转录因子激活蛋白-2α重组质粒的构建及其对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响

目的构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响。方法采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定。利用慢病毒包装系统将重组质粒转染入293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的m RNA和蛋白的表达。通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化。结果成功构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株。重组质粒组TFAP2αm RNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P<0.05)。MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P<0.05)。平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P<0.05)。与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G_0/G_1期细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05),G_2/M期细胞比例无统计学差异(P>0.970)。结论过表达TFAP2α能明显降低肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2细胞增殖能力,影响细胞周期变化,停留在G_0/G_1期的细胞明显增加,而S期的细胞明显减少,使其发生G_1/S期阻滞从而抑制细胞增殖。

转录因子激活蛋白-2α在肿瘤中的作用与研究进展

转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)是一种能与DNA特异性结合的转录因子,它参与调节正常细胞增殖分化及胚胎发育,并通过调控信号转导来开启、关闭、增强或减弱多种靶基因的表达,对肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭及转移发挥重要调控作用。近年来国内外对TFAP2α基因在肿瘤中的作用进行了大量研究,TFAP2α在多种肿瘤组织中存在异常表达,且表达程度与肿瘤类型、临床分期、病理分化程度等有着密切的关系,它在不同肿瘤中发挥促癌或抑癌的作用。本文重点介绍TFAP2α基因的结构和功能及其在肿瘤发生发展中的作用。

转录因子激活蛋白-2α在大肠癌组织的表达及意义

目的研究转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)的表达在大肠癌发生发展过程中的作用。方法以60例大肠癌手术标本为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法分别检测大肠癌和癌旁正常组织中AP-2α基因的mRNA表达水平;以60例大肠癌组织AP-2αmRNA的表达均值为界限,将大肠癌组织AP-2αmRNA表达分为高、低表达,比较不同临床资料、病理参数下大肠癌组织AP-2αmRNA的表达率。结果大肠癌组织中AP-2αmRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01);大肠癌组织AP-2αmRNA低表达率在不同性别、年龄、肿瘤部位患者差异均无统计学意义(P>0.05),但其表达降低或缺失与大肠癌的组织学分级、Duke's分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05,P<0.01)。结论转录因子AP-2α在大肠癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为大肠癌防治的一个新靶点。

转录因子激活蛋白-2α在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的观察转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)在急性肺损伤(ALI)大鼠模型肺组织中的表达差异,为ALI的治疗提供新的思路。方法将40只健康SPF级成年SD大鼠,随机分成对照组(A组)、油酸组(B组)、盐酸组(C组)和脂多糖(LPS)组(D组)。A组:不做任何处理;B组:尾静脉注射高浓度(99%)油酸0.04 mL/kg;C组:经气管导管给予0.1 mol/L的盐酸1.0 mL/kg;D组:经气管导管给予LPS 16 mg/kg。均在4 h后,取动脉血清测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,立即处死大鼠后取肺组织光镜下进行病理学分析,并用免疫组化和Western blot方法检测AP-2α的阳性表达。结果 (1)在光镜下,与A组比较,B、C、D组均可见肺泡间隔增宽,有明显肺间质及肺泡水肿,肺泡腔内有浆液性渗出物及大量炎性反应细胞、红细胞渗出,部分可见"透明膜"样改变;B、C、D组肺组织光镜下病理评分均高于A组。(2)B、C、D组肺组织中AP-2α的表达较A组明显升高(P<0.05)。(3)B、C、D组动脉血清中TGF-β1和MCP-1浓度较A组明显升高(P<0.05)。结论 ALI大鼠模型动脉血清中的TGF-β1和MCP-1的含量明显升高;AP-2α的表达在ALI大鼠模型肺组织中存在明显升高,可能与ALI的发生、发展有关,为ALI的治疗提供新的思路。

多沙唑嗪通过转录因子激活蛋白-2α诱导HeLa细胞凋亡

目的研究α1-肾上腺素受体拮抗剂多沙唑嗪对HeLa细胞凋亡的影响以及转录因子激活蛋白-2α(activator protein-2α,AP-2α)在多沙唑嗪诱导HeLa细胞凋亡中发挥的作用。方法HeLa细胞经过多沙唑嗪处理、过表达AP-2α或反义寡核苷酸干扰AP-2α表达后,通过流式分析检测凋亡;以相对定量PCR和Western blot分析检测AP-2α和caspase-3的表达。结果多沙唑嗪以剂量依赖性方式增加HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率,上调AP-2α和caspase-3的表达。AP-2α的过表达导致多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率增加,增强caspase-3的表达;而反义AP-2α却导致多沙唑嗪诱导的HeLa细胞的凋亡率和总细胞死亡率降低,部分地阻断了多沙唑嗪对caspase-3表达的增强效应。结论多沙唑嗪以剂量依赖性方式诱导HeLa细胞凋亡,转录因子AP-2α在多沙唑嗪诱导的HeLa细胞凋亡中发挥了作用。

大肠癌中转录因子激活蛋白-2α与癌胚抗原的表达及其相关性

目的探讨转录因子激活蛋白-2α（AP-2α）与癌胚抗原（CEA）在大肠癌发生、发展过程中的表达情况及其表达的相关性。方法采用实时荧光定量PCR的方法分析60例大肠癌组织及正常组织中AP-2α mRNA及CEAmRNA表达差异，分析其与患者临床资料、病理参数之间的关系，研究60例大肠癌组织中AP-2αmRNA及CEAmRNA表达的相关性。结果大肠癌组织、正常组织AP-2α mRNA相对表达值（RQ）分别为3．264±0．877、17．484±3．608；CEAmRNARQ值分别为16．421±4．987、2．219±1．313；大肠癌组织中AP-2α mRNA的表达显著低于正常组织，CEAmRNA显著高于正常组织，差异均有统计学意义（P〈0．01）；大肠癌组织AP-2α mRNA和CEAmRNA表达情况在不同性别、年龄、肿瘤部位中差异均无统计学意义（P〉0．05）；大肠癌的不同组织学分级及Dukes分期中。CEA呈现出过表达状态，而AP-2α呈现出表达降低或缺失状态；60例大肠癌组织中AP-2α和CEA的表达具有相关性（r=-0．790，P〈0．01），且呈负相关关系（-1〈r〈0）。结论转录因子AP-2α在大肠癌组织中呈现低表达或表达缺失状态，AP-2α和CEA的表达呈现一定的负相关关系，提示AP-2α和CEA可为肿瘤的诊断和治疗提供新的依据。

结直肠癌转录因子激活蛋白2α和2β表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系

目的探讨结直肠癌转录因子激活蛋白2α(TFAP-2α)和转录因子激活蛋白2β(TFAP-2β)表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系。方法选取该院收治的147例行腹腔镜根治术的结直肠癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测TFAP-2α和TFAP-2β表达。根据患者术后3年的复发情况,将其分为复发组和未复发组,比较癌组织与切缘正常组织、复发组与未复发组中TFAP-2α和TFAP-2β的表达,并采用Cox回归分析法探讨术后复发的影响因素。结果结直肠癌患者癌组织与切缘正常组织相比,TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低(P<0.05)。随访期间,结直肠癌患者术后复发率为23.13%。复发患者与未复发患者相比,癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高(P<0.05);经Cox回归分析显示,病理分期T3至T4期、N1至N2期、血管侵犯占比较高,以及癌组织TFAP-2α、TFAP-2β阳性表达率降低,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,两者阳性表达率降低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素。

甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2参与盐碱胁迫的响应

转录因子BnHY5-2与植物抗逆性相关。为揭示甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2对盐碱胁迫的响应,主要通过瞬时转化过表达、qRT-PCR分析、亚细胞定位等方法,分析甘蓝型油菜转录因子BnHY5-2对光和盐碱的响应。结果表明,光照处理油菜后,在叶与茎中BnHY5-2基因的表达量均显著高于黑暗条件下,分别为黑暗条件下的29.22,3.15倍,叶片对光的敏感性大于茎,说明叶片是响应光转录因子BnHY5-2的主要部位。在光照条件下应用大连滨海盐碱土种植油菜,处理后BnHY5-2的表达在叶和茎中均显著下调,分别下调53.1%,31.0%;在黑暗条件下应用盐碱处理后BnHY5-2的表达在茎中下调48.2%,而在叶中的表达差异则不显著,表现出器官的差异性,说明叶片对光照条件要求更加严格。在油菜叶片中瞬时过表达BnHY5-2基因时,6个与盐碱相关的候选基因的表达中,有2个(BnNAC32、BnGS)上调表达,分别为原来的1.25,3.28倍;而有4个(Bnamy、BnAsp、BnNHX7、BnTPS)下调表达,分别下降24.8%,25.4%,71.0%,82.0%,同时甜菜碱含量由0.256 mg/g提升至0.573 mg/g,提高了1.24倍,说明过表达BnHY5-2基因会提高油菜的盐碱抗性。亚细胞定位结果显示,转录因子BnHY5-2定位于细胞核中,调控功能基因的表达。因此,BnHY5-2不仅与光信号有关,还参与油菜盐碱抗性。

基质Gla蛋白、信号转导及转录激活因子3、β-联蛋白及基质金属蛋白酶2在胃肠道肿瘤中的研究进展

胃肠道肿瘤是一类常见的肿瘤,近年来,胃肠道肿瘤的发病率在全球范围内一直居高不下,对患者的生命健康造成严重的威胁,因此,临床希望通过各种手段早诊早治以期提高胃肠道肿瘤患者的生存率及生活质量。检测胃肠道肿瘤相关生物标志物是一种比较简单有效的早期诊断方法。目前有关基质Gla蛋白(MGP)的研究相对较少,但已知与胃肠道肿瘤的侵袭转移相关,但未被运用于临床。信号转导及转录激活因子3(STAT3)能够参与肿瘤发展的各个阶段,包括增殖、侵袭、转移等。β-联蛋白(β-catenin)作为WNT/β-catenin信号通路的主要因子,参与胃肠道肿瘤的发生发展。基质金属蛋白酶2(MMP2)参与胃肠道肿瘤的上皮-间充质转化,其表达与肿瘤的转移及预后密切相关。以上四者并未在临床作为肿瘤标志物,但是四者与胃肠道肿瘤密切相关,尤其与侵袭转移关系密切,四者联合检测有望提高胃肠道肿瘤预后判断的准确性。因此,本文对MGP、STAT3、β-catenin以及MMP2在胃肠道肿瘤中的研究进展做一综述。

黄姑鱼转录因子激活蛋白AP2α的克隆和特征分析

转录因子激活蛋白AP2α是一类能特异地结合DNA的核转录因子,参与动物胚胎发育的调节、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生以及免疫反应等多种生物过程。课题组前期通过基因组关联分析(GWAS)发现,AP2α是黄姑鱼(Nibea albiflora)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的候选基因。本研究克隆了黄姑鱼转录因子AP2α,其开放阅读框(ORF)为1275 bp,编码424个氨基酸;所编码的AP2α蛋白质N端是富含脯氨酸和谷氨酰胺(P/Q-rich domain)的反式激活结构域,中间是中心基本结构(central basic region),C端为高度保守的helix-span-helix基序,负责结合DNA和蛋白质二聚化。氨基酸序列多重比对表明,AP2α保守性强,与所检测的鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物同源性在84.63%以上。实时荧光定量PCR检测结果显示,AP2α基因的mRNA广泛分布于所检测的黄姑鱼9种组织样品中,其中血液中的表达量最高;受哈维氏弧菌攻毒感染后,肝脏、脾脏和头肾中AP2α表达量均明显升高,特别是在肝脏中,AP2αmRNA表达水平在24 h时达到攻毒前的39倍。通过构建重组真核表达质粒pGEFP-AP2α并转染HEK293T细胞进行亚细胞定位研究的结果显示,AP2α分布于HEK293T细胞的细胞核中。进一步通过原核克隆表达获得了可溶性的GST-AP2α融合蛋白。以上结果表明,AP2α在黄姑鱼抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。本研究对AP2α在硬骨鱼类先天免疫中的重要功能提供了新的见解,为深入研究黄姑鱼的分子免疫机理和抗病分子育种奠定了基础。

转录因子激活蛋白-2在Buerger’s病中的表达与意义

目的:观察转录因子激活蛋白-2(transcription factor activator protein-2,AP-2)在Buerger’s病中的表达与分布。方法:临床收集2011年1月至2012年3月共23例行腰交感神经节切除术Buerger’s病患者腰交感神经节标本,应用RT-PCR、Western blot方法检测AP-2在Buerger’s病组中基因和蛋白的表达变化,使用免疫组化的方法检测AP-2在Buerger’s病组中的表达分布规律,以观察在该组中的表达特点。临床收集12例正常病例标本以同样方法处理。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,与正常对照组中相比,Buerger’s病组中AP-2基因和蛋白表达水平具有统计学差异(P<0.05),免疫组化显示病理组AP-2表达高于正常组,主要分布在细胞核。结论:Buerger’s病组中AP-2水平升高,表明AP-2在Buerger’s病的发生与发展过程中可能发挥了重要作用。

尿毒症血液透析患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2、转录因子-κB水平与脂代谢相关

目的:探究尿毒症血液透析患者血清脂蛋白相关磷脂酶(Lp-PL)A2、转录因子(NF)-κB表达水平与脂代谢的关系。方法:选取接受血液透析治疗的尿毒症患者106例纳入观察组,选择同期体检的健康人110例作为对照组。检测并记录2组血清Lp-PLA2、NF-κB水平及脂代谢相关指标载脂蛋白B(ApoB)、载脂蛋白A1(ApoA1)、甘油三酯(TG)水平;采用Pearson法分析尿毒症血液透析患者透析后血清Lp-PLA2、NF-κB水平与脂代谢指标的相关性。结果:观察组透析前血清ApoB、TG水平均显著高于对照组(P均<0.05),血清ApoA1显著低于对照组(P<0.05);透析后血清Lp-PLA2、NF-κB水平及ApoB、TG水平均显著升高(P均<0.05),血清ApoA1水平显著降低(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,透析后血清Lp-PLA2、NF-κB水平与ApoB(r=0.664、0.524)、TG(r=0.648、0.544)呈正相关(P均<0.05),与ApoA1呈负相关(r=-0.580、-0.469,P<0.05)。结论:尿毒症血液透析患者透析后血清Lp-PLA2、NF-κB水平均显著升高,可能与脂代谢有关。

组蛋白脱乙酰酶2-核转录因子-κB/激活蛋白-1介导的重度哮喘对糖皮质激素不敏感的分子机制

目的探讨重度哮喘患者对糖皮质激素不敏感的分子机制,尤其从糖皮质激素/糖皮质激素受体(glucocorticoid/glucocorticoid receptor,GC/GR)及组蛋白脱乙酰酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)及其下游的炎性转录因子途径进行研究。方法临床招募健康对照者12例,轻中度哮喘患者12例,重度哮喘患者10例,收集其外周血,进行地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制IL-8释放试验,检测重度哮喘患者外周血单个核细胞(peripheral blood molecule cells,PBMCs)是否存在激素敏感性下降。通过Western blot和细胞免疫荧光染色法检测PBMCs的GRα蛋白质水平及跨膜转运情况。HDAC2活性试剂盒检测PBMCs核蛋白的HDAC2活性,Western blot检测磷酸化NF-κB、激活蛋白1(activating protein-1,AP-1)的亚基磷酸化c-Jun及磷酸化c-Fos的水平。结果重度哮喘患者PBMCs在TNFα诱导IL-8释放实验中表现出对Dex敏感性下降;GR总蛋白质水平虽然代偿性升高,但GRα水平下降且向核内转移减弱;HDAC2活性降低,炎性转录因子NF-κB、AP-1亚基被激活。结论重度哮喘患者的PBMCs中存在激素不敏感,可能是通过HDAC2-NF-κB/Ap-1介导的炎症通路引起了GRα表达量下降和转运能力降低。

转录因子激活蛋白-2a在老年肺腺癌病人中的表达情况及与临床病理参数的相关性

目的探讨转录因子激活蛋白-2a(TFAP-2a)在老年肺腺癌病人中的表达情况及与临床病理参数的相关性。方法通过生物信息学数据挖掘TFAP-2a在肺腺癌组织与正常肺组织中的表达差异及其对肺腺癌预后的影响;收集2015年8月至2020年3月切除的64份老年肺腺癌组织标本及25份老年正常肺组织标本,采用免疫组化染色法测定TFAP-2a的表达情况,分析老年肺腺癌组织中TFAP-2a的表达水平与临床病理参数的相关性。结果GEPIA数据库分析结果显示,肺腺癌组织中TFAP-2a的表达量显著高于正常肺组织(P<0.05),但TFAP-2a的表达水平与肺腺癌的TNM分期无关(P>0.05)。KMplot数据库分析结果显示,TFAP-2a低表达的肺腺癌病人的无复发生存期和总生存期相较于高表达病人明显获益(均P<0.05)。免疫组化染色结果显示,老年肺腺癌组织TFAP-2a高表达的比例显著高于老年正常肺组织(P<0.01),并且在有淋巴结转移及中-低分化的老年肺腺癌病人中,TFAP-2a高表达的比例更高(P<0.05)。结论TFAP-2a在老年肺腺癌病人中呈高表达,过表达TFAP-2a的老年肺腺癌分化更差,更易发生淋巴结转移。

转录因子激活蛋白-1在Buerger’s病中的表达与意义

目的:观察转录因子激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)在Buerger’s病患者腰交感神经元内的表达。方法:收集2011年1月至2012年3月行腰交感神经节切除术的Buerger’s病男性患者腰交感神经节标本,Buerger’s病患者组:23例,对照组:12例。应用免疫组化、RT-PCR、Western blot技术测定对照组腰交感神经节神经元AP-1的表达水平并比较其表达差异。结果:Buerger’s病患者腰交感神经节神经元中AP-1的基因表达(P=0.045 9)、蛋白表达(P=0.028 3),高于对照组。结论:AP-1在调节Buerger’s病细胞增殖和血管炎症反应中发挥着作用。

核转录因子激活蛋白-1对PPARδ表达的调控作用

目的研究在过氧化物酶体增长因子活化受体δ(PPARδ)表达中的相关调控因子.方法用RT-PCR扩增人类PPARδ启动子序列,通过Deletion及重组将不同长短的PPARδ启动子序列转化到PGL3-basic载体中,转染LOVO细胞,通过观测各重组体转染活性,确定PPARδ启动子活性区域.再通过电泳迁移率变更分析(EMSA)、突变等方法确定核转录因子激活蛋白-1(AP1)对PPARδ表达的作用.结果 Deletion及重组转染后发现PPARδ启动子活性区域在序列3361～3464之间,EMSA、突变发现AP1因子结合位点突变后转染活性明显降低.结论 AP1因子结合位点突变后转染活性明显降低,提示AP1是PPARδ的一个增强子.

激活转录因子-2调控小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20分子机制的初步研究

目的:通过克隆激活转录因子-2(ATF-2)基因以及真核表达载体的构建,初步研究ATF-2对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶-20(MMP-20)基因表达的影响。方法:根据引物设计原则设计ATF-2基因逆转录-聚合酶链反应(PCR)引物,从小鼠成釉细胞中提取总RNA逆转录所得c DNA为模板,进行PCR法扩增。得出含有HindⅢ和xhol酶切位点的ATF-2目的基因连接到pc DNA 3.1/myc-His A真核表达载体上;用重组质粒转染小鼠MMP-20基因,观察其对MMP-20基因转录活性的影响。结果:经过PCR引物扩增得到1 463 bp基因片段,将获得的重组质粒pc DNA 3.1/myc-His A-ATF-2双酶切分析鉴定,测序结果与Gen Bank登录基因序列完全一致;双荧光素酶结果显示ATF-2可以促进MMP-20启动子的表达(P<0.01),且在-825^+23(848 bp)启动子区段促进作用最明显。结论:成功实现了ATF-2基因克隆及真核表达载体的构建,并发现ATF-2对MMP-20启动子区域活性表达起正向调节作用。

人转录因子激活蛋白TFAP_2γ促进乳腺癌细胞生长

目的:构建带Flag标签的人转录因子激活蛋白2γ(TFAP_2γ)基因真核表达载体,获得Flag-TFAP_2γ蛋白,检测其对乳腺癌细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人TFAP_2γ基因,并将其正确插入Flag载体;将重组质粒与空载体转染人乳腺癌细胞系ZR75-1和MCF-7细胞后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明,Flag-TFAP_2γ真核表达质粒构建成功,转染ZR75-1和MCF-7细胞后获得表达;生长曲线实验结果表明,TFAP_2γ可促进乳腺癌细胞的生长。结论:构建了带Flag标签的人TFAP_2γ基因真核表达载体,并能在乳腺癌细胞ZR75-1和MCF-7中表达,且能促进细胞的生长。本实验为进一步研究TFAP_2γ在乳腺癌中的功能奠定了基础。

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠核转录因子-κB及基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的:观察核转录因子-κB(Nuclear transcription factors-κB,NF-κB)及基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在实验性大鼠肝纤维化肝组织中的表达,探讨荔枝核总黄酮(Total flavone from Litchi chinensis Sonn.,TFL)抗肝纤维化的作用机制。方法:大鼠随机分为正常对照组、模型组、TFL高剂量组、TFL低剂量组及秋水仙碱(Colchicine,Col)组。模型组、TFL高剂量组、TFL低剂量组及Col组以二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射4周制作大鼠肝纤维化模型;造模同时TFL高、低剂量组分别以TFL[200、100 mg/(kg.d)],Col组以Col 0.1 mg/(kg.d)灌胃给药,正常对照组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,6周后处死大鼠,计算大鼠肝脾指数,检测血清天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、MMP-2,取肝脏同一部位行HE、Masson染色观察大鼠肝纤维化程度,采用免疫组化检测各组肝组织NF-κB、MMP-2的表达。结果:TFL高、低剂量组血清AST、ALT、HA、LN、MMP-2水平及肝脾指数较模型组明显降低(P<0.01),肝组织NF-κB、MMP-2表达及纤维化程度评分亦较模型组明显减低(P<0.05)。结论:TFL具有显著的抗肝纤维化作用,其机制可能与其抑制NF-κB、MMP-2的高表达有关。

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB活性及蛋白表达的抑制

目的:探讨环氧合酶-2选择性抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肝癌细胞株HepG2细胞核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)活性和蛋白表达的影响.方法:不同浓度的塞来昔布作用于HepG2细胞后,应用凝胶电泳迁移率改变分析技术检测HepG2细胞中NF-κBDNA结合活性;用Western blotting法检测HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达.结果:25、50μmol/L塞来昔布作用于HepG2细胞后,药物处理组HepG2细胞NF-κBDNA结合活性明显降低,与空白对照组相比有显著性差异(t=12.58,P=0.000;t=17.97,P=0.000);塞来昔布可明显抑制HepG2细胞NF-κBp65蛋白表达水平,与空白对照组相比,差异均有统计学意义(t=4.24,P=0.013;t=6.38,P=0.003).结论:塞来昔布能有效抑制HepG2细胞NF-κB活性及NF-κBp65蛋白表达.