miRNA-200c/SOX2轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用研究

目的:探讨miRNA-200c/转录因子Y框蛋白2(SOX2)轴在实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用。方法:将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、miRNA-200c组和联合组。模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠分别给予慢病毒空载体、miRNA-200c慢病毒过表达载体及miRNA-200c和SOX2慢病毒过表达载体。以牙龈卟啉单胞菌涂抹模型组、miRNA-200c组和联合组小鼠口腔建立慢性牙周炎模型。检测各组牙周组织miRNA-200c和SOX2表达水平、牙龈指数、釉牙骨质界(CEJ)到牙槽嵴顶(ABC)距离。HE染色分析小鼠牙周组织病理形态学变化。qPCR检测小鼠牙周组织中miRNA-200c和SOX2表达水平。Western blotting检测小鼠牙周组织中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体因子(RANK)蛋白表达水平。结果:与空白组相比,模型组小鼠牙周组织中miRNA-200c表达水平降低(P<0.05),SOX2表达水平升高(P<0.05);miRNA-200c组牙周组织中miRNA-200c表达水平高于空白组和模型组,SOX2表达水平低于模型组(P<0.05);联合组牙周组织中miRNA-200c及SOX2表达水平均高于空白组和模型组(P<0.05)。模型组、miRNA-200c组及联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组牙龈指数及CEJ至ABC距离均低于模型组(P<0.05),联合组牙龈指数及CEJ至ABC距离均高于miRNA-200c组(P<0.05)。Western blotting结果显示,模型组、miRNA-200c组及联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于空白组(P<0.05),miRNA-200c组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均低于模型组(P<0.05),联合组RANKL、RANK表达水平及RANK/OPG比值均高于miRNA-200c组(P<0.05)。HE染色结果显示,模型组小鼠牙周组织出现明显大量炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂,而miRNA-200c组小鼠这些症状相比于模型组得到显著缓解,但是联合组小鼠相比于miRNA-200c组小鼠也出现了显著的炎症细胞浸润,胶原纤维排列紊乱、变性、断裂现象。荧光素酶活性检测显示,miRNA-200c mimic能明显降低SOX2野生型荧光素酶活性(P<0.01),而对SOX2突变型荧光素酶活性影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miRNA-200c能改善小鼠牙周炎炎症反应及牙槽骨吸收情况,可能与SOX2调控的RANKL/RANK/OPG轴有关。

SOX2影响PD-L1表达参与乳腺癌细胞免疫逃逸的机制探讨

目的:探讨转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)基因通过诱导程序性死亡因子配体1(PD-L1)表达,促进乳腺癌细胞免疫逃逸的作用机制。方法:qRT-PCR和Western blot法检测人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、SK-BR-3和正常乳腺上皮细胞系MCF10A中SOX2、PD-L1、T细胞免疫球蛋白及粘蛋白结构域分子3(TIM3)和核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)的mRNA表达量及对应蛋白表达量。分别构建SOX2敲减质粒NC和si-SOX2并转染MDA-MB-231,与细胞因子诱导的杀伤细胞构建共培养体系,连续培养48h,MTT法检测细胞增殖率,TUNEL法检测细胞凋亡率,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测T细胞杀伤率,ELISA检测T细胞活化标志物IL-2和IFN-γ,qRT-PCR检测T细胞耗竭标志物PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量。结果:与MCF10A相比,MDA-MB-231与SK-BR-3中SOX2、PD-L1、TIM3、NR4A1的m RNA表达量及对应蛋白表达量均显著升高(P<0.05)。与空白组和NC组相比,si-SOX2组SOX2 mRNA和PD-L1蛋白表达量明显下降,细胞增殖率显著下降,细胞凋亡率增加,T细胞杀伤率增加,IL-2和IFN-γ水平升高,PD-1、TIM3和NR4A1 mRNA表达量降低(P<0.05)。结论:SOX2基因可能通过诱导PD-L1高表达,进而促使乳腺癌细胞免疫逃逸的能力增强,沉默SOX2表达可以增强T细胞杀伤力,抑制肿瘤增殖,SOX2基因有望成为乳腺癌干预的重要分子靶点。