抑制核转录因子Gli1表达对人肺腺癌耐顺铂细胞株的顺铂耐药性逆转作用观察

目的观察抑制核转录因子Gli1表达对人肺腺癌耐顺铂细胞株的顺铂耐药性逆转作用。方法将人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP随机分为GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组,其中GANT61组加入10μmol/L的Gli1抑制剂GANT61,环杷明组加入10μmol/L的Smo抑制剂环杷明,LY294002组加入20μmol/L的PI3K抑制剂LY294002,对照组加入培养基。各组细胞继续培养48 h后,采用实时荧光定量PCR法和Western Boltting法检测细胞中Gli1 mRNA和蛋白,采用MTT法测算顺铂对各组细胞的半数抑制浓度(IC_(50)),采用Western Boltting法检测细胞中多药耐药相关蛋白(MRP1)及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax,采用Annexin V-FITC法测算各组细胞凋亡率。结果GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞中Gli1 mRNA相对表达量分别为0.30±0.08、0.62±0.12、0.68±0.11、1.05±0.10,其中环杷明组与LY294002组相比,P>0.05;其余组间两两相比,P均<0.05。GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞中Gli1蛋白相对表达量分别为0.28±0.12、0.59±0.07、0.55±0.13、0.97±0.06,其中环杷明组与LY294002组相比,P>0.05;其余组间两两相比,P均<0.05。顺铂对GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞的IC_(50)值分别为(7.35±1.03)、(9.86±0.71)、(10.23±1.02)、(14.26±2.10)μg/mL,其中环杷明组与LY294002组相比,P>0.05;其余组间两两相比,P均<0.05。GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组MRP1蛋白的相对表达量分别为0.18±0.09、0.38±0.17、0.58±0.19、0.83±0.24,组间相比,P均<0.05。GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞凋亡率分别为27.27%±0.99%、15.45%±1.01%、12.35%±1.80%、6.25%±0.38%,其中环杷明组与LY294002组相比,P>0.05;其余组间两两相比,P均<0.05。GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量分别为0.15±0.08、0.33±0.15、0.63±0.13、0.91±0.19,组间相比,P均<0.05。GANT61组、环杷明组、LY294002组、对照组细胞中Bax蛋白的相对表达量分别为1.88±0.38、1.34±0.25、1.27±0.39、0.64±0.18,其中环杷明组与LY294002组相比,P>0.05;其余组间两两相比,P均<0.05。结论抑制Gli1表达可通过降低顺铂对A549/DDP细胞的IC_(50)、促进A549/DDP细胞凋亡,逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性;Smo抑制剂环杷明、PI3K抑制剂LY294002、Gli1抑制剂GANT61均可抑制A549/DDP细胞中Gli1的表达。

食管鳞癌组织中Shh和Gli1的表达及其临床意义

目的探讨Hedgehog（Hh）信号通路中Shh和Gli1与食管鳞状细胞癌的关系。方法应用免疫组积化学sP法检测食管鳞癌组织（n=64）和正常食管黏膜组织（n=24）中Shh和Gli1蛋白的表达情况。结果食管鳞癌组织中Shh和Gli1的阳性表达率均显著高于正常食管黏膜组织[67．19％（43／64）与4．17％（1／24），60．94％（39／64）与4．17％（1／24）]，差异均有统计学意义（χ2值分别为27．729、22．689，P均〈0．01）。Shh蛋白的表达在食管鳞癌细胞的不同分化组、不同临床分期组间及有无淋巴结转移组差异均有统计学意义（χ2值分别为3．873、11．349和6．429，P〈0．05或P〈0．01）；Gli1表达率在食管鳞癌细胞的不同分化组、不同临床分期组间及有无淋巴结转移组差异均有统计学意义（χ2值分别为12．598、9．741和26．341，P均〈0．01）；食管鳞癌组织中Shh与Gli1表达呈显著正相关（r=0．259，P〈0．05）。结论Hh信号通路在食管鳞癌组织中异常活化，Shh、Gli1表达与食管鳞癌发生发展及侵袭转移有关，可能成为新的治疗食管鳞癌的靶点。

三氧化二砷对急性早幼粒细胞白血病细胞株Hedgehog信号通路的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞Hedgehog信号转导通路相关分子的作用,为将其扩大应用于其他具有Hedgehog异常活化的肿瘤提供理论基础。方法:将不同浓度的As2O3作用于急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株48 h,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹技术检测Hedgehog信号转导通路关键分子Smoothened(Smo)、Ptch、Gli1和Gli2在mRNA和蛋白水平的变化。结果:As2O3处理后,NB4细胞的Smo、Ptch、Gli2在蛋白和mRNA水平均受到明显抑制,差异有统计学意义。结论:As2O3可能是通过抑制Gli2蛋白和mRNA发挥抗Hedgehog信号转导通路的作用,而Hedgehog信号转导通路可能是As2O3发挥抗急性早幼粒细胞白血病的机制之一。

乙型肝炎相关性肝细胞癌组织中Gli1基因测定的临床意义

在胚胎发育、组织分化过程中，调控细胞分化与增殖的信号通路，如Hedgehog（HH）在肿瘤的发生发展中起着重要作用H0，而其同源基因SonicHedgehog（SHH）在哺乳动物中作用最为广泛。研究显示，SHH信号通路中的转录因子Glil功能异常可阻碍细胞增殖和分化，影响组织器官发育，提示Glil可能与各种类型癌症的发生相关。

Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Hedgehog信号中的Gli1蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法我院2008年5月—2010年6月收集的64例乳腺癌组织以及52例癌旁正常乳腺组织,采用免疫组化S-P方法测定乳腺癌组织中Gli1蛋白的表达情况。结果通过免疫组化分析,正常乳腺组织细胞中的Gli1蛋白无明显表达,而在乳腺癌组织中表达明显,二组比较有显著性差异(χ2=82.4731,P<0.01);Gli1蛋白在乳腺癌患者腋窝淋巴结有无转移中的表达有显著差异(χ2=23.3903,P<0.01),在Ⅲ期乳腺癌中的阳性表达率高于Ⅰ-Ⅱ期乳腺癌(χ2=12.9067,P<0.01)。结论乳腺癌组织的发生演变的过程中Hedgehog信号在传导的通路中表现活跃,与乳腺癌的发生有密切的关系。

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病Hedgehog信号转导通路分子蛋白表达的影响

目的:以人类慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562为模型,探讨三氧化二砷(ATO)是否对CML细胞具有诱导凋亡作用,并探讨ATO是否对Hedgehog(Hh)信号转导通路相关分子具有显著抑制作用。为将ATO应用于具有Hh异常活化的CML提供理论基础。方法:将不同浓度的ATO作用于K562细胞48 h,采用流式细胞术检测ATO对K562的诱导凋亡效果;采用免疫印迹(WB)技术检测ATO处理后Hh信号转导通路关键分子Gli2、Gli1、和Ptch2在蛋白水平的变化。结果:ATO处理后,K562细胞出现剂量依赖性凋亡效应,Ptch2和Gli2的蛋白均受到显著的影响,且差异有统计学意义。结论:在CML细胞中,ATO可能是以Gli2蛋白为靶点抑制Hh信号转导通路,该研究为扩大ATO应用于CML提供了理论基础。