人转录因子Slug过表达慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建Slug过表达的慢病毒载体,为探讨Slug在肿瘤复发转移中的影响提供前期基础。方法从人乳腺癌细胞MDA-MB-231中获得Slug基因片段,与AgeⅠ/Nhe I酶切后成线性化的GV367载体连接,采用PCR及DNA测序的方式鉴定阳性克隆。将构建的LV-Slug转染入293T细胞中,采用荧光法检测LV-Slug的病毒滴度。结果经测序证实Slug基因已成功插入到病毒载体中,其病毒滴度为5×10~8 TU/mL。结论成功构建了携带Slug过表达的慢病毒载体,为探讨Slug在肿瘤转移复发中的影响提供基础。

PTEN协同槲皮素抗胃癌细胞增殖、凋亡和上皮-间质转化进程的机制研究

探讨槲皮素(quercetin,Que)与人第10号染色体缺失的磷酸酶基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)PTEN在胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的机制研究。通过单独使用不同浓度槲皮素或PTEN转染处理胃癌SGC-7901细胞,分别采用CCK-8法、流式细胞凋亡法及Western blot法检测两者单独使用对胃癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化相关蛋白表达的影响。再通过两者联合处理胃癌细胞,采用RT-PCR法检测基因表达,Western blot法检测蛋白表达,细胞划痕和Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,免疫荧光法检测EMT靶蛋白的表达。槲皮素单独处理细胞时,随着药物浓度的增加,剂量依赖地减弱SGC-7901细胞活性(P<0.01),诱导细胞凋亡,并促进PTEN蛋白表达(P<0.01),改变抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达(P<0.01),反转E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)以及转录因子(Slug)的表达(P<0.01)。PTEN单独转染细胞增加E-cadherin和Bax的基因和蛋白表达(P<0.05),降低Bcl-2、Vimentin以及转录因子Slug的表达(P<0.01),抑制细胞迁移;两者联合作用后,PTEN增强槲皮素对SGC-7901细胞抗癌能力,进一步抑制肿瘤迁移。PTEN增强槲皮素对胃癌细胞SGC-7901的抗癌作用,这种作用可能是通过共同抑制细胞核转录因子Slug实现的。