甘薯、番茄、拟南芥中SPL转录因子的生物信息学分析

对甘薯、番茄、拟南芥中63个SPL基因家族进行了系统进化树分析、保守蛋白基序(Motif)分析,筛选归纳出同源性较高的2个分支的12个SPL基因进行理化性质分析、核定位预测等,氨基酸序列比对结果表明这些基因的功能可能较为保守。通过对番茄中的SPL基因Solyc05g015510.2、Solyc10g078700.1进行表达量分析,发现这2个基因可能参与调控果实成熟衰老进程。另外,通过对非生物胁迫下的转录水平进行分析得知,拟南芥中的AT5G43270可能参与对盐胁迫、热胁迫条件下的响应,AT1G27360、AT1G27370可能参与热胁迫条件下的响应,AT2G42200可能参与冷胁迫条件下的响应,而AT3G57920在非生物胁迫条件下表达量没有特别明显的变化,表明AT3G57920可能不参与非生物胁迫下的响应。

转录因子Sp1在肝癌细胞VEGF表达调控中的作用

目的:研究转录因子Sp1在肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)转录调控中的作用。方法:构建VEGF启动子双报告基因质粒系统,脂质体转染至肝癌细胞株MHCC97H中,分析VEGF表达调控的主要作用区域及转录因子Sp1对VEGF转录活性的影响;采用凝胶电泳迁移率变动分析转录因子Sp1与VEGF启动子的结合活性;采用RNA干扰技术进一步分析转录因子Sp1对VEGF的转录调控作用。结果:应用VEGF全长启动子及5端缺失突变体报告基因分析发现VEGF启动子上88～-61区域是VEGF转录的最主要的调控区域;用点突变体报告基因技术发现此区域上的转录因子Sp1结合位点突变后VEGF表达明显下调;凝胶电泳迁移率变动分析证实Sp1可特异性结合于VEGF启动子上;Sp1特异性siRNA下调转录因子Sp1表达后发现VEGF的表达也随之明显下调。结论:转录因子Sp1与VEGF启动子特异性结合是VEGF转录调控最重要的机制,并进一步调控肝癌血管生成及转移复发,深入分析转录因子Sp1在肝癌中的表达将有利于探讨肝癌血管生成及转移复发机理。

OsSPL转录因子调控水稻生长发育的研究进展

[目的]总结OsSPL转录因子在调控水稻生长发育、组织构建、产量以及逆境响应等方面的研究成果,为水稻分子育种改良提供基因功能信息。[方法]通过文献检索,综述了OsSPL转录因子的结构特点及其在水稻中的表达调控和生物学功能等研究进展。[结果]目前已发现19个水稻OsSPL转录因子,其氨基酸序列含有SBP结构域,大部分OsSPL转录因子基因表达在翻译水平上受OsmiRNA调节。OsSPL转录因子影响水稻根系发育、株型结构、叶片器官形成、表皮毛分化、开花期及产量等;还参与水稻对生物与非生物逆境胁迫的响应代谢过程,进而调控植株对逆境胁迫的抗性。[结论]OsSPL转录因子参与调控水稻的根、叶、花、穗、籽粒等多组织的发育过程,并与植株的逆境响应代谢相关。目前OsSPL转录因子的部分生物学功能仍未被系统研究。

Spl在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨核转录因子Spl在膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中的表达特征和临床意义。方法用免疫组织化学PV-6000法,检测63例BTCC、21例膀胱乳头状瘤和13例正常黏膜组织中Spl的表达。结果 Spl在膀胱癌组织中的阳性表达率为68.3%(43/63),明显高于其在膀胱乳头状瘤(5/21,23.8%)和正常膀胱黏膜(1/13,7.7%)的阳性表达率(P<0.05),且Spl蛋白的表达与BTCC的病理分级和浸润深度密切相关。结论转录因子Spl在膀胱癌的发生、发展中起重要作用,检测其表达对于评估BTCC的预后有较高价值。

RNA干扰沉默Spl基因抑制前列腺癌细胞中CD59的表达

目的采用RNA干扰技术沉默前列腺癌PC-3细胞转录因子Sp1的表达,观察其对CD59的表达影响。方法构建靶向人Spl基因的干扰载体(pSUPER-siSp1),脂质体介导转染PC-3细胞,荧光倒置显微镜下观察转染效率,RT-PCR及Western-blotting检测其对Sp1及CD59蛋白质水平的影响,流式细胞仪检测CD59的表达,MTT法检测CD59抗补体活性的变化。结果成功构建针对Spl的干扰载体,转染后能够有效抑制前列腺癌PC-3细胞中Sp1与CD59蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT实验显示,下调Spl表达可显著抑制CD59抗补体活性。结论 Spl基因沉默能够抑制人前列腺癌CD59的表达,为前列腺癌基因治疗提供新的思路和手段。

肾透明细胞癌中Spl的表达特征及意义

目的:探讨核转录因子Spl在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)组织中的表达特征和临床意义。方法:用免疫组织化学PV-6000法,检测59例RCCC和11例正常肾脏组织中Spl的表达,分析其与肿瘤分级和分期的关系。结果:Spl在RCCC组织中阳性表达率为71.2%(42/59),明显高于正常肾组织的18.2%(2/11)。Sp1蛋白阳性表达与RCCC的组织学分级和临床分期正相关。结论:转录因子Spl可作为一个新的与RCCC发生、发展密切相关的生物学标记物。

转录因子Sp1和血管内皮生长因子在进展期肾癌中的表达及临床意义

目的探讨核转录因子sp1与血管内皮生长因子（VEGF）在进展期肾细胞癌（RCC）组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学PV-9000法检测Spl和VEGF蛋白在73例进展期RCC组织中的表达。结果spl和VEGF在进展期RCC组织中均高表达，其阳性率分别为75．3％（55／73）和83．6％（61／73），两者之间呈正相关。结论Sp1和VEGF在RCC的恶性进展中发挥重要作用，联合检测两者的表达对评估RCC预后有较高价值。

普罗布考对高糖培养人视网膜Müller细胞特化蛋白1/细胞骨架相关蛋白/核因子E2相关因子2/半胱氨酸连接酶催化亚基表达的影响

目的观察普罗布考对高糖环境下人视网膜Müller细胞中特化蛋白1(SP1)/细胞骨架相关蛋白(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)表达的影响;初步探讨普罗布考的抗氧化作用。方法体外培养的人Müller细胞分为正常糖组(5.5 mmol/L)、高糖组(25.0 mmol/L)、正常糖+普罗布考组、高糖+普罗布考组;后两组中加入100 μmol/L普罗布考。免疫荧光染色法鉴定Müller细胞;免疫荧光染色法和实时RP-PCR(qRT-PCR)检测各组Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白、mRNA的表达。两组间数据比较采用独立样本t检验。结果体外培养的人Müller细胞谷氨酰胺合成酶染色阳性率>95%。免疫荧光染色结果显示,Müller细胞中SP1、Keap1、Nrf2、GCLC蛋白均呈阳性表达。qRT-PCR结果显示,与正常糖组比较,高糖组Müller细胞中SP1(t=28.30,P<0.000)、Keap1(t=5.369,P=0.006)、Nrf2(t=10.59,P=0.001)mRNA表达显著上调,GCLC显著下调(t=4.633,P=0.010),差异均有统计学意义。与高糖组比较,高糖+普罗布考组Müller细胞中SP1(t=12.60,P=0.000)、Keap1(t=4.076,P=0.015)mRNA表达显著下调,Nrf2(t=12.90,P=0.000)、GCLC(t=15.96,P<0.000)mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义。结论普罗布考通过抑制高糖诱导Müller细胞中SP1、Keap1的表达,上调Müller细胞中Nrf2、GCLC的表达,发挥抗氧化作用。