转录因子c-fos/c-jun调控成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的表达

背景:基质金属蛋白酶20是在成釉细胞中特异性表达的一种蛋白酶,其在牙齿釉质发育过程中具有重要作用。从分子角度研究基质金属蛋白酶20可受到的调控机制,为进一步做动物实验奠定基础。目的:通过研究转录因子c-fos/c-jun对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的调控作用,初步确定c-fos/c-jun在牙釉质发育中的作用。方法:首先构建c-fos真核表达载体重组质粒,分别利用双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析c-jun、c-fos转染成釉细胞对基质金属蛋白酶20基因活性的影响;并利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统进一步分析c-jun、c-fos对基质金属蛋白酶20基因活性的影响。结果与结论:双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析显示c-jun、c-fos转染转染小鼠成釉细胞后,基质金属蛋白酶20基因表达显著上调;突变基质金属蛋白酶20启动子的AP1结合位点后,c-fos/c-jun失去上调基质金属蛋白酶20启动子的转录活性的作用。结果提示c-fos/c-jun对基质金属蛋白酶20基因表达具有重要的调节作用,表明其在釉质发育过程中有其重要的生物学意义。

C-fos、EGFR在肝癌、肝硬化中表达的研究

目的研究转录因子C-fos在人肝细胞癌(HCC)组织与肝硬化组织中的表达及C-fos与EGFR在HCC组织中表达的关系。方法用免疫组化法检测51例HCC组织、51例癌旁组织、15例肝硬化组织、10例良性病变而切除的正常肝组织C-fos蛋白表达情况;EGFR在47例HCC组织中的表达情况。结果C-fos蛋白在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中具有不同的表达,与肝病的不同进展情况存在显著差异(P<0.05),在HCC组织中C-fos蛋白表达与EGFR的表达无显著相关性(P>0.05)。结论C-fos蛋白在肝癌、肝硬化组织的过表达提示C-fos参与在肝癌、肝硬化的发病过程,但可能通过EGFR以外的信号通路参与肝癌发病过程。

人参皂甙对红系、粒单系、巨核系细胞株的增殖及转录因子的诱导作用

目的 :通过观察人参皂甙 (GS)对c fos、GATA 1转录因子的诱导作用 ,探讨GS在造血细胞内的作用机理。方法 :选用粒系细胞株HL 60、单核细胞株U937、红系细胞株K562和巨核系细胞株Meg 0 1作靶细胞 ,MTT法和祖细胞集落培养法观察GS的增殖效应 ;用WesternBlot来分析核蛋白抗原与c fos、GATA 1抗体的结合反应。结果 :( 1)MTT法和祖细胞集落培养法均显示GS( 10 μg/ml)能够明显地刺激三系细胞增殖 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5)。 ( 2 )WesternBlot分析表明HL 60、K562和Meg 0 1细胞经GS处理后核内c fos转录调控蛋白量分别是未经处理细胞的 1 5、2 0和 2 5倍 ,但U937细胞不表达c fos蛋白。 ( 3)除了U937细胞不表达GATA 1蛋白外 ,其他细胞株经GS刺激后GATA 1转录调控蛋白量分别是处理前的 1 5、2 1和 1 3倍。结论 :GS能够明显地刺激 3种系列的细胞株增殖 ,并能有效地通过诱导c fos或GATA 1转录因子而调控造血细胞与增殖或分化有关基因的表达。

淫羊藿苷通过激活ATF6/c-fos信号通路改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞功能减退的研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)功能减退的改善作用及可能的作用机制。方法将SPF级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠按体重随机分成青年对照组(2月龄)、衰老模型组(17月龄)、淫羊藿苷低和高剂量组(2、6 mg·kg^(-1),17月龄),各组大鼠分别给予普通饲料或含药饲料持续喂养4个月。苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠睾丸组织形态学改变。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠睾丸组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、β-连环蛋白(β-catenin)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、骨形成蛋白4(BMP4)、激活转录因子6(ATF6)和c-fos的蛋白表达和定位。结果HE染色结果发现,淫羊藿苷可明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化。Western blot结果显示,与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织中ZO-1、occludin、β-catenin、PLZF和BMP4蛋白表达水平均显著下降,而淫羊藿苷可显著上调衰老大鼠睾丸组织中上述蛋白的表达水平。免疫荧光结果显示,与衰老模型组相比,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸Sertoli细胞中occludin和β-catenin以及通路相关指标ATF6和c-fos蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞功能减退,机制可能与激活Sertoli细胞ATF6/c-fos信号通路有关。

p300和HDAC3介导的可逆的乙酰化作用参与调控IL-18p1启动子荧光素酶报告基因活性

IL-18是调节先天性免疫和获得性免疫的重要细胞因子,在Th1的发育中起着重要作用.p300是一种具有组蛋白乙酰化酶活性的转录辅因子.HDAC3是一种组蛋白去乙酰化酶.通过一系列共转染实验证实,p300能够刺激外源IL-18启动子活性,而HDAC3则抑制其活性.p300的乙酰化酶活性对于增强IL-18p1启动子荧光素酶报告基因激活是必需的.p300能提高转录因子c-Fos介导的IL-18启动子荧光素酶报告基因的活性,这种作用能被HDAC3抑制.p300对于内源IL-18mRNA合成有增强作用.首次证实了组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶参与IL-18p1启动子活性的调控,为进一步研究IL-18基因表达调控的机制奠定基础.