Bcl2转录抑制因子1、E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌不同区域的表达及两者与P16INK4a表达的关系

目的检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及肿瘤中央区失巢凋亡因子Bcl2转录抑制因子1(Bit1)、上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白及P16INK4a的表达情况,探讨Bit1、E-钙黏蛋白在宫颈癌获得高侵袭力过程中的意义及二者与P16INK4a表达的关系。方法收集甘肃省肿瘤医院病理科2014-2018年宫颈鳞状细胞癌石蜡包埋标本77例。采用免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及中央区Bit1、E-钙黏蛋白、P16INK4a的表达情况。以肿瘤中央区及出芽区各蛋白质表达评分的中位数作为分界点,将标本分为高表达组和低表达组,分析在不同P16INK4a表达情况下Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异及二者与患者临床病理特征的关系,并进一步分析在肿瘤中央区及出芽区Bit1与E-钙黏蛋白的相关关系。统计学分析采用χ2检验或连续校正χ2检验和Spearman等级相关分析。结果77例宫颈鳞状细胞癌标本中,肿瘤中央区P16INK4a、E-钙黏蛋白、Bit1高表达率分别为32.5%(25/77)、67.5%(52/77)、63.6%(49/77),而在肿瘤出芽区分别为67.5%(52/77)、33.8%(26/77)、37.7%(29/77),差异有统计学意义(χ2=18.935、17.561、10.391,P均<0.01)。无论在肿瘤出芽区还是中央区,P16INK4a高表达组与P16INK4a低表达组Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。肿瘤中央区Bit1低表达与脉管内癌栓及淋巴结转移有关(χ2=5.053、4.400,P均<0.05),肿瘤出芽区E-钙黏蛋白和Bit1低表达均与淋巴结转移有关(χ2=5.580、7.573,P均<0.05)。Spearman等级相关分析显示,在肿瘤中央区及肿瘤出芽区E-钙黏蛋白与Bit1表达均呈正相关(r=0.287,P=0.011;r=0.236,P=0.039)。结论宫颈癌侵袭力的增高与Bit1及E-钙黏蛋白表达降低及P16INK4a表达增高有关,宫颈癌细胞可能通过抑制Bit1获得失巢凋亡抗性并影响EMT的发生从而获得更高的侵袭能力,但P16INK4a并未参与此过程。

GAL4/VP16融合人工转录因子的活性研究

目的构建含有融合转录因子GAL4/VP16的表达载体和含有上游激活序列(UAS)启动子驱动报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达载体组成的GAL4/VP16-UAS系统,观察融合转录因子GAL4/VP16的活性。方法构建含有融合转录因子GAL4/VP16的表达载体pcDNA3-GAL4/VP16,含有5个拷贝UAS串联排列序列和腺病毒E1b基因核心启动子的人工杂合启动子驱动报告基因EGFP的表达载体pGL3-G5E1b-TATA-EGFP,利用脂质体将两种载体瞬时转染Hep3B和HEK293细胞,48 h后采用RT-PCR和流式细胞术检测EGFP的表达,观察GAL4/VP16融合转录因子对G5E1B-TATA的转录调节作用。结果在GAL4/VP16融合转录因子存在的情况下,G5E1b-TATA启动子活性明显上调,甚至可以达到巨细胞病毒(CMV)启动子的活性程度。结论 GAL4/VP16融合转录因子具有上调G5E1B-TATA启动子转录活性的作用,并且该转录活性足以达到驱动下游目的基因高效表达的水平,在基因治疗和基因功能的研究中具有一定的应用潜力。

CXC趋化因子配体16和信号转导与转录激活因子3在恶性胃肠道间质瘤组织中的表达及其对患者预后的影响

目的分析恶性胃肠道间质瘤组织中CXC趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16)、信号转导与转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)表达水平,并探讨其对患者预后的影响。方法选取2014年1月至2017年1月于江苏省苏北人民医院行手术治疗的恶性胃肠道间质瘤患者116例为研究对象,选取其中100例患者相对应的癌旁正常胃肠道组织作为对照。采用免疫组织化学法测定恶性胃肠道间质瘤组织和癌旁正常胃肠道组织中CXCL16、STAT3的表达水平,分析CXCL16、STAT3表达水平与恶性胃肠道间质瘤临床病理特征的关系。采用Kaplan-Meier法分析CXCL16、STAT3表达水平与恶性胃肠道间质瘤患者生存状况的关系。采用Cox回归分析影响恶性胃肠道间质瘤患者预后的因素。结果CXCL16、STAT3在恶性胃肠道间质瘤组织中的阳性表达率均显著高于其在癌旁正常胃肠道组织中的阳性表达率(均P<0.05);CXCL16、STAT3在恶性胃肠道间质瘤组织中的表达水平与其病理性核分裂象、危险度分级、浸润深度、淋巴结转移有关(均P<0.05)。Kaplan-Meier法显示CXCL16阴性恶性胃肠道间质瘤患者平均生存时间显著长于CXCL16阳性恶性胃肠道间质瘤患者(P<0.05),STAT3阴性恶性胃肠道间质瘤患者平均生存时间显著长于STAT3阳性恶性胃肠道间质瘤患者(P<0.05)。Cox回归分析显示,病理性核分裂象、浸润深度、STAT3阳性表达是恶性胃肠道间质瘤患者预后的影响因素(均P<0.05)。结论恶性胃肠道间质瘤组织中CXCL16、STAT3的表达情况与患者预后关系密切,可为评估患者预后提供参考。

转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1核表达与HPV16阳性宫颈癌发生发展的相关性及其预后意义

目的:探讨转录因子NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性宫颈癌中的核表达及其与宫颈癌发生、发展的关系,并分析其临床预后意义。方法:免疫组化法检测NF-κB家族、STAT1、ELK1在HPV16阳性的116例宫颈癌、26例HSIL、12例LSIL、24例正常宫颈组织及高危型HPV阴性的10例LSIL、27例正常宫颈组织中的核表达水平,比较不同HPV感染状态、各种类型宫颈组织中各转录因子的核表达差异,分析其与宫颈癌发生发展的相关性及其临床预后意义。结果:NF-κB家族成员c-Rel、p65、p50的核阳性表达率与宫颈病变程度呈正相关,STAT1的核阳性表达率与宫颈病变程度呈负相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。ELK1在正常宫颈组织中表达较低,在各组宫颈病变组织中表达无统计学差异(P=0.210)。HPV16早期感染组的c-Rel和p65阳性表达率明显高于正常对照组(P<0.05);晚期感染组的NF-κB p50阳性表达率明显高于早期感染组(P<0.05),c-Rel在晚期感染组也有显著升高(P<0.05);晚期感染组的STAT1阳性表达率明显低于早期感染组(P<0.05)。Logistic回归分析示,c-Rel、p65核表达与宫颈癌发生相关(P<0.05),而c-Rel、p50、STAT1核表达则与宫颈癌发展相关(P<0.05)。宫颈癌中NF-κB家族各成员核表达呈正相关(P<0.05),而p65、p50与STAT1核表达呈负相关(P<0.05)。c-Rel、p65分别与宫颈癌患者脉管浸润、宫旁浸润有关(P<0.05)。生存分析示,p65、STAT1与宫颈癌患者生存预后相关,高p65核表达、无STAT1核表达者总体生存率较低(P<0.05)。结论:各转录因子分别在宫颈癌发生发展的不同时期参与下游基因的调控,c-Rel、p65与宫颈癌发生相关,而c-Rel、p50、STAT1与宫颈癌发展相关。p65、STAT1可作为HPV16阳性宫颈癌预后预测因子。

HMG盒转录因子1(HBP1)参与H_2O_2诱导的细胞衰老过程

为探讨HMG盒转录因子1(HBP1)在过氧化氢(H2O2)诱导的细胞衰老中所起的作用,通过慢病毒感染得到稳定表达HBP1的MDA-MB-231细胞,以H2O2处理细胞.采用Western免疫印迹杂交试验和实时PCR检测HBP1、p16和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)表达水平的变化.用荧光免疫试验检测H2O2对HBP1表达的影响,以及HBP1在H2O2的诱导下对于p16和细胞周期蛋白D1启动子的影响.用细胞增殖试验检测H2O2对于细胞增殖的影响.用基因敲减实验和衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测在H2O2诱导的细胞衰老中HBP1所起的作用.Western和免疫荧光实验结果显示,细胞经H2O2处理后,HBP1表达增高的同时促进了p16的表达,降低了细胞周期蛋白D1的表达.细胞增殖实验结果显示,H2O2显著抑制了细胞的增殖.基因敲减实验和SA-β-Gal染色实验说明,H2O2可诱导HBP1表达正常的MDA-MB-231细胞衰老,而HBP1的敲减则抑制了H2O2诱导的细胞衰老过程.本研究结果提示,在H2O2诱导的衰老中,HBP1的表达显著增加,并通过促进衰老相关基因p16的表达和抑制生长因子cyclinD1的表达来阻碍细胞增殖,促进细胞衰老.HBP1在H2O2诱导的细胞衰老过程中起着重要作用,H2O2诱导的细胞衰老必须在HBP1存在的情况下才能发生.

甘薯IbGATA16基因的克隆与表达分析

GATA类转录因子在调控植物响应非生物胁迫中发挥重要作用。本研究从甘薯中克隆出1个IbGATA16基因,对其进行生物信息学分析,并对IbGATA16基因在甘薯干旱和盐胁迫处理中的表达模式进行分析。结果表明:甘薯IbGATA16基因CDS序列全长420bp,编码139个氨基酸,蛋白分子量为15.39kDa,等电点为9.97;IbGATA16基因组全长为582 bp,包含3个外显子和2个内含子;IbGATA16为不稳定的亲水性脂溶蛋白,亚细胞定位预测显示该蛋白定位于细胞核,具有C-X_(2)-C-X_(17)-C-X_(2)-C结构域,属于典型的GATA类转录因子。IbGATA16基因上游1382bp的启动子序列存在多种顺式作用元件,如MYB、ABRE、GARE-motif等。多重序列比对和系统进化树分析结果显示,IbGATA16蛋白与三裂叶薯ItGATA16的亲缘关系最近,N端的锌指结构域序列高度一致,表明二者可能具有相似的功能。实时荧光定量结果表明,IbGATA16在甘薯根、茎、叶片等组织中均有表达,在叶中的表达量显著高于茎与根的表达量。IbGATA16对干旱和盐胁迫显著诱导表达,在干旱和盐胁迫处理0、1、3、6、12、24 h后,IbGATA16的表达量均显著高于0 h。干旱胁迫下,IbGATA16的表达量在1 h时达到峰值;在盐胁迫下,IbGATA16的表达量在3 h时达到最大值。以上结果表明,IbGATA16基因参与了甘薯对干旱和盐胁迫的应答响应,在根、茎和叶中的调控存在差异。本研究为进一步揭示IbGATA16在甘薯中抵御逆境胁迫的机理提供参考。

宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达与HPV16/18感染转归相关性及联合检测价值分析

目的探讨宫颈局部干扰素诱导蛋白16(IFI16)、信号传导和转录激活因子1(STAT1)蛋白、T-box基因家族的新型转录因子T-bet蛋白表达与人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染转归相关性及联合检测价值。方法选取2020年5月至2021年12月该院收治的110例人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染患者,均根据病情并结合患者意愿给予药物、高强度聚焦超声(HIFU)、宫颈环形电切术(LEEP)治疗,统计3种方法治疗后的转阴率,并根据治疗后HPV16/18感染转归情况,分为转阴组(60例)、未转阴组(50例)。比较两组宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达,多因素Logistic回归分析HPV16/18感染转归的相关影响因素,受试者工作特征曲线及曲线下面积(AUC)分析IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白及联合检测预测HPV16/18感染转归价值。结果转阴组采取HIFU、LEEP治疗方法的患者占比与采取药物治疗方法的患者占比比较,差异有统计学意义(P<0.05);未转阴组IFI16、STAT1蛋白表达高于转阴组,T-bet蛋白表达低于转阴组,差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,阴道炎、治疗方法、IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达均与HPV16/18感染转归有关(P<0.05);IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白联合检测预测HPV16/18感染未转阴的AUC最大,三者联合检测的灵敏度为88.00%,特异度为85.00%;IFI16、STAT1蛋白高表达患者转阴率低于IFI16、STAT1蛋白低表达患者,T-bet蛋白高表达患者转阴率高于T-bet蛋白低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈局部IFI16、STAT1蛋白、T-bet蛋白表达与HPV16/18感染转归有关,三者联合检测可作为预测HPV16/18感染转归的一个可靠方案,在保证转阴率的同时,又避免过度治疗增加患者负担。

大黄素调控miR-16-5p/STAT3对心肌梗死大鼠模型保护作用机制研究

目的探究大黄素通过调控miR-16-5p/信号转导和转录激活因子3(STAT3)对心肌梗死大鼠模型发挥保护作用的机制。方法取Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素高剂量组、miR-16-5p agomir组、miR-16-5p agomir阴性对照组、大黄素高剂量+miR-16-5p agomir组,每组12只。模型组和实验处理组大鼠通过冠状动脉左前降支结扎法建立心肌梗死模型,假手术组大鼠仅穿线不结扎,分组处理后,测定7组大鼠心功能指标左心室收缩末期内径(LVDS)、左心室舒张末期内径(LVDD)、左心室射血分数(EF);以TTC染色检测7组大鼠心肌梗死面积;以HE和TUNEL染色分别检测7组大鼠心肌组织病理变化及心肌细胞凋亡率;以酶联免疫吸附(ELISA)法测定7组大鼠血清及心肌组织炎性因子IL-1β、TNF-α水平;以实时荧光PCR检测7组大鼠心肌组织miR-16-5p水平;以免疫印迹法检测7组大鼠心肌组织凋亡蛋白(Bax、Caspase-3)及STAT3表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织呈现严重病理损伤,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3明显升高(P<0.05),EF明显降低(P<0.05)。与模型组比较,大黄素低、高剂量组大鼠心肌组织病理损伤均减轻,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3均降低(P<0.05),EF均升高(P<0.05);大黄素高剂量组大鼠心肌组织病理损伤比大黄素低剂量组进一步减轻,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3进一步降低(P<0.05),EF进一步升高(P<0.05);miR-16-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3升高(P<0.05),EF降低(P<0.05);miR-16-5p agomir阴性对照组大鼠各指标无明显变化(P>0.05)。与大黄素高剂量组比较,大黄素高剂量+miR-16-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤加重,LVDS、LVDD、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡率、血清及心肌组织IL-1β、TNF-α水平、心肌组织Bax、Caspase-3蛋白表达、miR-16-5p表达及p-STAT3/STAT3升高(P<0.05),EF降低(P<0.05)。结论大黄素可通过下调miR-16-5p/STAT3信号而阻止炎症发生进展,从而减轻心肌梗死大鼠心肌损伤及纤维化,保护心功能。

益气活血方对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响

目的:观察益气活血方对胃癌前病变大鼠NF-κB、cyclinD1和p16表达的影响。方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组8只和造模组56只,采用以MNNG损伤为主的综合法复制大鼠胃癌前病变模型,随机处死10只大鼠经病理确定造模成功后,再将46只造模组大鼠随机分为模型组12只、益气活血高、低剂量组各12只和胃复春组10只,分别给予益气活血方、胃复春混悬液灌胃治疗12周。免疫组化Envision法测定大鼠NF-κB、cyclinD1和p16的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织NF-κBp65/IκBα表达明显升高(P<0.01)。药物治疗后,益气活血高剂量组、胃复春组大鼠胃组织NF-κBp65表达较模型组明显降低(P<0.05),IκBα蛋白表达较模型组明显升高(P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胃组织cyclinD1和p16明显升高(P<0.01,P<0.05);药物治疗后,益气活血高剂量组及胃复春组大鼠胃组织cyclinD1表达较模型组比较明显降低(P<0.01,P<0.05);益气活血高剂量组大鼠胃组织p16表达较模型组明显升高(P<0.01)。结论:益气活血法可能通过减少致炎因子激活的NF-κB信号通路抑制cyclinDl,上调p16表达防治胃癌前病变,这可能是其防治胃癌前病变的作用机制之一。

KLF16在肺腺癌中表达的临床意义及机制

目的：探讨Krüppel样转录因子16（Krüppel-like transcription factor 16,KLF16）蛋白表达在肺腺癌患者中的临床意义及机制,为探索肺腺癌患者预后生物标志物提供理论依据.方法：收集我院50例肺腺癌患者的肿瘤组织标本,对其进行4～6年临床随访,免疫组织化学染色分析患者病理标本中KLF16蛋白的表达,探索KLF16蛋白表达与肺腺癌患者预后的关系及其意义.通过上调肺腺癌细胞中KLF16蛋白的表达,流式细胞术检测KLF16蛋白对肺腺癌细胞周期和凋亡的影响,证实KLF16蛋白在肺腺癌中表达的作用.结果：50例肺腺癌患者中,KLF16蛋白低表达或不表达者29例,占58%（29/50）,在肺腺癌细胞中,KLF16表达明显低于其在正常支气管上皮细胞中的表达.KLF16蛋白低表达的肺腺癌患者,其5年生存率明显低于高表达KLF16的患者（P＜0.01）,而且KLF16蛋白低表达是肺腺癌患者预后不良的重要预测指标.上调肺腺癌细胞中KLF16蛋白的表达可诱导肺腺癌细胞周期S期阻滞.结论：KLF16在肺腺癌中是一个重要的抑癌蛋白,可作为肺腺癌患者重要的预测预后的分子标志物.

抑制LRP16增加Hela细胞对足叶乙甙的敏感性

目的探明LRP16的表达与化疗药物足叶乙甙所诱导的肿瘤细胞凋亡是否产生作用以及可能的分子机制。方法首先将抑制LRP16表达的小干扰RNA,control,siRNA,siRNA-374(抑制率90%),siRNA-668(抑制率60%),对照分别转染入Hela细胞内,并通过足叶乙甙处理的细胞而导致DNA损伤。之后用CCK-8检测细胞活力;用流式细胞技术测定抑制LRP16的表达对Hela细胞凋亡率的影响;通过RT-PCR检测抑制LRP16表达之后核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)凋亡相关的下游靶基因的mRNA水平。结果在足叶乙甙(100μmol)的作用下,抑制LRP16的表达能够明显抑制细胞的增长(P<0.05),并呈浓度依赖性,同时增加细胞的凋亡率(P<0.05)。RT-PCR结果显示,下调LRP16的表达减弱NF-κB的转录活性,进而对其下游靶基因的水平进行调节。结论 LRP16在足叶乙甙导致的凋亡起重要作用,而且可能是通过下调NF-κB的活性来发挥化疗药物抵抗效应。我们的实验结果初步证实抑制LRP16增加Hela细胞对足叶乙甙的敏感性。

p16^(INK4a)和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的研究

目的探讨抑癌基因p16INK4a和RASSF1a启动子甲基化在非小细胞肺癌中的作用。方法应用甲基化特异的PCR(methyl-specific PCR,MSP)和RT-PCR法测定基因的甲基化率与mRNA的转录水平,回收PCR产物测序。结果在NSCLC癌/癌旁组织中的甲基化率分别是RASSF1a为55%和10%,p16INK4a为43%和12%,p16INK4a和RASSF1a的甲基化率在>65岁组高于≤65岁组,两基因甲基化率均随吸烟指数的增加而增高,并且随TNM临床进展而逐渐增加;p16INK4a甲基化率鳞癌组高于腺癌组。甲基化的NSCLC标本mRNA转录失活或下降,在细胞株水平5-aza-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理后,甲基化而转录沉默的细胞株恢复转录活性。结论启动子甲基化是调节p16INK4a和RASSF1a转录的重要机制,5-Aza-CdR具有逆转甲基化而恢复转录的作用。

KLF16对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制

目的探讨Krüppel样转录因子16(KLF16)对胃癌细胞增殖、克隆能力的影响及机制。方法取处于对数生长期的BGC-823和SGC-7901细胞,每种细胞分为3组,sh-KLF16 1#、2#、3#组采用脂质体Lipofectamine3000,分别将sh-KLF16 1#、sh-KLF16 2#、sh-KLF16 3#转染至细胞中,sh-NC组将shRNA无关序列转染至细胞中,以不转染shRNA的细胞为空白对照组。Real-time PCR法检测KLF16 mRNA相对表达量。CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性,细胞克隆形成试验检测胃癌细胞克隆能力。Western blotting法检测细胞中细胞周期相关蛋白p21和细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)的表达。结果 BGC-823细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF16 1#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.13±0.10、1.06±0.15、0.57±0.11、0.72±0.14、0.39±0.13;SGC-7901细胞中,空白对照组,sh-NC组,sh-KLF16 1#、2#、3#组KLF16 mRNA相对表达量分别为1.09±0.12、1.02±0.14、0.59±0.15、0.53±0.11、0.31±0.15;两种细胞中,sh-KLF16#3组的KLF16 mRNA相对表达量低于sh-KLF16#1组和shKLF16#2组(P均<0.05)。在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,细胞增殖受抑制。BGC-823细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF16 3#组细胞克隆数目分别为(180.45±19.32)、(189.83±22.43)、(109.32±24.31)个,SGC-7901细胞中,空白对照组、sh-NC组、sh-KLF16 3#组细胞克隆数目分别为(148.41±21.43)、(152.95±24.75)、(87.82±18.43)个,sh-KLF16 3#组细胞克隆数目低于空白对照组、sh-NC组(P均<0.05)。在BGC-823和SGC-7901细胞中,干扰KLF16基因表达后,p21蛋白表达增加(P均<0.05),而CDK4蛋白表达下降(P均<0.05)。结论干扰KLF16基因表达,可抑制细胞增殖和克隆形成能力,其机制可能与上调p21蛋白和降低CDK4蛋白表达有关。

S100A16在饮食诱导肥胖大鼠中的作用

目的:探讨S100A16蛋白对体重增加过程的影响,进一步研究S100A16蛋白在肥胖及肥胖相关疾病的发生发展过程中的作用。方法:正常8周龄大鼠随机分为正常饮食组(NF,n=10)和高脂饮食组(HF,n=10),建立饮食诱导的肥胖(DIO)大鼠模型,喂食14周时进行腹腔葡萄糖耐量试验(IPGTT)及胰岛素释放试验(IRT),喂食16周处死后称量皮下及内脏脂肪重量,采用HE染色方法 (hematoxylin and eosin staining,HE)观察肝脏脂肪变性程度,放射免疫分析法检测血糖、血清胰岛素、尿酸等血清生化指标,同时应用Western blot方法检测脂肪组织中S100A16及糖脂代谢相关转录因子的蛋白表达。结果:DIO组大鼠的体重、内脏脂肪明显高于正常组,血清总胆固醇和尿酸DIO组高于正常组但糖耐量和胰岛素释放低于正常组,Western blot显示DIO组大鼠脂肪和肝脏组织中S100A16、PPAR-γ、C/EBP-α的蛋白表达均高于正常组。结论 :高脂饮食可上调S100A16及相关转录因子的表达;S100A16的高表达可促进脂质生成及肥胖发生,并对机体的胰岛素敏感性产生负性影响。

P16^(INK4A)、ΔNP63与Brn-3a作为宫颈上皮内瘤变标志物的研究

目的:探讨肿瘤抑制基因P16INK4A、凋亡相关基因异构体ΔNP63和细胞转录因子Brn-3a在各级宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)的TCT标本中的表达及其作为CIN生物标志物的可行性和临床意义。方法:利用SP免疫组化法检测71例TCT标本中P16INK4A和ΔNP63的表达;用RT-PCR法检测各标本中Brn-3a mRNA的转录,分析它们与CIN病理分级的关系。结果:各级病理学诊断中P16INK4A与ΔNP63阳性率分别为炎症(4.76%/4.76%),CINⅠ(89.47%/84.21%),CINⅡ(100%/100%),CINⅢ(100%/100%),各级CIN与炎症的P16INK4A和ΔNP63阳性率之间,差异有极显著性(P<0.001),各级CIN的阳性率之间,差异无统计学意义(P>0.05)。Brn-3a的表达阳性率分别为炎症(0%),CINⅠ(5.26%),CINⅡ(50%),CINⅢ(90.48%),CINⅢ的Brn-3a阳性率明显高于与炎症、CINⅠ组(P<0.01),炎症与CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:P16INK4A、P63与Brn-3a可作为CIN的标志物,辅助细胞学筛查,Brn-3a可能成为间接反映CIN发展的生物学指标。

乙醇通过干预PGC-1α表达水平调节AC16心肌细胞线粒体生成

目的探究不同浓度乙醇干预下AC16心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)及其下游蛋白核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)表达水平的变化以及心肌细胞线粒体结构功能的改变。方法应用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位改变,电镜下观察细胞超微结构改变,应用实时定量PCR、Western blotting技术分别在基因及蛋白水平检测细胞PGC-1α、NRF-1、TFAM表达水平的变化。结果低浓度乙醇组(50 mmol/L)线粒体数量增加,线粒体膜电位升高,PGC-1α、NRF-1、TFAM表达上调;高浓度乙醇组(200 mmol/L)线粒体数量减少、畸变,线粒体膜电位下降,PGC-1α、NRF-1、TFAM表达下调。结论乙醇对心血管疾病的影响主要是通过调节心肌细胞中PGC-1α、NRF-1、TFAM表达水平从而影响心肌细胞线粒体生成实现的。

ATG16L1基因启动子单核苷酸多态性可增加急性心肌梗死的易感性

目的探讨ATG16L1基因启动子序列单核苷酸多态性(SNP)与急性心肌梗死(AMI)的相关性。方法采用病例-对照研究方法,对285例AMI患者和296例对照人群的ATG16L1基因启动子采用聚合酶链反应扩增片段并测序,结合DNA测序后的序列及比对SNP数据库后进行数据统计和分析。运用Hardy-Weinberg平衡检验后,应用χ2检验和t检验进行相关分析。采用Logistic回归对多种危险因素以及3个SNP位点与AMI易感性进行关联性分析。用Haploview 4.2软件和SHEsis在线软件进行连锁不平衡及单倍型分析。TRANSFAC数据库用于预测可能受SNP影响的转录因子的结合位点。结果多因素Logistic回归分析结果显示男性、吸烟史、高血压是AMI的独立危险因素(P<0.05),而高密度脂蛋白胆固醇是AMI的保护因素(P<0.05)。在ATG16L1基因启动子序列中的3个SNP(rs1816753、rs12476635、rs2289477)中,rs1816753的TC基因型与AMI间存在关联,可明显增加AMI的患病风险(OR=2.519,95%CI:1.130~5.615,P=0.024)。通过Haploview 4.2软件分析显示3个SNP之间呈强连锁。结论ATG16L1基因启动子SNP可能与AMI易感性相关,rs1816753的TC基因型可能是AMI的遗传危险因素。

晚期胃癌患者血浆RUNX3和p16基因甲基化与化疗疗效的相关性

目的探讨晚期胃癌患者血浆RUNT相关转录因子3(human RUNT-related transcription factor 3,RUNX3)和p16基因甲基化与临床病理特征和氟尿嘧啶化疗敏感性的关系。方法收集行一线氟尿嘧啶联合化疗的晚期胃癌患者67例和体检健康42例。应用甲基化特异性PCR法检测血浆中RUNX3和p16基因甲基化,分析基因甲基化和临床病理特征、化疗疗效的关系。结果化疗前胃癌患者p16和RUNX3的甲基化频率均高于对照组[61.2%(41/67)vs 0.0%(0/42),70.1%(47/67)vs 11.9%(5/42);均P<0.01]。化疗后胃癌患者p16和RUNX3的甲基化频率分别降低至47.8%(32/67;χ^2=5.05,P=0.025)和47.8%(38/67;χ^2=2.61,P=0.106)。以胃为主要肿瘤部位的患者血浆标本中p16和RUNX3的甲基化频率均高于以胃食管交界处为主要肿瘤部位的患者(均P<0.05)。p16和RUNX3甲基化阳性患者对氟尿嘧啶化疗的应答率均低于甲基化阴性患者(17.1%vs 42.3%,P=0.023;19.1%vs45.0%,P=0.029)。结论p16和RUNX3的甲基化在胃癌患者血浆中较为常见且特异性强,二者与患者对氟尿嘧啶化疗的反应密切相关。

水稻WRKY16基因分析及其转化拟南芥研究

通过酵母单杂交方法从水稻中获得编码转录因子的WRKY16基因。序列分析表明,WRKY16蛋白属于WRKY转录因子家族第二类别。利用根癌农杆菌进行WRKY16基因的拟南芥转化,GUS组织化学染色和PCR检测证明WRKY16基因已经转入拟南芥中,RT-PCR检测进一步证明该基因已在转基因植株得到表达。

EPO对高脂喂养小鼠棕色脂肪组织PRDM16、FGF21表达及STAT3磷酸化水平的影响

目的:探索促红细胞生成素(EPO)对高脂饲料(HFD)喂养小鼠血糖和血浆胰岛素水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖耐量,以及棕色脂肪组织中含PR结构域蛋白16(PRDM16)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)磷酸化水平(p-STAT3/STAT3)、成纤维细胞生长因子21(FGF21) mRNA以及蛋白质表达的影响,为肥胖及其并发症的发生机制提供线索。方法:20只高脂饲料喂养的C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(HFD-Con)和EPO组(HFD-EPO),两组分别腹腔注射生理盐水和EPO(200 IU/kg),每周3次,连续4周。4周后检测两组动物的体重、血糖与血浆胰岛素水平、HOMA-IR及糖耐量的变化;分别使用实时定量PCR法和Western blot法检测棕色脂肪组织中PRDM16、STAT3、FGF21 mRNA和蛋白质水平。结果:腹腔注射EPO 4周后,HFD-EPO组小鼠体重为(26.65±0.85) g,HFD-Con组体重为(31.50±1.60) g,P<0.01。HFD-Con组血糖为(91.06±9.86) mg/dl,HFD-EPO组为(62.79±8.09) mg/dl,P<0.01; HFD-EPO组小鼠血浆胰岛素水平为(10.56±1.06)μU/ml,HFD-Con组为(13.2±1.1)μU/ml,P<0.01。与HFD-Con组比较,HFD-EPO组的糖耐量水平显著改善,胰岛素抵抗指数下降; HFD-EPO组动物棕色脂肪组织中PRDM16、FGF21mRNA以及蛋白质表达,p-STAT/STAT3水平均显著增加,两组小鼠肝脏中FGF21 mRNA含量、血浆中FGF21含量无明显差异。结论:EPO可能通过增加棕色脂肪组织中PRDM16表达促进棕色脂肪组织的分化,降低高脂喂养小鼠的血糖水平、改善高脂喂养小鼠的糖代谢状态。