增加"干性"维持分子Oct4的mRNA及蛋白水平,而对Nanog则无明显影响;双荧光素酶实验结果显示,与对照组相比,PRMT4过表达组Oct4的启动子活性明显增强(P<0.05);染色质免疫共沉淀实验结果证实,PRMT4可与Oct4启动子结合。结论 PRMT4可结合至Oct4基因启动子上,通过增加启动子活性,从而促进Oct4转录及表达,进而增强胃癌细胞的干性。

四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及TFAP4蛋白的作用机制

目的 探讨四君子汤对胃癌肿瘤干细胞标志物活性及转录因子激活增强子结合蛋白(TFAP)4蛋白的作用机制。方法 SGC-7901干细胞分为A组(SGC-7901干细胞)、B组(SGC-7901干细胞在75μl 2.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、C组(SGC-7901干细胞在75μl 5%大鼠四君子汤含药血清中培养)、D组(SGC-7901干细胞在75μl 7.5%大鼠四君子汤含药血清中培养)及E组(SGC-7901干细胞+含有1 mg/ml的5-氟尿嘧啶培养基中培养)。采用倒置显微镜观察SGC-7901干细胞形态;比较SGC-7901细胞及SGC-7901干细胞及集落形成能力;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western印迹检测各组干细胞标志物CD44及CD133蛋白,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2及TFAP4蛋白。结果 SGC-7901干细胞随着生长周期的延长,球体逐渐增大,3 d时体积较小结构松散,4 d时细胞呈现椭圆形生长,5 d时细胞结构更致密,形态更加接近球形,且一个球体所包含细胞数目可达到数十个;SGC-7901及SGC-7901干细胞的细胞集落数组间比较存在显著差异(P<0.001);与A组相比,B、C、D及E组24、48、72及96 h时SGC-7901干细胞活性均显著降低(P均<0.05),与B组相比,C、D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),与C组相比,D、E组上述时间细胞活性显著降低(P<0.05),组间比较存在统计学差异(F=112.900,P<0.001);与A组比较,B组、C组、D组及E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4显著降低(P<0.05)。与B组相比,C、D、E组干细胞凋亡率、Bax显著增加,CD44、CD133、Bcl-2及TFAP4降低(P<0.05),与C组相比D、E组有显著意义(P<0.05)。D组与E组上述指标无统计学意义(P>0.05)。结论 四君子汤含药血清可以显著抑制胃癌肿瘤干细胞标志物活性,通过抑制Bcl-2表达激活Bax加快胃癌干细胞凋亡,研究机制可能与抑制TFAP4活性相关。

复方甘芍贴剂对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4表达的影响及意义

目的 探讨复方甘芍贴剂干预治疗对多囊卵巢综合征模型大鼠卵巢颗粒细胞转录因子GATA结合蛋白4（GATA-4）的影响及意义. 方法 6周龄的SD雌性大鼠48只,随机分为正常对照组（12只）和实验组（36只）.实验组用来曲唑法建立多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠模型,然后随机分为PCOS模型组、达英-35治疗组和外用复方甘芍贴剂组,分别给予相应的处理方案.于12周龄时取双侧卵巢组织,分别用免疫组织化学法和Westernblot方法检测GATA4的蛋白表达. 结果 （1）正常对照组、复方甘芍贴剂组和达英-35治疗组大鼠卵巢组织颗粒细胞免疫组化检测后GATA4灰度值[（129.4±9.9）、（115.1±7.0）、（112.4±7.9）]低于PCOS模型组（162.9±9.4）,差异有统计学意义.（2）采用Western blot方法检测正常对照组、复方甘芍贴剂组和达英-35治疗组大鼠卵巢颗粒细胞GATA4蛋白表达水平[（0.9±0.1）、（1.0±0.1）、（1.1±0.3）]为均低于PCOS模型组（1.6±0.1）,差异有统计学意义. 结论 复方甘芍贴剂可能通过抑制GATA-4的表达恢复颗粒细胞的功能而改善卵泡发育并恢复排卵。

环磷腺苷效应元件结合蛋白转录共激活因子在食管癌中的表达及与临床病理的关系

探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)转录共激活因子1(CRTC1)在食管癌组织与癌旁组织中的转录水平和翻译水平变化,及其变化与临床病理的关系。收集25例食管癌鳞癌患者的癌组织及与之配对的癌旁组织,通过qRT-PCR检测CRTC1的mRNA水平,Western blot检测CRTC1的蛋白水平。结果表明:在食管癌中,CRTC1蛋白表达低于癌旁组,而mRNA水平高于癌旁组;CRTC1在转录水平上与肿瘤位置和淋巴结转移有关。由此可见:CRTC1在食管癌中存在异常表达,CRTC1的mRNA有望用于食管癌诊断及淋巴结转移评估。

转录激活因子-4、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂在卵巢癌组织中的表达及临床意义

目的探讨卵巢癌组织中转录激活因子-4(ATF-4)、第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂(SMAC)蛋白的表达情况及临床意义。方法收集90例卵巢癌患者的卵巢癌组织标本和90例卵巢良性肿瘤患者的良性肿瘤组织标本。采用免疫组化染色法检测两种组织中ATF-4、SMAC蛋白的表达情况,并对卵巢癌组织中ATF-4、SMAC蛋白表达与卵巢癌患者病理特征的关系进行分析。结果免疫组化染色结果显示,卵巢癌组织中ATF-4的阳性表达率明显高于卵巢良性肿瘤组织(P﹤0.01)。卵巢癌组织中SMAC蛋白的阳性表达率明显低于卵巢良性肿瘤组织(P﹤0.01)。FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、组织学分级为G3级的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中ATF-4蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、组织学分级为G1~G2级的患者(P﹤0.05);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、组织学分级为G3级的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中SMAC蛋白的阳性表达率均明显低于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、组织学分级为G1~G2级的患者(P﹤0.01);不同病灶直径的上皮性卵巢癌组织中ATF-4、SMAC蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论上皮性卵巢癌组织中ATF-4蛋白的表达上调,SMAC蛋白的表达下调,且ATF-4、SMAC蛋白表达可能与上皮性卵巢癌患者的病情进展有一定关系。

丙酮酸脱氢酶E1α亚单位、转录激活反应RNA结合蛋白1在表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌中的表达及对患者预后的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)、转录激活反应RNA结合蛋白1(TARBP1)在表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法取95例接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者的肿瘤组织,免疫组化法检测PDHA1、TARBP1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。随访3年,记录患者的总生存率,NSCLC患者预后的影响因素采用Cox风险比例回归模型分析。结果95例NSCLC患者肿瘤组织中,PDHA1阳性表达率为45.26%,阴性表达率为54.74%;TARBP1阳性表达率为74.74%,阴性表达率为25.26%。分化程度为中低分化、淋巴结转移NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1蛋白的阳性表达率较低、TARBP1蛋白的阳性表达率较高。至随访结束,95例NSCLC患者病死67例,生存28例。PDHA1阳性表达患者总生存率为44.2%,明显高于PDHA1阴性表达患者的17.3%(P﹤0.01);TARBP1阳性表达患者的总生存率为18.3%,明显低于TARBP1阴性表达患者的62.5%(P﹤0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为中低分化、有淋巴结转移、PDHA1表达阴性、TARBP1表达阳性均是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1阴性表达率较低、TARBP1阳性表达率较高,且PDHA1阴性表达、TARBP1阳性表达患者的预后较差。

环磷酸腺苷应答元件结合蛋白调控的转录共激活因子在肿瘤发生发展中作用的研究进展

环磷酸腺苷应答元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)调控的转录共激活因子(CREB-regulated transcription coactivators,CRTCs)是一个新发现的细胞内信号整合子家族,能极大地增强CREB的活性,而CREB作为细胞内的重要转录因子,参与调节细胞众多的生理活动。越来越多的研究表明,CRTCs参与调控细胞的生长、分化、增殖、存活、DNA损伤修复和凋亡相关的信号通路,在肿瘤的发生发展中起着重要作用。本文概要介绍CRTCs在肿瘤领域的研究进展。

转录因子腺病毒E4启动子结合蛋白4在肿瘤中的研究进展

腺病毒E4启动子结合蛋白4(E4BP4)是一种含有碱性亮氨酸拉链的转录因子,在乳腺癌、肺癌、甲状腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中高表达,参与肿瘤的发生发展、转移和侵袭,但关于E4BP4在肿瘤研究中的相关综述较少。本文检索并总结相关文献,概述了E4BP4在不同肿瘤发生发展中的作用,为深入研究E4BP4在肿瘤中的作用机制以及基于E4BP4分子治疗靶点的探究提供理论支撑。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。

c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4激活酪氨酸激酶/信号转导与转录激活因子促进三阴性乳腺癌机制研究

目的探讨c-Myc调控葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)激活酪氨酸激酶(JAK)/信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路促进三阴性乳腺癌(TNBC)进展机制。方法通过生信分析GLUT4、c-Myc关联性及GLUT4与乳腺癌临床病理特征间关系。收集三阴性乳腺癌患者临床样本,免疫组织化学检测GLUT4和c-Myc表达水平。构建敲除c-Myc的MDA-MB-231细胞株,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测GLUT4表达水平。构建敲除GLUT4和同时敲除GLUT4及c-Myc的MDA-MB-231细胞株,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Transwell检测迁移和侵袭。Western blot进一步分析c-Myc调控GLUT4对JAK/STAT的影响。正态分布计量资料比较采用独立样本t检验,多组资料组间比较采用方差分析。结果生信分析结果显示,在乳腺癌中GLUT4明显下调(P<0.01)且与乳腺癌TNM分期、病理分级、PAM50分型等相关。免疫组织化学评分结果显示,c-Myc在TNBC癌组织中表达显著高于癌旁组织(7.233比4.567,t=4.551,P<0.01),而GLUT4显著低表达(4.800比7.933,t=5.702,P<0.01)。在MDA-MB-231细胞中敲除c-Myc,RT-qPCR结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(2.486±0.273比1.070±0.140,F=55.005,P<0.01),Western blot结果显示,c-Myc敲除组GLUT4表达量高于阴性对照组(0.691±0.041比0.431±0.055,F=29.027,P<0.01)。构建GLUT4低表达的MDA-MB-231细胞株,RT-qPCR结果显示,GLUT4沉默组表达量低于阴性对照组,差异有统计学意义(0.507±0.076/0.137±0.025/0.317±0.085比1.150±0.200,F=45.016,P<0.01)。CCK-8结果显示,组细胞存活率高于阴性对照组(128.614±13.780比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01),继续敲除c-Myc后细胞存活率低于阴性对照组(70.977±5.906比95.875±9.130,F=26.927,P<0.01)。流式细胞术结果显示,同时敲除GLUT4及c-Myc后细胞凋亡高于阴性对照组(12.170±1.283比3.263±0.691,F=102.946,P<0.01)。Transwell结果显示,敲除GLUT4后细胞迁移数高于阴性对照组[(237.333±14.364)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数高于阴性对照组[(257.000±9.539)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力增强,而同时敲除c-Myc和GLUT4后细胞迁移数低于阴性对照组[(67.000±14.177)个比(156.667±10.693)个,F=91.074,P<0.01]、侵袭数低于阴性对照组[(91.667±13.650)个比(152.333±5.132)个,F=90.437,P<0.01],细胞迁移侵袭能力减弱。Western blot结果显示,敲除GLUT4后c-Myc(0.814±0.060比0.447±0.028)、p-JAK2(0.629±0.038比0.380±0.030)、p-STAT3(0.698±0.029比0.288±0.016)表达量均高于相应阴性对照组(F=17.541,P<0.01),而继续敲低c-Myc后,GLUT4表达量高于单纯敲低GLUT4组(0.618±0.029比0.529±0.049,F=68.772,P<0.05),p-JAK2(0.510±0.033比0.629±0.038)、p-STAT3(0.410±0.050比0.698±0.029)表达量低于单纯敲低GLUT4组(F=68.772,P<0.01)。结论在三阴性乳腺癌中,c-Myc可抑制GLUT4表达并通过调控JAK/STAT信号通路影响肿瘤细胞的增殖侵袭和凋亡。