抑制核转录因子E2相关因子2途径对高糖状态下胰腺癌细胞转移及免疫逃逸因子表达的调节作用

目的:探究抑制核转录因子E2相关因子2(Nrf2)途径对高糖状态下胰腺癌细胞转移及分泌免疫逃逸因子水平的影响。方法:培养人胰腺癌细胞株Panc-1,采用5.5、10、25、50 mmol/L葡萄糖处理细胞,分别于12 h、24 h、48 h通过MTT检测细胞增殖率,24 h时通过RT-qPCR和Western blot检测细胞内Nrf2表达变化;实验分为:对照组、高糖(HG)组、Nrf2抑制剂ML385+高糖(ML385+HG)组,MTT检测细胞增殖率,细胞克隆形成实验检测细胞集落形成数,Transwell检测细胞迁移数与侵袭数,体外划痕实验检测细胞划痕愈合情况,ELISA测定细胞培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)、IFN-γ、转化生长因子-β1(TGF-β1)和IL-6含量,细胞免疫荧光染色观察细胞内Nrf2分布,Western blot测定细胞中Nrf2和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果:相较于5.5 mmol/L葡萄糖组,10、25、50 mmol/L葡萄糖处理12 h和24 h时Panc-1细胞增殖率升高,Nrf2 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05);与对照组比较,HG组细胞增殖率升高,集落形成数增加,迁移数与侵袭数均增加,划痕愈合率升高,细胞培养上清中VEGF、IFN-γ、TGF-β1和IL-6含量均增加,Nrf2荧光染色明显增强,细胞核内Nrf2表达增加,Nrf2和HO-1蛋白表达上调(P<0.05);与HG组比较,ML385+HG组细胞增殖率降低,集落形成数、迁移数与侵袭数均减少,划痕愈合率下降,培养上清中VEGF、IFN-γ、TGF-β1和IL-6含量均减少,细胞内Nrf2荧光染色较弱,Nrf2和HO-1蛋白表达下调(P<0.05)。结论:高糖状态下胰腺癌细胞中Nrf2高表达,抑制Nrf2途径能够抑制高糖促进的胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并减少免疫逃逸因子分泌。

紫檀芪调控核转录因子E2相关因子2对体外结肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨紫檀芪对人结肠癌细胞LoVo的作用,并研究核转录因子E2相关因子2(Nrf2)在紫檀芪作用LoVo细胞过程中的调控机制。方法应用不同浓度的紫檀芪(5、10、20、40、60、80、100μmol/L)处理LoVo细胞。CCK-8检测细胞活力,划痕实验检测细胞迁移,Transwell实验检测细胞侵袭,TUNEL染色检测细胞凋亡,JC-1检测线粒体膜电位水平,2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧水平,Western blot检测细胞内Nrf2、磷酸化的Nrf2、血红素加氧酶-1及凋亡蛋白(Bcl2、Bax)的蛋白表达。此外,联合应用Nrf2特异性激动剂萝卜硫素后,重复检测细胞活力、细胞凋亡率及Nrf2的蛋白表达。结果与对照组相比,40、60、80、100μmol/L紫檀芪均可显著降低细胞活性(P=0.014,P<0.001,P<0.001,P<0.001)。5、10、20μmol/L紫檀芪对LoVo细胞活性无影响,但可显著抑制细胞迁移(P=0.008,P<0.001,P<0.001)和侵袭(P均<0.001)。TUNEL染色、JC-1、2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯染色结果显示40、60、80μmol/L紫檀芪增加LoVo细胞凋亡(P=0.014,P<0.001,P<0.001),使线粒体膜电位去极化(P=0.026,P<0.001,P<0.001)并增加细胞内活性氧聚积(P均<0.001)。40、60、80μmol/L紫檀芪下调了LoVo细胞中磷酸化的Nrf2(P=0.030,P<0.001,P<0.001)、血红素加氧酶-1(P=0.015,P<0.001,P<0.001)、Bcl2(P=0.039,P<0.001,P<0.001)的蛋白表达;60、80μmol/L紫檀芪降低了Nrf2的蛋白表达(P=0.001,P<0.001),增加了Bax的蛋白表达(P均<0.001)。应用萝卜硫素联合处理后,紫檀芪抑制细胞活性(P<0.001)、增加细胞凋亡(P<0.001)及下调Nrf2表达(P=0.022)的作用明显减弱。结论紫檀芪是一种有效抑制结肠癌细胞的化合物,其抗癌机制与抑制Nrf2通路有关。

金蓉颗粒通过雌二醇/活性氧簇/核转录因子E2相关因子2通路抑制乳腺癌进程的机制研究

【目的】观察金蓉颗粒(原名消癖颗粒,由淫羊藿、肉苁蓉、郁金等组成)对MMTV-PyMT小鼠乳腺癌发生与转移的影响及对雌二醇(E2)/活性氧簇(ROS)/转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的调控作用。【方法】选取MMTV-PyMT自发乳腺癌转基因小鼠模型,分为模型组(生理盐水灌胃)、金蓉颗粒组(0.5 mg/kg金蓉颗粒混悬液灌胃),共给药12周。给药结束后,观察2组小鼠原发肿瘤大小及肺转移情况,检测血清中E2、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)、ROS的水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察乳腺肿瘤组织病理学改变,免疫组织化学法检测乳腺肿瘤组织中层黏连蛋白(Laminin)、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达水平,聚合酶链反应(PCR)法检测乳腺肿瘤组织中Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达水平。【结果】与模型组比较,金蓉颗粒组小鼠乳腺肿瘤生长及肺转移被明显抑制,血清E2、ROS和8-OHdG水平明显降低,SOD、CAT、GSH-PX、T-AOC水平明显升高(均P<0.05),乳腺肿瘤组织中Laminin表达水平显著降低,Nrf2及下游NQO1、HO-1的蛋白和mRNA表达水平升高(均P<0.05)。【结论】金蓉颗粒可抑制小鼠乳腺癌生长及肺转移,其机制可能与激活E2/ROS/Nrf2通路有关。

核因子E2相关因子1过表达抑制宫颈癌细胞增殖及迁移

目的:初步探究核因子E2相关因子1(nuclear factor erythroid 2-related factor 1,Nrf1)在宫颈癌组织中的表达及其过表达对宫颈癌细胞增殖以及迁移的影响。方法:通过TCGA数据分析Nrf1在人宫颈癌及正常宫颈组织中的表达水平差异;检索OncoLnc网站,比较Nrf1高表达与低表达宫颈癌患者的生存率;采用qRT-PCR检测11对宫颈癌及癌旁组织中Nrf1 mRNA的表达水平。通过慢病毒转染方式构建Nrf1过表达宫颈癌HeLa、SiHa细胞株,以及对应的空载体细胞株;采用qRT-PCR及蛋白免疫印迹实验分别检测细胞株内Nrf1的mRNA和蛋白表达水平;采用EdU细胞增殖实验、细胞克隆形成实验、Transwell细胞迁移实验以及细胞划痕愈合实验检测宫颈癌细胞的增殖和迁移。结果:TCGA数据分析显示,宫颈癌组织中Nrf1 mRNA表达水平明显低于正常宫颈组织(P<0.01);OncoLnc网站分析显示,Nrf1高表达组患者生存率明显高于Nrf1低表达组(P<0.05);qRT-PCR结果显示,Nrf1 mRNA在宫颈癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。qRT-PCR及蛋白免疫印迹实验结果显示,在宫颈癌HeLa、SiHa细胞株中,Nrf1过表达组Nrf1 mRNA及蛋白水平较空载体对照组明显升高(P<0.05);与空载体对照组相比,Nrf1过表达组EdU标记的细胞占比、克隆细胞数及细胞迁移数均明显降低(P<0.01或P<0.05)。结论:Nrf1在宫颈癌组织中呈低表达;外源性过表达Nrf1可显著抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力。

高糖抑制HK-2细胞NRF2信号轴相关蛋白表达并诱导线粒体损伤

目的:探讨高糖培养对人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激的影响及其相关机制。方法:传代培养HK-2细胞,并将细胞分为4组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和高糖+Ferrostatin-1组(5.5 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L Ferrostatin-1)。采用CCK-8法检测细胞的增殖活性;使用流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用ROS和GSH试剂盒测定细胞内ROS和GSH水平;通过蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测NRF2、SLC7A11、GPX4蛋白表达水平;进行细胞线粒体荧光染色,观察并检测各组细胞的线粒体荧光密度。结果:与对照组相比,高糖可以抑制HK-2细胞的增殖活性(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05),升高细胞内ROS水平(P<0.05),降低GSH水平(P<0.05),下调NRF2、SLC7A11(System Xc)、GPX4蛋白表达(P<0.01),降低线粒体荧光光密度(P<0.01)。Ferrostatin-1干预后,高糖介导的细胞增殖抑制、凋亡促进、升高ROS、降低GSH等效应均被削弱(P<0.05),同时NRF2、GPX4蛋白表达水平上调(P<0.01),线粒体荧光光密度增加(P<0.01)。结论:高糖可显著抑制人肾小管上皮细胞HK-2的增殖活性,其机制可能与抑制NRF2信号轴相关蛋白的表达,促进细胞发生氧化应激,诱导线粒体损伤有关;而铁凋亡抑制剂Ferrostatin-1能削弱高糖对细胞产生的上述氧化损伤作用,提示铁凋亡参与了高糖诱导HK-2细胞的损伤。

利拉鲁肽调控Nrf2/ARE介导的焦亡通路减轻2型糖尿病大鼠心肌损伤的机制研究

目的:探究利拉鲁肽调控核因子E2相关转录因子2(Nrf2)、抗氧化反应原件(ARE)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌细胞焦亡的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为对照组、T2DM组、利拉鲁肽低、中、高剂量组、高剂量+Nrf2抑制组,10只/组;给予高糖高脂饲料,腹腔注射链脲佐菌素建立T2DM大鼠模型,对照组大鼠给予基础饲料,注射等剂量柠檬酸缓冲液,造模成功后,各处理组腹腔注射相应剂量药物,对照组及T2DM组注射等量生理盐水(共12周);血糖仪检测空腹血糖水平;ELISA检测大鼠血清IL-1β、IL-18水平;HE染色观察心肌组织病理学情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;Western blot检测心肌中焦亡相关蛋白、Nrf2、血红素氧化酶1(HO-1)表达水平。结果:相较于对照组,T2DM组大鼠空腹血糖、血清IL-18及IL-1β水平、心肌组织病理学程度、心肌细胞凋亡水平、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、IL-18表达显著升高,Nrf2、HO-1表达水平显著降低(P<0.05);相较于T2DM组,中、高剂量组大鼠空腹血糖、血清IL-18及IL-1β水平、心肌组织病理学程度、心肌细胞凋亡水平、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18表达水平显著降低,Nrf2、HO-1表达水平显著升高(P<0.05);相较于高剂量组,高剂量+Nrf2抑制组大鼠空腹血糖、血清IL-18及IL-1β水平、心肌组织病理学程度、心肌细胞凋亡水平、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18表达水平显著升高,Nrf2、HO-1表达水平显著降低(P<0.05)。结论:利拉鲁肽通过调控Nrf2/ARE通路,促进Nrf2、HO-1蛋白表达,抑制ASC蛋白表达,从而改善T2DM大鼠心肌细胞焦亡。

黄酮类化合物调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路的抗氧化机制及其在畜禽生产中应用的研究进展

黄酮类化合物属于多酚类化合物,广泛存在于天然植物中,具备很强的抗氧化能力。近年来,越来越多的研究证明黄酮类化合物作为饲料添加剂有益于畜牧生产。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1-核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件(Keap1-Nrf2/ARE)是增强机体抗氧化能力的关键信号通路,参与抵抗外界氧化应激。黄酮类化合物主要通过调控Keap1-Nrf2/ARE通路,激活上下游关键因子,提高抗氧化酶的活性,提高机体抗氧化能力,从而改善畜禽生长性能、繁殖性能和机体免疫力。作者通过综述Keap1-Nrf2/ARE分子结构和发挥抗氧化作用的机制,以及黄酮类化合物调控Keap1-Nrf2/ARE信号通路及其在畜禽生产中的应用研究,旨在为黄酮类化合物作为饲料添加剂的进一步开发和应用提供参考。

芹菜素通过调节ERK/Nrf2/HO-1信号通路对多囊卵巢综合征大鼠卵巢功能的影响

目的探究芹菜素对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢功能的影响。方法60只大鼠随机分为对照组,模型组,芹菜素低、中、高剂量组(15、30、60 mg/kg),阳性对照组(戊酸雌二醇0.1 mg/kg),每组10只。计算各组大鼠卵巢指数,观察卵巢组织病理学变化,ELISA法检测血清AMH、FSH、LH、DHEA、E_(2)、T水平,试剂盒法检测血清MDA、SOD、GPx水平,Western blot法检测卵巢组织p-ERK、ERK、HO-1、Nrf2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠体质量和卵巢指数,AMH、E_(2)、SOD、GPx水平,p-ERK/ERK、Nrf2、HO-1蛋白表达降低(P<0.05),FSH、LH、T、DHEA、MDA水平升高(P<0.05),卵巢组织存在病理学损伤;与模型组比较,芹菜素各剂量组和阳性对照组大鼠体质量和卵巢指数,AMH、E_(2)、SOD、GPx水平,p-ERK/ERK、Nrf2、HO-1蛋白表达升高(P<0.05),FSH、LH、T、DHEA、MDA水平降低(P<0.05),卵巢组织病理学损伤均有不同程度减轻。结论芹菜素可能通过激活ERK/Nrf2/HO-1信号通路来对PCOS大鼠卵巢功能发挥保护作用。

基于Keap1/Nrf2/ARE通路的中医药干预骨关节炎研究进展

骨关节炎是临床上常见的一种慢性筋骨疾病,其病程缠绵,反复发作,发病机制复杂,与氧化应激反应相关。Keap1/Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路,其调控的下游抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。骨关节炎的病程中Nrf2、NQO1、HO-1等关键蛋白表达受到抑制,组织抗氧化及抗炎能力减弱,软骨细胞损伤,软骨结构破坏。目前西医的治疗侧重于缓解症状,但不能逆转骨关节炎的进展,急需有效的非手术策略来延缓骨关节炎的病理过程。近年来,大量基础及临床试验表明Keap1/Nrf2/ARE通路是中医药治疗骨关节炎的潜在靶点之一。基于骨关节炎本虚标实的病机,中医药以补虚、化瘀、解毒等法调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路,在发挥抗氧化及抗炎作用同时,还能调节软骨细胞外基质的稳态,发挥对骨关节炎的治疗作用。本文总结了中医药靶向干预Keap1/Nrf2/ARE信号通路防治骨关节炎的作用机制,旨在为中医药更合理的运用临床防治骨关节炎提供理论基础。

Nrf2转录因子在炎症性肠病及其并发症中的研究进展

炎症性肠病(IBD)是一种慢性、复发性、非特异性的胃肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,其发病率呈逐年上升趋势。目前IBD的发病机制暂不明确,易导致严重的并发症,如肠纤维化和结直肠癌。IBD治疗药物包括抗生素、糖皮质激素、非甾体类抗炎药、生物制剂和免疫抑制剂等。然而,其不良反应较多,对重症患者的疗效有限。核转录因子E2相关因子2(Nrf2)在机体抗氧化和抗炎症反应中发挥着关键作用。多项研究证实Nrf2可调节IBD及其并发症的转归。本文就转录因子Nrf2在IBD中的研究进展进行综述,以期为探索IBD治疗靶点以降低其并发症提供新的启示。

基于Nrf2/GPX4铁死亡途径探讨加味桃仁承气汤对机械通气相关性肺损伤大鼠的保护作用

目的基于核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)铁死亡途径探讨加味桃仁承气汤对机械通气相关性肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)大鼠的保护作用。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、加味桃仁承气汤组、ML385(Nrf2抑制剂)组、加味桃仁承气汤+ML385组,每组12只。对照组大鼠进行气管插管,但自主呼吸;其他组大鼠均需进行机械通气4 h。机械通气前7 d进行给药处理,每日1次,连续7 d。机械通气结束后,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;检测大鼠肺组织湿质量/干质量比值变化;检测肺组织病理;试剂盒检测大鼠肺组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、Fe2+含量;免疫荧光染色法检测肺组织中活性氧(ROS)、4-羟基壬烯醛(4-HNE)相对荧光强度;检测肺组织中质载体家族7成员11(SLC7A11)、Nrf2、GPX4 mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织破坏明显,BALF中TNF-α、IL-6水平升高,肺组织湿质量/干质量比值、MDA、Fe2+含量及ROS、4-HNE相对荧光强度升高,GSH含量、Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,加味桃仁承气汤组大鼠肺组织病理损伤有所改善,BALF中TNF-α、IL-6水平降低,肺组织湿质量/干质量比值、MDA、Fe^(2+)含量及ROS、4-HNE相对荧光强度降低,GSH含量、Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01);ML385组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.01);加味桃仁承气汤+ML385组肺组织病理损伤减轻,BALF中TNF-α、IL-6水平降低,肺组织湿质量/干质量比值、MDA、Fe2+含量及ROS、4-HNE相对荧光强度降低,GSH含量、Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA及Nrf2、GPX4蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。与ML385组比较,加味桃仁承气汤+ML385组肺组织病理损伤有所缓解,BALF中TNF-α、IL-6水平降低,肺组织湿质量/干质量比值、MDA、Fe2+含量及ROS、4-HNE相对荧光强度降低,GSH含量、Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达升高(P<0.01)。与加味桃仁承气汤组比较,加味桃仁承气汤+ML385组大鼠肺组织病理损伤加剧,BALF中TNF-α、IL-6水平升高,肺组织湿质量/干质量比值、MDA、Fe2+含量及ROS、4-HNE相对荧光强度升高,GSH含量、Nrf2、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01)。结论加味桃仁承气汤可能通过激活Nrf2/GPX4通路抑制铁死亡进而改善大鼠VILI。

转录因子E2相关因子2-抗氧化反应元件信号通路与机体抗氧化的关系

转录因子E2相关因子2-抗氧化反应元件(Nrf2-ARE)信号通路是机体抗氧化过程中的重要调节途径。Nrf2-ARE信号通路在抗氧化活化过程中受亲核物质、氧化应激因子、蛋白激酶C(PKC)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、胰腺内质网激酶(PERK)等因子调控。Nrf2-ARE信号通路的活化可以保护细胞的酶类和抗氧化物处于基础表达水平,细胞处于稳定状态。本文就Nrf2-ARE信号通路调节机体抗氧化的机理进行综述。

核转录因子E2相关因子2和Keap1的分子结构和功能及其信号通路调控分子机制研究进展

核转录因子E2相关因子(Nrf2)和抗氧化反应元件(ARE)结合可启动多种抗氧化、抗炎蛋白和解毒酶的表达。Nrf2/ARE信号通路在机体抗氧化和抗外源有毒化学物损伤过程中发挥着重要的作用,不仅参与调节营养物质代谢等生理过程,也参与多种疾病的发病过程。本文综述了Nrf2/ARE的生物学结构和功能及其信号通路调控的分子机制。

核转录因子-κB和核转录因子E2相关因子2的激活机制及两者间的交互作用

炎症及氧化应激是常见的病理过程，可导致DNA链的破坏、蛋白质或酶失活，干扰体内多种生理过程，进而导致肿瘤、急性肺损伤（ALI）、慢性阻塞性肺疾病（COPD），脓毒症等疾病的产生。人体内存在多种抵抗有害因素的信号通路，其中转录因子是细胞内基因表达／调控必不可少的，最重要的因子包括核转录因子-κB（NF—κB）和核转录因子E2相关因子2（Nrf2）。

MEK/ERK信号通路对人胶质母细胞瘤U87细胞中转录因子Nrf2核积累的影响

目的探讨在人胶质母细胞瘤U87细胞中MEK/ERK信号通路对转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)核积累的影响。方法用MEK/ERK信号通路特异性抑制剂PD98059处理U87细胞2 h后,免疫荧光染色法评估其对Nrf2蛋白分布的影响,用Western blot法分析核内Nrf2蛋白水平的变化。结果 MEK/ERK信号通路抑制剂PD98059能抑制Nrf2的核转移,显著降低核内Nrf2的蛋白水平。结论人胶质母细胞瘤U87细胞中异常激活的ERK信号通路与转录因子Nrf2的核积累密切相关。

转录因子E2F2在恶性肿瘤生物学功能中研究进展

细胞周期相关转录因子E2F2(transcription factor E2F2)是细胞周期相关转录因子E2F家族成员之一,参与细胞周期、增殖、凋亡、迁移及侵袭等过程,近几年大量的研究发现E2F2在肿瘤细胞中过表达。因此,本文对E2F2在头颈部、消化、呼吸、泌尿生殖、骨肌系统以及乳腺等恶性肿瘤中的作用以及分子机制研究进行综述,为进一步研究E2F2的生物学功能和治疗靶点的确立提供参考。

翻译后修饰对转录因子NF-E2相关因子2功能的调控

抗氧化反应组件(AREs)普遍存在于编码抗氧化和/或解毒酶基因的启动子区域,为这些基因的转录启动所必需;而这些基因的表达对维持细胞内氧化还原稳态,抵抗活性氧类(ROS)引起的细胞损伤发挥重要作用。转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,NRF2)作为抗氧化反应中的关键转录因子,可以与ARE结合,启动其下游靶基因,在氧化应激及亲电子剂应激中发挥重要的调控作用,广泛参与炎症、增殖、凋亡、细胞分化、组织再生和代谢等过程;因此,激活NRF2有望成为治疗肿瘤及其他与氧化、炎症相关疾病的新策略。蛋白质的翻译后修饰,对蛋白质空间构象、稳定性及其与其他蛋白质间相互作用具有重要作用。因此,探究NRF2的翻译后修饰如磷酸化、乙酰化和泛素化的修饰过程等,对深入了解NRF2的功能及调控机制至关重要,并与某些疾病的发生发展密切相关。本文对近年来翻译后修饰对NRF2的活性及功能的调控进行综述。

二十碳五烯酸通过调节Nrf2通路抑制脂多糖诱导肾小球系膜细胞焦亡

目的:以核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)蛋白为切入点,基于Nrf2/NLRP3/GSDMD信号通路探究二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肾小球系膜细胞焦亡的调控作用,结合Nrf2激动剂(4-OI)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-bound oligomerized domain-like receptor protein 3,NLRP3)受体抑制剂(MCC950)探究EPA调控焦亡信号通路的机制。方法:LPS体外诱导肾小球系膜细胞(HBZY-1)焦亡模型,并根据不同药物处理分别设置空白对照组、LPS组、LPS+EPA组、LPS+EPA+4-OI组和LPS+EPA+MCC950组,其中LPS浓度为10μg/mL,EPA、4-OI和MCC950的浓度均为200μmol/L,按分组将药物同时加入培养板中处理48 h,利用CCK-8法、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、TUNEL染色检测细胞损伤,ELISA检测细胞上清液中炎症因子IL-1β、IL-18释放量,蛋白免疫印迹法检测Nrf2、NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白表达水平。结果:LPS与EPA共处理HBZY-1细胞的细胞活力实验表明,10μg/mL LPS刺激48 h显著降低了细胞活力(P<0.05),但20~200μmol/L EPA对其有明显的保护作用(P<0.05)。采用200μmol/L EPA进行后续实验发现,EPA可明显保护LPS造成的细胞损伤(P<0.01),减少炎性因子(P<0.01)、LDH的释放(P<0.01)和DNA的断裂并抑制焦亡信号通路的激活,促进Nrf2蛋白的表达(P<0.01)。结合4-OI、MCC950共处理发现4-OI可以促进EPA对焦亡的抑制作用(P<0.05),减少相关蛋白的表达以及因子的释放(P<0.05),并增强EPA对细胞的保护(P<0.01),而MCC950对EPA发挥的作用无显著影响。结论:EPA通过Nrf2抑制LPS诱导的HBZY-1细胞焦亡信号通路各分子的表达,发挥细胞保护作用。

Nrf2和ET-1水平与冠心病的相关性分析

目的 探讨Nrf2和ET-1水平与冠状动脉狭窄程度的相关性。方法 选取2018年6月至2019年1月医院收治的160例患者,分为冠心病组80例,非冠心病组80例,测量两组患者血清Nrf2和ET-1水平及其他生化指标含量,使用Logistic回归分析两组患者血清Nrf2和ET-1水平与冠心病发生的关系,并使用多元线性回归分析冠心病患者冠状动脉病变程度的可能影响因素。结果 在年龄、性别均衡可比的情况下,非冠心病组患者血清Nrf2水平为(911.889±174.607)pg/mL高于冠心病组的(816.181±192.732)pg/mL(P <0.05),而ET-1水平非冠心病为(92.554±26.216)pg/mL小于冠心病组(111.218±33.210)pg/mL(P <0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示:吸烟史、糖尿病、高血压病史、TC、LDL-C及ET-1水平是CHD发生的独立危险因素,而HDL-C及Nrf2为保护因素。结论 冠心病患者血清Nrf2和ET-1水平与冠心病患者冠状动脉狭窄有关。

核转录因子E2相关因子2对脑缺血再灌注大鼠脑组织中炎症因子表达和神经胶质细胞活化的影响

目的探讨核转录因子E2相关因子2(Nrf 2)在脑缺血再灌注大鼠脑组织中的表达及其对缺血再灌注所引起的炎症反应及神经胶质细胞活化标志物表达的影响。方法30只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为正常组、假手术组、卒中梗阻侧组、卒中梗阻对侧组、Nrf 2激动剂组及空白溶剂组,每组5只。正常组大鼠不给予任何干预措施,假手术组大鼠行皮肤切开缝合术,卒中梗阻侧组、卒中梗阻对侧组、Nrf 2激动剂组、空白溶剂组大鼠行大脑中动脉栓塞术制备缺血性脑卒中模型。造模手术后Nrf 2激动剂组、空白溶剂组大鼠分别经尾静脉注射0.1 mL特丁基对苯二酚和0.1 mL生理盐水。手术后3 d取大鼠脑组织,采用Western blot法检测正常组、假手术组、卒中梗阻侧组、卒中梗阻对侧组大鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)和干扰素(IFN)蛋白的表达,检测假手术组、卒中梗阻侧组和Nrf 2激动剂组大鼠脑组织中Nrf 2蛋白表达,检测正常组、假手术组、卒中梗阻侧组、Nrf 2激动剂组、空白溶剂组大鼠脑组织中IL-6、IFN、小胶质细胞活化标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、星形胶质细胞活化标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果假手术组、卒中梗阻对侧组及正常组大鼠脑组织中IFN、IL-6蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05),卒中梗阻侧组大鼠脑组织中IFN、IL-6蛋白表达高于正常组、假手术组和卒中梗阻对侧组(P<0.05)。卒中梗阻侧组大鼠脑组织中Nrf 2蛋白表达高于假手术组(P<0.05),Nrf 2激动剂组大鼠脑组织中Nrf 2蛋白表达高于假手术组、卒中梗阻侧组(P<0.05)。正常组、假手术组及Nrf 2激动剂组大鼠脑组织中IFN、IL-6、Iba-1、GFAP蛋白表达比较差异均无统计学意义(P>0.05),卒中梗阻侧组与空白溶剂组大鼠脑组织中IFN、IL-6、Iba-1、GFAP蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05),正常组、假手术组及Nrf 2激动剂组大鼠脑组织中IFN、IL-6、Iba-1、GFAP蛋白表达低于卒中梗阻侧组、空白溶剂组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注可诱导中枢神经系统发生炎症反应,Nrf 2在脑缺血再灌注大鼠脑组织中表达上调,Nrf 2过表达可通过激活Nrf 2/ARE通路而抑制神经胶质细胞活化标志物的表达,降低炎症反应水平,改善脑组织缺血再灌注损伤。