转录因子C/EBP β的生物学功能

0 引言。转录因子CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein，C／EBP)包括C／EBPα、C／EBPβ、C／EBP δ、C／EBP ε等蛋白，在体内的生物学作用各不相同．C／EBPα在粒细胞形成中具有重要的调节作用C／EBPα基因缺陷可以导致早期的粒细胞分化障碍．C／EBPα功能异常在人急性髓性白血病中十分常见。

恶性黑素瘤细胞miR-508-3p与叉头框转录因子C1的关系及对增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨miR-508-3p与叉头框转录因子C1(forkhead box C1,FOXC1)的关系及其在恶性黑素瘤中的表达和作用机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测mi R-508-3p和FOXC1在HEM正常黑素细胞及A375恶性黑素瘤细胞中的表达;将体外培养的A375细胞分为mimics NC组、mi R-508-3p mimics组、inhibitor NC组和mi R-508-3p inhibitor组,RT-qPCR检测其沉默效果及对FOXC1 mRNA水平的影响;免疫印迹法(Western blot)分别检测FOXC1蛋白的表达量;MTT法检测A375细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后A375细胞侵袭及迁移能力的变化;荧光素酶报告基因技术检测FOXC1是否为mi R-508-3p的直接靶基因。结果与人正常黑素细胞相比,A375细胞中mi R-508-3p表达明显降低,而FOXC1表达明显升高;与inhibitor NC组相比,转染mi R-508-3p inhibitors的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显下调,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显升高;与mimics NC组相比,转染mi R-508-3p mimics的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显升高,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低;mi R-508-3p mimics可降低野生型FOXC1 3’-UTR的荧光素酶报告基因相对活性。结论 mi R-508-3p通过负向调控FOXC1抑制恶性黑素瘤的增殖、迁移和侵袭。

小麦热激蛋白转录因子C家族基因的结构及其在干旱胁迫中的表达

小麦热激蛋白转录因子在热胁迫和耐热性产生的过程中发挥重要作用。为进一步了解小麦热激蛋白转录因子C亚家族,本研究采用全基因组信息保守结构域比对和进化聚类分析,共鉴定了24个小麦TaHsfC基因,并对TaHsfC亚家族成员染色体定位、基因结构、亚细胞定位、对应蛋白质的氨基酸特点、基因表达进行了分析。结果表明,24个TaHsfCs主要分布在5条染色体上,其中A基因组中有7个,B基因组中9个,D基因组中有6个,另外两个所在染色体位置不清楚。TaHsfCs含有0~2个内含子,其中TaHsfC1亚族基因含有1~2个内含子,TaHsfC2亚族基因则含有0~1个内含子。聚类分析表明,小麦TaHsfC成员共分为TaHsfC1和TaHsfC2两个亚族。24个TaHsfCs成员全部定位于细胞核。在15%PEG模拟干旱条件下,干旱敏感品种矮抗58和耐旱品种晋麦47中有10个TaHsfC基因显著上调表达,其中TaHsfC2亚族基因的表达量上调倍数均高于TaHsfC1亚族基因(其中TaHsfC2j和TaHsfC2k未在晋麦47中检测到表达量)。本研究可为探索小麦热激蛋白转录因子C家族基因在小麦抗旱中的分子机制提供一定的理论支撑。

果生刺盘孢致病关键转录因子CfCrzA的功能

由果生刺盘孢Colletotrichumfructicola引起的苹果炭疽叶枯病是我国苹果上的一种新病害。前期通过组学分析发现一个在侵染早期表达的转录因子CfCrzA,本研究拟明确其在果生刺盘孢生长发育和致病中的作用。生物信息学分析显示,CfCrzA为刺盘孢属保守基因。采用同源重组方法获得2个敲除突变体。表型分析显示,突变体ΔCfCrzA与野生型WT生长速率无明显差别;致病性测定显示,ΔCfCrzA对苹果叶片和果实致病力显著下降。玻璃纸接种试验显示ΔCfCrzA孢子萌发率降低26%±3%,附着胞形成率降低43%±1%;叶片组织学观察发现ΔCfCrzA附着胞形成率降低60%±1%,但侵染泡囊和初生菌丝形成不受影响。培养发现ΔCfCrzA对细胞壁胁迫相关SDS的敏感性显著提升。这些结果表明转录因子CfCrzA为果生刺盘孢的关键致病因子,主要通过影响分生孢子萌发、附着胞形成等影响其致病力。

叉头框转录因子C1在结肠癌中表达情况及临床意义

目的探讨叉头框转录因子C1(FOXC1)在结肠癌中的表达情况及临床意义。方法收集北部战区总医院自2009年1月至2010年6月收治的150例确诊结肠癌患者的病理组织切片。采用免疫组化染色的方法观察FOXC1的表达情况;分析FOXC1表达水平与临床参数之间的相关性,以及其与结肠癌患者生存预后之间的相关性。结果FOXC1在结肠癌组织中的表达阳性率高于相应癌旁组织(74.7%比22.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。FOXC1表达水平与TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移密切相关(P<0.05)。FOXC1表达水平越高的结肠癌患者,病死率越高,总体存活率越低,生存期越短(P<0.05)。FOXC1在结肠癌患者中的表达水平与存活率密切相关(危险比2.84,95%可信区间1.61~4.59,P<0.05)。结论FOXC1在结肠癌中高表达且与患者的生存预后密切相关,其可作为预测结肠癌生存预后的潜在分子标志物。

插头/翼状螺旋转录因子C2基因慢病毒载体构建及其在兔BMSCs中的表达

目的构建插头/翼状螺旋转录因子C2(homo sapiens forkhead box C2,Foxc2)基因慢病毒载体并转染兔BMSCs,检测其在BMSCs中的表达,为进一步应用携带Foxc2基因的BMSCs移植治疗股骨头缺血性坏死奠定实验基础。方法通过RT-PCR法获得人Foxc2基因片段,将该片段克隆至包含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的慢病毒载体LV-GFP中,重组获得Foxc2慢病毒质粒,将其与pGC-LV载体、pHelper1.0载体、pHelper2.0载体共转染293T细胞,获得Foxc2基因慢病毒载体;检测病毒滴度。分离、培养兔BMSCs,以Foxc2基因慢病毒载体转染第3代BMSCs,通过荧光表达法判定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI),并以最佳MOI进行转染,倒置荧光显微镜观察、Western blot法检测转染1、3、7 d BMSCs中Foxc2的表达;对转染后BMSCs行成骨诱导,茜素红染色法观察矿化物结节形成情况。结果成功构建Foxc2基因慢病毒载体,经酶切及测序鉴定完全正确,能转染293T细胞并表达GFP,病毒滴度为2×108TU/mL。Foxc2基因慢病毒转染BMSCs的最佳MOI为200,转染BMSCs 3 d后经免疫荧光检测84.5%±4.8%的BMSCs可表达Foxc2。Western blot结果显示Foxc2在BMSCs中高表达,且在7 d内表达水平逐渐升高。成骨诱导培养2周后,茜素红染色示细胞质中有大量红色的钙化基质沉积。结论成功构建并包装获得较高滴度的Foxc2基因慢病毒载体,慢病毒可高效并稳定转染BMSCs,Foxc2表达增加,为基因治疗股骨头缺血性坏死奠定了基础。

过表达插头框转录因子C2经Wnt信号通路调节BMSCs成骨分化的实验研究

目的观察过表达插头框转录因子C2(forkhead/Fox transcription factor 2,Foxc2)经Wnt-β链蛋白(β-catenin)信号通路调节兔BMSCs成骨分化,为基因转染BMSCs修复股骨头坏死提供理论依据。方法利用慢病毒携带Foxc2或绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的重组慢病毒载体Lv-GFP(A组)及LvFoxc2(B组)转染第5代兔BMSCs,以未转染BMSCs为对照(C组)。慢病毒转染后72 h采用水溶性四氮唑-1(water soluble tetrazolium-1,WST-1)法检测细胞活性;慢病毒转染2周,通过免疫荧光染色、Western blot及实时荧光定量PCR检测过表达Foxc2对β-catenin表达水平的影响。然后,在B组中添加不同剂量(0、0.1、1.0μmol/L)β-catenin抑制剂XAV-939,成骨、成脂诱导2周后,采用Western blot和实时荧光定量PCR检测各组成骨因子Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,COLⅠ)、骨钙素(osteocalcin,OCN)及成脂因子过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(peroxisome proliferator activated receptor gamma 2,PPARγ-2)蛋白和基因的表达。结果 WST-1检测示,转染72 h B组细胞活性为130.85%±0.15%,显著高于A组的100.45%±0.35%,差异有统计学意义(t=7.500,P=0.004)。转染2周后,B组β-catenin蛋白和基因表达均明显高于A组(P<0.01)。添加β-catenin抑制剂XAV-939后,细胞中成骨因子OCN、COLⅠ蛋白和m RNA相对表达量均逐渐减少,而成脂因子PPARγ-2蛋白和m RNA相对表达量明显增高,且表达具有剂量依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论过表达Foxc2通过调节Wnt-β-catenin信号通路促进BMSCs成骨分化。

转录因子C／EBPα异常与急性髓系白血病

增强子结合蛋白C／EBPα在造血系统髓系分化中扮演着重要的角色，其功能的改变与白血病的发生发展存在着关联，尤其是与急性髓系白血病（AML）的分类及预后关系密切，同时对AML的治疗具有指导意义。本文就转录因子C／EBPα异常与AML的相关性进行综述。

牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究

旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧光素酶报告载体,采用脂质体法共转染至小鼠C2C12成肌细胞,24 h后检测其双荧光素酶活性。最后,通过PCR扩增MSTN启动子核心片段MSTN-P1,重新构建以MSTN-P1片段替代(CMV)区的重组表达载体pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C,将其分别转染至小鼠C2C12成肌细胞和大鼠下颌腺上皮细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白发光情况,48 h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR检测MEF2C基因在不同细胞中的表达情况。结果显示,在小鼠C2C12成肌细胞中,共转染pcDNA3.1(+)-MEF2C试验组较pGL3-Basic-MSTN试验组能显著增强MSTN启动子的活性(P<0.05),较pGL3-Basic对照组能极显著增强MSTN启动子的活性(P<0.01);MSTN启动子核心片段MSTN-P1能驱动MEF2C基因在小鼠C2C12成肌细胞中的表达量极显著上调(P<0.01),且能驱动MEF2C基因在大鼠下颌腺上皮细胞中的表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,在转录水平,MSTN启动子与MEF2C可能同时参与了牛肌肉生长和分化的调控。

烟草C2H2锌指蛋白转录因子家族成员的鉴定与表达分析

C2H2锌指蛋白转录因子家族在真核生物中具有重要的生物学功能,广泛参与植物叶的发生、花器官的调控、侧枝的形成及逆境胁迫等生命过程。植物C2H2锌指蛋白不仅结合DNA和RNA,而且与蛋白质之间相互作用。本研究利用普通烟草(Nicotiana tabacum)基因组数据库,运用Blastp比对,结合Pfam和SMART分析,鉴定了118条普通烟草C2H2锌指蛋白家族成员;对烟草C2H2锌指蛋白家族进行了进化树分析、结构域分析、物理化学性质分析、染色体定位、基因结构分析、三维结构分析及组织表达分析等。结果表明:不同成员的氨基酸长度差异较大;系统进化及结构域分析显示,所有C2H2家族成员可以被分为5个亚家族,同一亚家族成员之间在结构域和理化性质上呈现较高一致性;每个成员都含有C2H2结构域,在数量上存在较大差异;将所有基因家族成员定位在22条染色体上;组织表达分析表明,每个C2H2亚家族都有成员在不同组织中表达,在叶及根中有些基因的表达量较高。

胃癌组织中转录因子叉盒蛋白C1表达与肿瘤临床生物学行为及预后的关系

目的探讨胃癌组织中转录因子叉盒蛋白C1(FOXC1)表达与肿瘤临床生物学行为及预后的关系,并对FOXC1与干细胞标志物CD44和醛脱氢酶1(ALDH1)的关系进行分析。方法采用免疫组织化学法检测FOXC1、CD44、ALDH1在胃癌及癌旁中的表达,整理患者的临床病理资料并进行随访。结果 FOXC1、CD44及ALDH1在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。FOXC1与患者淋巴结转移、TNM分期有相关性(P<0.05)。FOXC1阳性表达患者总体生存率为7.69%,明显低于FOXC1阴性表达患者(56.25%)。Cox比例风险回归分析显示,FOXC1阳性表达是胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。FOXC1与CD44呈正相关(P<0.05)。结论 FOXC1与胃癌的侵袭转移有关,FOXC1阳性表达是胃癌预后不良的标志。

植物B、C类热激转录因子研究进展

热激转录因子(HSFs)在调控植物生长发育和胁迫响应中具有重要的作用。根据结构的不同,植物HSFs可分为A、B和C三类。由于B类和C类HSFs缺少AHA转录激活结构域,因此人们对HSFs的研究重点放在了A类。但近年来越来越多的证据表明B类和C类HSFs在调控植物生长发育和响应逆境胁迫的过程中也具有重要的作用,并日益得到人们的重视。本文综合了近几年的研究结果,对植物B类和C类HSFs的结构、组成以及生物学功能作了简要综述,以期为其研究和利用提供参考。

胶孢炭疽菌C2H2型转录因子CgGcp1的生物学功能

【背景】胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)可以寄生于多种植物,侵染方式多样,能够引起严重的农业危害。在胶孢炭疽菌中,CgGcp1是一个C2H2型的转录因子,关于其生物学功能的研究未见报道。【目的】明确CgGcp1的生物学功能,为深入解析该病菌的致病机制奠定一定的理论依据。【方法】构建CgGCP1基因的敲除载体,利用同源重组得到敲除突变体。通过表型分析,包括营养生长、胁迫响应、孢子产生、附着胞形成及致病性分析等,明确该基因的生物学功能。【结果】CgGCP1基因敲除突变体生长速率较野生型减慢,对SDS、刚果红、NaCl和甘油更加敏感,孢子产量显著降低,附着胞的形成率降低且侵入能力减弱,在橡胶叶片上的致病力明显下降。【结论】CgGcp1参与调控胶孢炭疽菌营养生长、细胞壁完整性、分生孢子产生、附着胞形成与侵入和致病性。

免疫组化法检测CD73和转录因子叉头框C2对上皮性卵巢肿瘤检测的价值

目的分析上皮性卵巢肿瘤组织中CD73和转录因子叉头框C2(FOXC2)的表达情况及与临床病理特征及肿瘤生物学行为的关系。方法选取该院2017年6月至2018年10月手术切除的卵巢组织标本130例,其中良性上皮性肿瘤30例,交界性上皮性肿瘤35例,恶性上皮性肿瘤45例,正常卵巢组织20例。采用免疫组化法染色,比较不同卵巢组织中CD73、FOXC2表达水平,并分析其与年龄、组织学分型等临床特征及肿瘤生物学行为的关系。结果 CD73和FOXC2在恶性上皮性卵巢肿瘤中呈高强度表达,在良性及交界性上皮性卵巢肿瘤中表达强度显著降低,在正常卵巢组织中为低强度表达,差异有统计学意义(P<0.05)。CD73和FOXC2的表达与年龄及组织学分型无关(P>0.05),而与组织学分级、临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05),组织学级别高、临床中晚期、淋巴结有转移的肿瘤组织中CD73与FOXC2表达强度高。上皮性卵巢肿瘤CD73与FOXC2表达呈线性正相关关系(r=0.833, P=0.004)。结论 CD73、FOXC2在上皮性卵巢肿瘤细胞中呈现高强度表达,并与肿瘤的转移和侵袭密切相关,可作为上皮性卵巢肿瘤早期诊断和预后评估的免疫分子标志物。

IL-38对类风湿关节炎患者辅助性T细胞17转录因子的影响

目的研究类风湿关节炎(RA)患者白细胞介素-38(IL-38)的表达水平,并探讨IL-38对辅助性T细胞17(Th17)细胞转录因子(RORC、STAT3)的影响。方法收集RA患者30例,为RA组,30例体检中心的健康人群作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR检测IL-38、RORC、STAT3mRNA水平;ELISA法检测血清IL-38蛋白水平;采用t检验或Mann-Whitney秩和检验。结果(1)实时荧光定量PCR结果显示RA患者IL-38基因表达水平(2.92±1.96)显著低于正常对照组(5.79±3.55),差异有统计学意义(Z=-1.28,P<0.05);RA患者IL-38蛋白表达水平(0.44±0.03)显著低于正常对照组(0.72±0.58),差异有统计学意义(Z=-1.59,P<0.05);(2)RA患者RORC、STAT3基因表达水平(6.29±3.98)、(2.72±2.11)显著高于正常对照组(1.6±0.95)、(0.69±0.67),差异有统计学意义(Z=-1.36,P<0.05;Z=-1.24,P<0.05);且RORC、STAT3基因表达水平分别与IL-38水平呈负相关(r=-0.31,P<0.05;r=-0.25,P<0.05);(3)在体外实验中,RA患者外周血中加入IL-38后,RORC、STAT3基因表达水平(1.87±1.59)、(0.58±0.13)较RA患者(6.29±3.98)、(2.72±2.11)明显下降,差异有统计学意义(Z=-1.48,P<0.05;Z=-1.37,P<0.05)。结论在RA患者体内IL-38浓度下降,使得Th17细胞转录因子RORC、STAT3表达增加,可诱导经典JAK/STAT3信号传导通路活化,促进Th17细胞大量分化,导致关节滑膜增殖、软骨侵蚀和全身性的炎症反应,从而引发RA的发病。

乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白与X蛋白对肾小管上皮细胞核转录因子的影响

目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P<0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P<0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。

MEF2C调控成釉细胞MMP-20基因启动子转录活性的研究

目的:通过研究MEF2C转录因子对小鼠成釉细胞金属基质蛋白酶-20(matrix metalloprotei-nase-20,MMP-20)基因表达的调控作用,明确MEF2C的功能,为研究MEF2C在釉质形成中的作用奠定基础。方法:用RT-PCR的方法扩增小鼠MEF2C基因,并构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-hisA-MEF2C;对MMP-20基因启动子区域(-1197～+23)中MEF2C潜在的结合位点进行定点突变,并构建至荧光报告载体pGL3-Basic中;利用双荧光素酶基因报告系统分析MEF2C对MMP-20基因启动子转录活性的影响。结果:在成釉细胞中过量表达MEF2C能够明显提高MMP-20基因启动子的转录活性,而对定点突变后的MMP-20基因启动子转录调控作用减弱。结论:小鼠成釉细胞核中MEF2C可通过MMP-20启动子上MEF2C潜在的结合位点,上调MMP-20基因表达水平。

酸性环境抑制高磷诱导大鼠VSMCs钙化的机制研究

目的探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及其机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷+p H 7.4组、高磷+p H 7.1组。刺激4 d后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测活化T细胞核因子c1(NFATc1)、Runt相关转录因子2(Runx2)基因和蛋白的表达。刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与正常对照组比较,高磷+p H 7.4组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达升高(P<0.05);与高磷+p H 7.4组比较,高磷+p H 7.1组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达降低(P<0.05)。相关性分析发现,NFATc1蛋白表达水平与ALP活性、Runx2蛋白表达水平呈正相关(P<0.05)。结论酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过降低NFATc1表达,抑制VSMCs表型转化来实现的。

滇龙胆C2H2基因家族鉴定及响应茉莉酸甲酯诱导表达分析

滇龙胆(Gentiana rigescens)是龙胆药材的基源植物之一,C2H2锌指蛋白是锌指蛋白家族中的一个大家族,其成员在1年生滇龙胆转录中最为丰富,本研究拟在对滇龙胆转录组中C2H2基因家族进行鉴定并分析响应茉莉酸甲酯(MeJA)诱导表达模式,为滇龙胆C2H2转录因子功能研究提供参考。基于滇龙胆转录组数据,利用NCBI、MAFFT、MEME、STRING等在线网站及TBtools软件对其基因信息、进化关系、表达模式等进行分析。结果表明,从滇龙胆转录组中共鉴定出31个含有C2H2保守结构域的序列(GrC2H2 1~GrC2H2 31),编码的氨基酸数量在53(GrC2H2 14)~604个(GrC2H2 31)之间,等电点介于4.23~9.92之间,且31个家族成员都定位在细胞核中,其家族分为10个亚家族,GrC2H2 5、GrC2H2 6、GrC2H2 8、GrC2H2 11、GrC2H2 17、GrC2H2 18、GrC2H2 19、GrC2H2 22、GrC2H2 23和GrC2H2 31共10个转录因子为滇龙胆C2H2转录因子的正调控因子。2种浓度MeJA诱导后C2H2表达模式显示,MeJA浓度越高,GrC2H2基因表达量越高。本研究首次鉴定了滇龙胆C2H2基因家族并分析了其响应MeJA表达模式,可为后续深入研究C2H2基因家族功能及滇龙胆优质品种的选育提供理论参考。

高渗状态下肾脏COX2表达的基因调控

目的本研究旨在阐明核转录因子C/EBPβ和NFκB是否协同作用影响高渗状态下COX2的基因表达。方法体外培养肾髓间质细胞(RMICs),通过病毒转导或质粒转染技术将体外构建的COX2基因突变载体转入培养细胞,经高渗培养不同时间后,采用免疫印迹、荧光素酶报告基因活性检测等方法观察培养细胞COX2蛋白表达及活性的改变,同时应用染色质免疫沉淀分析法观察COX2基因与C/EBPβ、NFκB结合能力的改变。结果免疫印迹显示,高渗刺激能明显提高对照组COX2蛋白表达,应用突变序列IκBm阻断NFκB活性后COX2表达明显下降,应用突变序列C/EBP-βP20阻断C/EBPβ亦能显著降低COX2表达,但同时运用突变序列C/EBP-βP20和IκBm无法使COX2表达进一步下降。然而,将野生型、含NFκB或C/EBPβ结合位点突变的COX2启动子萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染至RMICs,高渗培养24h后显示:高渗刺激能显著增加野生型组COX2荧光素酶的活性,NFκB位点突变无法阻断该作用,而C/EBPβ结合位点突变却能完全抑制COX2高活性。进一步应用染色质免疫沉淀分析研究显示,高渗刺激能显著增加NFκB(P65)或C/EBPβ与COX2基因的结合,并呈时间依赖性;NFκB结合位点突变不能消除高渗诱导的NFκB(P65)与COX2基因的结合增强,但在NFκB和C/EBPβ结合位点同时突变组该作用被阻断。结论在NFκB活化COX2基因转录过程中需要另一个核转录因子C/EBPβ的参与,C/EBPβ途径在高渗诱导肾脏内髓间质细胞表达COX2过程中具有重要作用。