细胞功能调控的重要转录因子TFEB

转录因子TFEB(transcription factor EB)属于亮氨酸拉链bHLH-LZ(basic-helix-loop-helix leucine-zipper)类转录因子中的MiTF/TFE(microphthalmia-transcription factor E)家族成员,参与调控许多重要的细胞生理过程,例如胎盘血管新生、肾癌的发生等。最近研究表明,TFEB能通过调控细胞自噬和溶酶体相关的基因表达而调控细胞自噬以及溶酶体功能。因此,对于TFEB的生物学功能及其相关调控机制的研究,将为进一步阐释其生理病理发生过程及相关疾病的治疗提供重要的线索及理论依据。

葛根通过转录因子EB促进溶酶体生物发生抵抗病毒感染

目的研究葛根Pueraria lobata水提物的体内外抗病毒作用,基于溶酶体生物发生探究其抗病毒作用的细胞学机制。方法CCK-8检测葛根水提物对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响。利用表达绿色荧光蛋白的水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus expressing green fluorescent protein,VSV-GFP)感染A549细胞,荧光显微镜和流式细胞术检测葛根水提物对GFP阳性细胞比例的影响;Western blotting检测葛根水提物对VSV病毒G蛋白表达的影响;qRT-PCR检测葛根水提物对甲型流感病毒(influenza A virus,H1N1)、脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)、单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)病毒复制的影响。葛根水提物(0.8、1.6 g/kg)治疗H1N1病毒滴鼻感染小鼠,观察记录其对小鼠的生存曲线、体质量变化和肺指数的影响,利用小动物CT、肺组织苏木素-伊红(HE)染色观察药物治疗对肺组织病理变化的影响;qRT-PCR检测肺组织病毒载量、白细胞介素-6(interleukin-6,Il6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,Tnfα)的基因表达。葛根水提物处理MEF胚胎成纤维细胞并进行转录组测序分析,qRT-PCR检测溶酶体相关基因表达。流式细胞术检测葛根水提物在转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)敲除的鼠永生化骨髓源性巨噬细胞(Tfeb-/-iBMDM)中对GFP阳性细胞比例的影响。结果葛根水提物显著抑制细胞内VSV-GFP病毒复制和VSV病毒G蛋白表达(P<0.001),降低H1N1、EMCV和HSV-1病毒复制(P<0.001)。葛根水提物能够提升H1N1感染小鼠的存活率,降低肺部病毒载量,改善小鼠肺部病变情况。生物信息学分析表明葛根水提物上调溶酶体相关基因表达,并证明葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生抵抗VSV病毒感染(P<0.001)。结论葛根水提物通过TFEB促进溶酶体生物发生,从而在体内外抑制病毒感染。

重组质粒pcDNA3.1(+)-TFEB-HA的构建、表达及鉴定

本文构建了pcDNA3.1(+)-TFEB-HA重组质粒,并转染了HeLa细胞进行表达。经Western Blot检测,转染pcDNA3.1(+)-TFEB-HA重组质粒的HeLa细胞成功表达了TFEB蛋白,为研究TFEB对细胞生长的影响提供了有利工具。