高脂饮食对小鼠转录因子C/EBPα表达的影响

目的:研究高脂饮食对小鼠转录因子CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein-α,C/EBPα)表达的影响。方法:60只(sprague dawley,SD)雄性小鼠适应性饲养1周,之后随机均分成两组:高脂饮食组(30只)和正常饮食组(30只),分别给予高脂饲料及普通饲料喂养,每周记录各组小鼠的体重,8周后用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定两组小鼠血清中C/EBPα表达情况。采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析,分析高脂饮食与正常饮食组之间血清C/EBPα表达的差异。结果:高脂饮食组小鼠血清C/EBPα浓度明显低于正常饮食组[(50.03±10.07)pg/mL vs (56.55±10.28)pg/mL,t=2.482,P=0.016)。随着喂养的进行,高脂饮食组小鼠每周体重明显增加,8周时高脂饮食组小鼠体质量与正常饮食组相比显著增加[(53.46±7.15)g vs(41.96±5.44)g,t=7.011,P=0.000],呈明显肥胖态。结论:高脂饮食可能减少C/EBPα的表达。

转录因子C/EBP β的生物学功能

0 引言。转录因子CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT enhancer binding protein，C／EBP)包括C／EBPα、C／EBPβ、C／EBP δ、C／EBP ε等蛋白，在体内的生物学作用各不相同．C／EBPα在粒细胞形成中具有重要的调节作用C／EBPα基因缺陷可以导致早期的粒细胞分化障碍．C／EBPα功能异常在人急性髓性白血病中十分常见。

核转录因子C/EBPβ的研究进展

C/EBPβ是转录因子C/EBPs(CCAATenhancerbindingproteins)家族的重要成员,其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域。它主要通过对靶细胞基因转录的调节,参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、机体炎症反应等重要生命活动;其功能受到蛋白酶降解、磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控。本文综述有关C/EBPβ的生物学功能及其调控机理近年来的一些研究进展。

人肺癌细胞转录因子——C/EBP和HMG样蛋白的EMSA检测

目的 检测人肺癌细胞中是否存在与Na+ H+ 交换蛋白 1(NHE 1)基因转录相关的重要转录因子———C EBP和HMG样蛋白。方法 采用电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测人肺癌细胞株核蛋白中C EBP和HMG样蛋白的表达及其水平。结果 EMSA检测到A5 49细胞和转染NHE 1反义载体的A5 49细胞均有转录因子C EBP和HMG样蛋白的表达 ,且后者表达水平高于前者 ;采用 5 0倍未标记的片段能完全抑制相应转录因子与32 P标记的相同片段的结合。结论 A5 49细胞核蛋白中存在能与C EBP结合序列和Poly(dA∶dT)区结合的转录因子 ,即C EBP和HMG样蛋白 ,后者的表达水平高于前者。特异性竞争抑制试验表明外源性特异DNA片段能抑制相同片段与转录因子的结合。

硒都黑猪NT5C1A基因核心启动子区鉴定及转录因子预测

本研究旨在探究猪胞质5'核苷酸酶1A基因(Cytosolic 5'-Nucleotidase1A,NT5C1A)启动子区序列的结构特性,确定其核心启动子区并分析其关键转录因子结合位点,为探究其表达调控机制提供理论依据。对NT5C1A互作蛋白进行预测,在线生物信息学分析软件预测猪NT5C1A基因核心启动子区,根据预测结果设计7对启动子缺失片段引物,以硒都黑猪血液基因组DNA为模板,通过PCR扩增和Sanger测序方法获得NT5C1A基因5'端7个启动子缺失片段并克隆至pGL3-Basic载体,以双荧光素酶报告基因检测试验对缺失片段进行荧光素酶活性检测,并通过转录因子在线预测软件预测核心启动子区潜在的转录因子。结果表明,NT5C1A基因核心启动子位于转录起始位点-290~+109bp的位置(ATG作为+1),该区域含有MYOD1、MYOG、MYF5和SP1等肌肉发育相关的转录因子结合位点。本试验为研究NT5C1A基因调控猪肌肉发育的分子机制提供了理论依据。

C/EBPβ介导NPHP1敲低的肾小管上皮细胞TNF-α通路下游炎症因子的表达

目的探讨NPHP1基因缺陷肾小管上皮细胞TNF-α信号通路激活及其调控的炎症因子表达。方法使用重组慢病毒LV-NPHP1-RNAi构建敲低NPHP1表达的人近端肾小管细胞株(HK2)细胞(NPHP1^(KD)HK2)。通过实时荧光定量PCR、Western blot、酶联免疫吸附实验法检测各细胞株TNF-α表达、p38和C/EBPβ激活状态及其调控炎症因子CXCL5、CCL20、IL-1β、IL-6、MCP-1等表达情况。通过构建siRNA敲低野生型和NPHP1^(KD)HK2细胞C/EBPβ表达,观察上述指标变化。结果敲低NPHP1表达后,NPHP1^(KD)HK2细胞TNF-α、C/EBPβ、CXCL5、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加(P<0.05);Western blotting结果显示,phospho-p38、C/EBPβ表达上调(P<0.05);培养液上清IL-6水平增加(P<0.05)。使用siRNA敲低C/EBPβ表达后,NPHP1KDHK2细胞CSF2、CCL20、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平下调(P<0.05);Western blot显示phospho-p38表达下调(P<0.05);培养液上清IL-6水平下降(P<0.001)。结论NPHP1基因缺陷的NPHP1KDHK2细胞中TNF-α信号通路被激活,其调控的下游印证因子表达上调。C/EBPβ可能是介导NPHP1KDHK2细胞TNF-α信号通路相关炎症因子表达的关键转录因子。

转录因子C/EBPβ的功能与调控

CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteins,CLEBPβ)是转录因子C/EBPs家族的重要成员,其C端具有高度保守的DNA结合域和二聚化功能域。它主要通过对靶细胞基因转录的调节,参与细胞增殖与分化、肿瘤发生与凋亡、细胞周期调控等重要生命活动;其功能受到蛋白酶降解、磷酸化、蛋白质相互作用等多种途径的调控。本文综述有关C/EBPβ的生物学功能及其调控机理近年来的一些研究进展。

急性脑梗死患者血清C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1、锌指样转录因子2水平与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的分析

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者血清中C1q肿瘤坏死因子相关蛋白1(CTRP1)、锌指样转录因子2(KLF2)的表达水平及其与颈动脉粥样硬化(CAS)斑块稳定性的关系。方法收集黑龙江省传染病防治院分院2021年6月至2023年1月期间进行治疗的128例ACI患者作为ACI组,根据ACI患者CAS斑块的特性,将患者分为无斑块组19例,稳定斑块组45例和不稳定斑块组64例,另选取128例同期健康体检者作为对照组。比较各组血清CTRP1、KLF2水平;Spearman法分析ACI组患者血清CTRP1、KLF2水平与CAS斑块稳定性的相关性;多因素Logistic回归分析ACI患者CAS斑块稳定性的影响因素;受试者工作特征曲线分析血清CTRP1、KLF2水平对ACI患者CAS斑块不稳定性的预测价值。结果与对照组相比,ACI组血清CTRP1水平较高、KLF2水平较低(t=15.949、78.545,P<0.01)。无斑块组、稳定斑块组、不稳定斑块组血清CTRP1、中性粒细胞计数、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分依次升高(F=49.819、27.014、17.143、335.582,P<0.01);KLF2水平依次降低(F=127.385,P<0.01)。ACI组患者CTRP1水平与CAS斑块稳定性呈正相关(r=0.532,P<0.01);KLF2水平与CAS斑块稳定性呈负相关(r=-0.614,P<0.01)。多因素Logistic回归分析显示CTRP1、KLF2、LDL-C、中性粒细胞计数、NIHSS评分是ACI患者CAS斑块稳定性的影响因素[OR(95%CI)=3.154(1.533~6.488)、0.763(0.648~0.898)、2.373(1.328~4.239)、2.148(1.278~3.611)、2.723(1.355~5.471),P<0.01]。CTRP1、KLF2两者联合预测ACI患者CAS斑块不稳定性的曲线下面积为0.897,敏感度为90.62%,特异度为75.56%,优于单独预测(Z=2.585、2.237,P<0.05)。结论ACI患者血清CTRP1水平较高,KLF2水平较低,两者均与ACI患者CAS斑块稳定性相关,且两者联合对ACI患者CAS斑块不稳定性具有较好的预测效能。

miRNA-31、转录因子C／EBP-β与子宫内膜容受性的相关性

子宫内膜容受性是决定胚胎成功着床的重要因素。临床上常通过对子宫内膜容受性的评估判断胚胎最佳着床期，从而提高辅助生殖技术的成功率。对人类来说，胚胎在多种细胞因子、生长因子及黏附分子等调控下完成其在子宫内膜的定位、黏附及植入过程。许多因子在子宫内膜的胚胎植入窗期出现，其中部分因子与子宫内膜容受性密切相关，而被提议作为监测子宫内膜容受性的分子标记物。本文将对目前评估子宫内膜容受性的两种最新手段，即测定血清 miRNA-31（miR-31）或测定子宫内膜转录因子 C ／EBP-β（CCAAT 增强子结合蛋白β）的研究进展进行综述。

转录因子C／EBPα与急性髓系白血病

C／EBPα是亮氨酸拉链转录因子家族的第一位成员,诱导着粒系的分化。近年已有报道表明 C／EBPα在急性髓系白血病的发生以及预后的判断中具有重要的意义,对C／EBPα活性的靶向调节可能为急性髓系白血病的治疗开辟一条新的途径。

烟草C2H2锌指蛋白转录因子家族成员的鉴定与表达分析

C2H2锌指蛋白转录因子家族在真核生物中具有重要的生物学功能,广泛参与植物叶的发生、花器官的调控、侧枝的形成及逆境胁迫等生命过程。植物C2H2锌指蛋白不仅结合DNA和RNA,而且与蛋白质之间相互作用。本研究利用普通烟草(Nicotiana tabacum)基因组数据库,运用Blastp比对,结合Pfam和SMART分析,鉴定了118条普通烟草C2H2锌指蛋白家族成员;对烟草C2H2锌指蛋白家族进行了进化树分析、结构域分析、物理化学性质分析、染色体定位、基因结构分析、三维结构分析及组织表达分析等。结果表明:不同成员的氨基酸长度差异较大;系统进化及结构域分析显示,所有C2H2家族成员可以被分为5个亚家族,同一亚家族成员之间在结构域和理化性质上呈现较高一致性;每个成员都含有C2H2结构域,在数量上存在较大差异;将所有基因家族成员定位在22条染色体上;组织表达分析表明,每个C2H2亚家族都有成员在不同组织中表达,在叶及根中有些基因的表达量较高。

牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究

旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧光素酶报告载体,采用脂质体法共转染至小鼠C2C12成肌细胞,24 h后检测其双荧光素酶活性。最后,通过PCR扩增MSTN启动子核心片段MSTN-P1,重新构建以MSTN-P1片段替代(CMV)区的重组表达载体pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C,将其分别转染至小鼠C2C12成肌细胞和大鼠下颌腺上皮细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白发光情况,48 h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR检测MEF2C基因在不同细胞中的表达情况。结果显示,在小鼠C2C12成肌细胞中,共转染pcDNA3.1(+)-MEF2C试验组较pGL3-Basic-MSTN试验组能显著增强MSTN启动子的活性(P<0.05),较pGL3-Basic对照组能极显著增强MSTN启动子的活性(P<0.01);MSTN启动子核心片段MSTN-P1能驱动MEF2C基因在小鼠C2C12成肌细胞中的表达量极显著上调(P<0.01),且能驱动MEF2C基因在大鼠下颌腺上皮细胞中的表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,在转录水平,MSTN启动子与MEF2C可能同时参与了牛肌肉生长和分化的调控。

碱性成纤维细胞生长因子对局灶性脑缺血大鼠脑组织C／EBP同源蛋白表达的影响

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后对C／EBP同源蛋白（C／EBP homogous protein，CHOP）表达的影响，探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对脑组织缺血再灌注神经元CHOP的调节作用及机制。方法：应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12h，采用TUNEL法、免疫组织化学方法检测海马及皮质内神经元凋亡和CHOP的表达。结果：Sham组海马及皮质偶见凋亡细胞，皮质及海马神经元内少见CHOP免疫反应阳性细胞；I／R组海马及皮质神经元凋亡增加，缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内CHOP阳性表达高于假手术组。bFGF组海马及皮质神经元凋亡减少，皮质及海马神经元内CHOP表达较I／R组减少。结论：bFGF减少缺血神经元凋亡，抑制脑缺血诱导的CHOP表达，对脑缺血再灌注海马及皮质神经元具有保护作用。

微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化及蛋白激酶C活性的影响(英文)

背景:转录因子NF-E2相关因子2是细胞调节抗氧化应激反应的重要转录因子,有实验表明转录因子NF-E2相关因子2能被蛋白激酶C家族中的众多成员磷酸化,为进一步研究微波辐射造成氧化应激损伤的产生机制,是否可以从转录因子NF-E2相关因子2途径观察微波辐照对抗氧化调控系统的影响?目的:分析微波辐照对血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2的磷酸化及蛋白激酶C活性的影响。设计:观察对比实验。单位:解放军第三军医大学劳动卫生学教研室。材料:血管内皮细胞株,H332PO4,Protein-A Sepharose(Sigma公司),转录因子NF-E2相关因子2单抗(H-300,Santa Cruz),蛋白激酶Cα单抗(Santa Cruz),玻纤滤膜(Whatman公司)凝胶扫描系统(Gel Doc 2000,Bio-Rad),液闪测定仪(LKB-117瑞典)。方法:实验于2003-03/07在解放军第三军医大学劳动卫生学教研室电磁辐射生物效应研究室完成。①转录因子NF-E2相关因子2磷酸化分析:血管内皮细胞以DMEM培养液培养至细胞生长至旺盛期,加入32Pi孵育标记2h,将细胞培养瓶置于37℃水浴盒中,在反射系数近似零的微波暗室接受微波辐照,为辐照组,辐照平均功率密度为30mW/cm2,辐照时间30min;以未接受辐照的细胞为对照组。采用免疫共沉淀-放射自显影法测定转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平,用凝胶扫描系统对细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平进行半定量分析,对照组细胞直接进行分析。②蛋白激酶C蛋白激酶活性分析及表达量测定:辐照组及对照组细胞培养方法、条件,辐照方式、剂量、条件同前。于辐照后2,4,8,24h裂解细胞,提取胞浆和胞膜蛋白,采用r-32P-ATP标记液闪法进行蛋白激酶C活性测定;采用凝胶扫描系统对蛋白条带灰度进行半定量分析;对细胞进行蛋白激酶C免疫细胞化学染色后于光镜下观察细胞胞浆的着色程度,对照组均直接给予测定和观察。主要观察指标:①辐照组及对照组转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平检测结果。②细胞蛋白激酶活性分析及表达量测定结果。结果:①辐照组及对照组转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平测定结果:辐照组辐照后2,4,8h,转录因子NF-E2相关因子2条带灰度强于对照组细胞,辐照4h,转录因子NF-E2相关因子2磷酸化达到峰值水平,条带灰度扫描半定量分析显示辐照2,4,8h辐照组细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平较对照组分别增加33%,261%,141%(t=2.974,4.209,4.047,P<0.05),24h恢复正常。②辐照组及对照组细胞蛋白激酶C表达量及活性检测结果:微波辐照2,4,8h,辐照组细胞蛋白激酶C表达量高于对照组,以4h最明显,辐照后24h恢复正常;免疫细胞化学染色显示辐照组细胞辐照4h胞浆着色强度强于对照组;r-32P-ATP标记液闪法显示辐照2,4,8h,辐照组细胞蛋白激酶C活性较对照组分别增加了36%,93%,47%(t=2.801,3.654,3.035,P<0.05),24h有回落。蛋白激酶C激活的峰值发生在照射后4h。结论:微波辐照可引起血管内皮细胞转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平在一定时段内增强,同时可引起细胞蛋白激酶C表达增加,其活性变化时间效应与转录因子NF-E2相关因子2磷酸化水平有一致性。

多功能转录因子CTCF研究进展

CTCF是一种多功能的真核转录因子,它可以抑制c-myc基因的表达,增强app基因的启动子活性,调控H19/Igf2的印记,作为鸡β-球蛋白等多个基因结构域的绝缘子成分,以及作为X染色体失活的候选蛋白等。CTCF与BORIS的交互表达和雄性生殖细胞的系统发生有关。CTCF的缺失和突变可能导致肿瘤的发生。

同型半胱氨酸血症诱导内皮细胞蛋白激酶C和核转录因子-κB的活化

目的探讨内皮细胞蛋白激酶C(PKC)和核转录因子-κB(NF-κB)信号传导系统在调节高同型半胱氨酸(Hcy)血症发病过程中的作用。方法Hcy、PKC抑制剂或两者联合作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)不同时间点后,用TransAMTM系统和凝胶电泳迁移率实验(EMSA)法检测NF-κB P65的活性,蛋白质印迹技术分析相关蛋白的表达。结果EMSA和TransAMTM系统检测显示,在高浓度Hcy刺激下,HUVEC中NF-κB的活化高峰出现在作用0.5 h和6 h时;且伴有IκBα短暂快速的磷酸化(P<0.05);Hcy刺激0.5 h后PKC水平较对照组明显上升(P<0.05);予以PKC抑制剂Bisindolylmaleimide Ⅰ(100 nmol/L)处理后,由Hcy所介导的NF-κB的激活作用和IκBα磷酸化效应几乎完全被抑制。结论Hcy能诱导HUVEC NF-κB系统活化,这些生物学效应是通过PKC信号通路来实现的;PKC抑制剂能显著抑制上述效应。

抑制人血管内皮生长因子C表达的shRNA逆转录病毒表达载体的构建

目的:构建抑制人血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因表达的RNA干扰(RNAi)逆转录病毒表达载体pSIREN-VEGF-C。方法:根据GenBank中VEGF-C序列,设计、合成靶向VEGF-C基因、编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,退火后用T4连接酶与线性化的pSIREN载体连接,转化感受态大肠杆菌,筛选阳性克隆,抽提质粒,获得重组pSIREN-VEGF-C质粒;BglⅡ和EcoRⅠ双酶切、测序鉴定。结果:重组质粒经双酶切,证实插入片段的大小、方向均与设计的一致;测序显示序列完全正确。结论:成功构建了表达人VEGF-C shRNA的重组质粒载体pSIREN-VEGF-C。

超敏C反应蛋白/白蛋白、活化转录因子4对急性心肌梗死患者新发心房颤动预测价值研究

目的分析超敏C反应蛋白(hs-CRP)/白蛋白(Alb)、活化转录因子4(ATF4)对急性心肌梗死(AMI)患者新发心房颤动的预测价值。方法选取2020年1月至2022年9月收治的398例AMI患者为观察组,并选取同期健康体检者398例为健康组。两组均采集外周血,检测血清hs-CRP、Alb、ATF4水平,计算hs-CRP/Alb。观察组根据住院期间是否新发心房颤动分为新发心房颤动患者和无新发心房颤动患者。通过电子病历系统收集入选患者资料,根据最邻近匹配法对新发心房颤动患者和无新发心房颤动患者进行1:1匹配,Logistic回归模型计算评分值。对纳入的因素进行单因素和多因素Logistic回归分析,筛选出新发心房颤动的预测因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析hs-CRP/Alb、ATF4对AMI患者新发心房颤动的预测价值。结果观察组hs-CRP/Alb、ATF4水平高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。二元Logistic多因素回归分析结果显示,入院时心率、肌钙蛋白Ⅰ、左心房内径、hs-CRP/Alb、ATF4是AMI患者新发心房颤动的独立影响因素(P<0.05);hs-CRP/Alb、ATF4联合预测新发心房颤动的曲线下面积(AUC)值高于单独评估的AUC值(P<0.05)。结论AMI患者hs-CRP/Alb、ATF4可应用于预测新发心房颤动,二者联合对AMI患者新发心房颤动的预测效能更佳。

核转录因子-κB及原癌基因c-fos与癫痫的关系

目的:探讨核转录因子-κB及原癌基因c-fos与癫痫的关系,从而寻求更有效地治疗癫痫的方法。方法:检索和参考相关文献,分析和归纳核转录因子-κB及原癌基因c-fos与癫痫的关系。结果:大量实验研究表明,NF-κB活化参与了神经元的生长、发育,与神经元可塑性的形成有关,NF-κB核移位意味着神经元活化。c-fos mRNA和Fos蛋白的表达随癫痫的发生发展而出现规律性变化。c-fos mRNA是快速、一过性表达,Fos蛋白的表达滞后且延长。结论:鉴于NF-κB及c-fos的改变代表了神经元的兴奋状态,在神经元活化、突触可塑性及癫痫中发挥重要作用,从而探讨癫痫的发病机理,寻求更有效地治疗癫痫的方法。