线粒体转录延伸因子在人脑胶质瘤组织中的表达及预后意义

目的:研究TEFM基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况,并探讨其与脑胶质瘤患者临床病理特征及预后的相关性。方法:采集我校附属医院2019年01月至2021年06月经手术切除后病理确认的68例脑胶质瘤组织及35例非肿瘤脑组织。采用qRT-PCR、Western blot法和免疫组化SP法检测脑胶质瘤组织和非肿瘤脑组织中TEFM mRNA和蛋白的表达水平。分析TEFM基因mRNA表达量与脑胶质瘤患者临床病理参数的相关性。根据随访资料采用Kaplan-Meier生存曲线分析TEFM mRNA表达量和患者预后的相关性。采用COX回归模型分析患者预后的独立风险因素。结果:免疫组织化学结果显示,TEFM蛋白主要表达于细胞质,且在不同级别脑胶质瘤组织中的阳性表达率(91.18%)明显高于非肿瘤脑组织中的阳性表达率(37.14%),组间差异极显著(P<0.01)。Western blot和qRT-PCR结果显示,TEFM蛋白和mRNA在脑胶质瘤组织中均显著增高(P<0.01)。脑胶质瘤患者TEFM基因mRNA表达量与患者年龄、病理分级、病理类型、偏侧性及幕上位置均显著相关(P<0.05);Kaplan-Meier生存分析显示,TEFM mRNA表达水平显著影响脑胶质瘤患者的总生存期(overall survival,OS)和无病生存期(disease-free survival,DFS),TEFM高表达的患者OS和DFS显著缩短(Log-rank P<0.05);根据COX多因素回归模型分析表明,年龄、病理分级、病理类型和异柠檬酸脱氢酶(IDH1)突变情况是对脑胶质瘤患者预后造成影响的独立风险因素(P<0.05)。结论:与非肿瘤脑组织相比,TEFM蛋白和mRNA在脑胶质瘤组织中表达均明显增高,且TEFM高表达的患者OS和DFS明显缩短。

小檗碱对2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b表达的影响(英文)

目的观察2型糖尿病大鼠视网膜正性转录延伸因子b(P-TEFb)蛋白的表达及小檗碱对其的影响。方法链脲佐菌素(35mg·kg^(-1),ip)诱导糖尿病大鼠模型,2 wk后予高糖高脂饲料喂养共14 wk。wk 17起,大鼠共分为7组,每组10只:A组(不予链脲佐菌素且用标准饲料喂养,不予药物治疗),B组(不予药物治疗),C、D、E组(分别予小檗碱75、150、300 mg·kg^(-1)·d^(-1)),F组(予非诺贝特100 mg·kg^(-1)·d^(-1))和G组(予罗格列酮4mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药16 wk。处死大鼠,采用HE染色检查视网膜结构变化,免疫组化检测P-TEFb的表达,P-TEFb由细胞周期蛋白依赖激酶9(CDK9)和细胞周期蛋白T1 (cyclin T1)组成。结果正常对照组大鼠的视网膜厚度大于其他各组,经中、高剂量小檗碱(150、300 mg·kg^(-1))和罗格列酮治疗能增加糖尿病视网膜的厚度,但视网膜的结构在各组间无差别。中、高剂量小檗碱和罗格列酮都能明显促进糖尿病大鼠视网膜中CDK9和cyclin T1蛋白表达(P<0.01),但低剂量小檗碱(75mg·kg^(-1))和非诺贝特对糖尿病视网膜中CDK9和cyclin T1的表达没有影响(P>0.05)。结论小檗碱调控视网膜P-TEFb(CDK9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善糖尿病视网膜病的机制之一。

肝细胞性肝癌中线粒体转录延伸因子的表达及意义

目的探讨线粒体转录延伸因子(mitochondrial transcription elongation factor,TEFM)在肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达和临床意义。方法采用Western blot法检测人正常肝细胞(THLE-2)和6种HCC细胞中TEFM蛋白的表达差异。对HCC组织芯片进行免疫组化检测,在70例HCC组织和对应的癌旁组织中检测TEFM表达量和细胞阳性率的差异,分析TEFM表达与临床病理学特征及预后的关系。结果TEFM蛋白在6种HCC细胞与人正常肝细胞(THLE-2)相比,其TEFM蛋白均显著上调[(1.803±0.275)倍](P<0.05);HCC组与对应的癌旁组织相比,TEFM蛋白表达量增高,其细胞阳性率也增高(P<0.05)。TEFM蛋白在HCC组织中的表达量与患者AFP含量有相关性(P=0.002),而与患者年龄、性别、肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度、HBV感染、肝硬化、血管侵犯、肿瘤数量、肿瘤大小、肿瘤包膜完整性和肿瘤复发无相关性(P均>0.05)。TEFM蛋白表达量与HCC患者总生存期(overall survival,OS)和无瘤生存期(disease-free survival,DFS)无相关性。结论TEFM蛋白在HCC细胞和组织中的表达增高,且与HCC患者的血清AFP含量呈正相关。TEFM蛋白表达量与HCC患者预后无关。

转录延伸因子A3对晚期非小细胞肺癌患者免疫治疗效果的预测价值

目的探讨转录延伸因子A3(TCEA3)对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫治疗效果的预测价值。方法选取2018年12月至2021年12月三明市第二医院收治的42例肿瘤免疫治疗的晚期NSCLC患者作为试验组,根据TCEA3表达中位值将试验组分为TCEA3高表达组(n=21)和TCEA3低表达组(n=21),另外同期选择42名来自门诊健康体检者作为对照组。评估高、低表达组患者的缓解率(RR)、无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。结果试验组的TCEA3表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);试验组与对照组的TCEA3的表达水平与临床病理特征的分析比较,肿瘤脑转移是TCEA3表达水平的影响因素(P<0.05);试验组总体RR为38%(95%CI:25%~53%),16例患者出现RR(14例疾病进展、2例完全缓解)和9例疾病稳定。在45%(19/42)的患者中观察到免疫相关不良事件,最常见的是肺炎(8.19%)、甲状腺功能障碍(5.12%)、虚弱(3.7%)。在试验组中,TCEA3高表达组患者的ORR高于TCEA3低表达组患者(76.19%vs.28.57%),差异有统计学意义(P<0.01);TCEA3高表达组患者的中位PFS也长于TCEA3低表达组患者[(11.83 vs.4.56)个月],差异有统计学意义(P<0.001);TCEA3高表达组患者的总OS也长于TCEA3低表达组[(38.54 vs.23.83)个月],差异有统计学意义(P<0.001)。结论TCEA3可能与NSCLC的发生以及脑转移有关;晚期接受肿瘤免疫治疗的NSCLC患者,TCEA3高表达都预示着较好的临床预后;血浆Lnc RNA TCEA3可作为预测晚期NSCLC免疫治疗效果的生物标志物。

线粒体转录延伸因子:调控线粒体DNA复制与转录转换的分子开关

线粒体转录延伸因子(TEFM)最早是基于其氨基酸序列与真核细胞核转录因子Spt6具有同源性而被鉴定,其包括两个串联重复的螺旋-发夹-螺旋结构域(Helix-Hairpin-Helix,(HhH)2)和一个RNase H折叠。TEFM二聚化对于TEFM与线粒体RNA聚合酶的结合至关重要。近年的研究发现,TEFM是调控线粒体DNA(mtDNA)复制与转录相互转换的关键分子开关,参与人类线粒体基因转录延伸过程及其表达调控。本文首先介绍了TEFM蛋白的序列同源性、蛋白质结构特征,为后续功能研究奠定结构基础。其次,阐明了TEFM在线粒体转录延伸过程中的作用和抗转录终止功能,以及线粒体转录延伸复合体的功能。TEFM避免了mtDNA转录和复制过程发生冲突,使线粒体转录延伸复合体具有更高的稳定性和持续合成能力,体内和体外都能增强mtDNA转录延伸活性,在mtDNA的复制和转录调控中发挥重要作用。最后,阐述了TEFM参与线粒体RNA加工,以及在线粒体能量代谢和线粒体相关疾病的发生发展中的作用。TEFM的缺失严重损害氧化呼吸链,证明mtDNA转录延伸对于维持线粒体氧化磷酸化功能是必需的。1型神经纤维瘤、胰腺癌、脑胶质瘤等疾病的发生机制可能与TEFM基因缺失或表达异常有关,因此,本文进一步探讨和展望了TEFM对人类线粒体相关疾病研究的应用前景。

数据挖掘分析线粒体转录延伸因子在胰腺癌中的表达及意义

线粒体转录延伸因子(mitochondrial transcription elongation factor, TEFM)在线粒体基因转录调控中发挥重要作用,但其在胰腺癌中的表达及意义未见系统研究。本研究利用各种肿瘤生物信息学数据库进行数据挖掘分析TEFM基因在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达情况,并进一步探讨TEFM基因对胰腺癌患者预后的影响。利用Oncomine数据库分析TEFM基因在正常胰腺组织和胰腺癌组织中m RNA水平的表达变化。通过基因表达谱动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis, GEPIA)人体正常组织和其相应的肿瘤组织中TEFM基因的表达差异。经MethHC分析胰腺癌和正常胰腺组织中TEFM基因DNA启动子区甲基化水平的差异。利用OncoLnc对TEFM基因的表达水平与胰腺癌患者生存率作Kaplan-Meier生存分析和Log-rank检验。在String-DB数据库中探索TEFM基因在线粒体基因转录调控中相互作用的基因。结果显示:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TEFM基因在m RNA水平呈高表达,且TEFM基因DNA启动子区甲基化水平升高。TEFM基因的表达水平与胰腺癌患者的总体生存时间无显著相关性。线粒体RNA聚合酶(mitochondrial RNA polymerase, POLRMT)与TEFM蛋白有明显的相互作用。大样本数据挖掘能迅速地获取胰腺癌组织中TEFM基因表达的相关信息,为深入研究TEFM基因在胰腺癌发生发展中的作用机制奠定理论基础。

转录延伸因子A样3因子对食管鳞癌TE-1和KYSE-30细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的探索转录延伸因子A样3因子(TCEAL3)对食管鳞癌TE-1和KYSE-30细胞系增殖、迁移、凋亡的影响。方法将食管鳞癌细胞TE-1和KYSE-30细胞株分成TE-1对照组和KYSE-30对照组(均转染空载慢病毒)、TE-1实验组和KYSE-30实验组(均转染TCEAL3过表达慢病毒)。以蛋白质印迹法检测TCEAL3、高迁移率族蛋白A1(HMGA1)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达水平;以CCK8实验检测细胞的增殖情况;以Transwell迁移实验检测细胞迁移情况;以流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TE-1对照组和TE-1实验组、KYSE-30对照组和KYSE-30实验组的TCEAL3蛋白相对表达水平分别为0.31±0.02和0.56±0.02,0.25±0.02和0.49±0.05;细胞增殖率分别为(1721.01±21.16)%和(1229.69±59.17)%,(1715.27±89.70)%和(781.05±136.75)%;凋亡率分别为(3.99±1.60)%和(32.20±2.96)%,(5.15±0.20)%和(32.20±0.53)%;迁移细胞数分别为(189.00±6.67)和(120.00±28.40)个,(189.00±30.20)和(111.00±27.60)个;HMGA1蛋白表达水平分别为0.79±0.11和0.37±0.06,0.67±0.03和0.33±0.03;MMP2蛋白表达水平分别为0.55±0.02和0.32±0.04,0.61±0.02和0.37±0.01。上述指标,TE-1实验组与TE-1对照组比较,KYSE-30实验组与KYSE-30对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论TCEAL3可能通过抑制HMGA1的表达,从而下调MMP2的表达来抑制食管鳞癌细胞的增殖能力和迁移运动能力,并促进凋亡。

人线粒体转录延伸因子蛋白结构与功能的生物信息学分析

[目的]基于生物信息学方法分析人线粒体转录延伸因子TEFM蛋白的结构和功能。[方法]检索Uniprot数据库中人线粒体转录终止因子TEFM蛋白的氨基酸序列,利用生物信息学方法对人TEFM的理化性质、物种间的蛋白质同源性、跨膜区、亲水性/疏水性、亚细胞定位、蛋白质二级结构、保守结构域、蛋白质三级结构、蛋白质相互作用进行预测与分析。[结果]人TEFM全长360个氨基酸,理论等电点9.39,属于TEFM蛋白超家族,不含跨膜区,属于亲水蛋白;人TEFM含有一个保守的螺旋-发夹-螺旋(HHH_3)结构域,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,三维建模空间结构与二级结构预测结果相符,进一步分析建模结果可靠。与人TEFM相互作用的蛋白质均为线粒体DNA转录因子或线粒体RNA聚合酶。[结论]人TEFM具有线粒体转录延伸因子蛋白超家族的典型结构,生物信息学分析结果对深入研究人TEFM在线粒体基因转录调控中的作用具有一定的理论指导意义。

HIV-1转录延伸调控潜伏感染的分子机制

人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)作为获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的主要致病病原体,目前尚无有效治愈方法。现有的抗逆转录病毒疗法(ART)虽然可以有效抑制病毒复制,但却无法清除潜伏感染的细胞。因此,当前面临的主要挑战是找到安全、有效的方法清除HIV-1潜伏储存库。HIV-1潜伏维持和再激活分子机制的研究已经揭示了HIV-1转录延伸过程在其中所起的核心作用。本综述主要概述HIV-1转录延伸的具体分子过程以及对潜伏感染的调控作用,为进一步探究HIV-1如何实现潜伏和活跃转录之间的平衡提供理论支持,为实现AIDS治愈提供新方向。

蓖麻延伸因子基因的克隆与表达分析

为探讨蓖麻延伸因子基因(RcEF-1α)作为参考基因进行相关研究的可行性,以蓖麻雌性花为试验材料,扩增RcEF-1α(GenBank登录号:XM_002518027. 3)的编码序列(CDS),并将其亚克隆至原核表达载体pET32a(+)构建成重组载体p ET32a(+)-RcEF-1α;将p ET32a(+)-RcEF-1α转化至大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3)中进行优化表达,表达蛋白经纯化后进行Western blot验证。结果表明,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)可诱导一个分子量约66 kD的特异蛋白;采用纯化的表达蛋白免疫新西兰白兔制备抗RcEF-1α的多克隆抗血清,用多克隆抗血清进行Western blot验证,发现多克隆抗血清具有针对RcEF-1α的特异性,经ELISA检测,其效价为1∶51 200;以抗血清为一抗,通过Western blot分析RcEF-1α在时空条件一致且正常生长的根、茎、叶、雌花、雄花和果实中的表达量,结果显示,蓖麻各组织中RcEF-1α蛋白质的含量存在显著差异,其中雌花和雄花中的含量显著高于其他组织。RT-qPCR分析结果表明,蓖麻各组织中RcEF-1αmRNA差异不显著。本研究结果为蓖麻功能基因表达分析参考基因的筛选提供了一定的理论依据。

蛋白激酶C对转录延伸正调节因子b(P-TEFb)的影响

本文探讨了PKC的4种亚型α、βⅡ、γ和λ对P-TEFb各蛋白组分的表达影响.成功构建了带有HA标签的pcDNA3.1-PKC的各亚型真核表达载体,并转染HEK293细胞株,用Western bolt检测其表达情况,发现这四种PKC亚型在细胞中表达良好。将PKCβⅡ或者PKCλ转染进入HEK293细胞株,发现其可使CDK9和Cyclin T蛋白表达量升高;但在细胞中高表达PKCα和PKCγ,对P-TEFb各组分表达量没有影响.表明PKC可通过提高P-TEFb的组分表达量,从而上调某些基因的表达.

转录延伸样因子7对低分化人胃癌细胞株BGC823侵袭、迁移能力的影响及机制

目的探讨转录延伸样因子7（TCEAL7）对低分化人胃癌细胞株BGC823侵袭、迁移的影响及其机制。 方法应用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot法检测TCELA7 mRNA和蛋白在BGC823和正常胃黏膜细胞株GES-1中的表达；构建TCEAL7真核表达载体GFP-TCEAL7并转染BGC823细胞48 h，检测转染效果；噻唑蓝（MTT）法检测GFP-TCEAL7转染对BGC823细胞活性的影响；划痕实验、Transwell小室实验检测细胞侵袭、迁移；应用Real-time PCR和Western blot法检测转染GFP-TCEAL7转染对BGC823细胞侵袭、迁移基因表达水平的影响。 结果Real-time PCR和Western blot法显示，BGC823的TCEAL7表达（mRNA：0.280±0.048，蛋白：0.181±0.038）明显低于GES-1（mRNA：0.474±0.062，蛋白：0.346±0.057；t＝－6.061，P＝0.000；t＝－5.900，P＝0.000）。GFP-TCEAL7转染后胃癌BGC823细胞TCEAL7的mRNA及蛋白表达（1.886±0.326、1.007±0.262）比对照组（0.302±0.053、0.172±0.030）显著上调（t＝11.748，P＝0.000；t＝7.756，P＝0.000）。MTT结果显示，转染了GFP-TCEAL7的BGC823细胞活性（0.672±0.083）比对照组（1.242±0.215）显著减弱（t＝－6.058，P＝0.000）。划痕实验、Transwell小室实验显示转染了GFP-TCEAL7的BGC823细胞迁移能力[转染组（53.945±9.952）%，对照组（81.017±7.208）%]和侵袭能力（转染组76.333±12.420，对照组121.167±11.771）均明显降低（t＝－5.396，P＝0.000；t＝－6.418，P＝0.000）。Real-time PCR和Western blot法显示转染GFP-TCEAL7的BGC823细胞基质金属蛋白酶（MMP）-7、MMP-9的mRNA和蛋白表达水平下降，组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP1）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达明显增高。 结论过表达TCEAL7可抑制BGC823细胞的侵袭、迁移。

小檗碱对糖尿病大鼠海马CA3区PPARs和P-TEFb表达的影响(英文)

目的:观察小檗碱对2型糖尿病海马CA3区损伤的保护作用及其该过程中过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)α/δ/γ和正性转录延伸因子b(P-TEFb)的作用。方法:腹腔注射35mg/kg链脲菌素加高糖高脂饲料喂养16周建立2型糖尿病大鼠模型,随后16周每天分别给予低中高剂量小檗碱75、150、300mg/kg、非诺贝特100mg/kg和罗格列酮4mg/kg,处死大鼠后用HE染色检查海马CA3区和免疫组化技术检测PPARα、δ、γ和Cdk9、cyclin T1的表达。结果:糖尿病大鼠海马CA3区的锥体细胞形状和排列变得不规则、数量减少,中高剂量小檗碱和罗格列酮能恢复受损伤的锥体细胞接近正常大鼠的水平。在海马CA3区几乎检测不到PPARγ蛋白的表达,中高剂量小檗碱和非诺贝特明显增加糖尿病大鼠中减少了的PPARα和PPARδ表达(P<0.01);中高剂量小檗碱和罗格列酮能明显使降低了的Cdk9和cyclinT1表达恢复至正常水平(P<0.01)。结论:小檗碱调控海马CA3区PPARα/δ和正性转录延伸因子b(Cdk9和cyclin T1)蛋白的表达可能是其改善海马锥体细胞损伤的机制之一。

RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化

目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。

基于TCGA数据集分析脑胶质瘤中TEFM基因mRNA的表达及意义

目的基于癌症基因组图谱(TCGA)数据集分析人脑胶质瘤中线粒体转录延伸因子(TEFM)基因mRNA的表达及其临床意义。方法基因表达谱动态分析(GEPIA)207例非肿瘤脑组织和518例脑胶质瘤组织中TEFM基因mRNA的表达差异。分析518例脑胶质瘤患者的TEFM基因mRNA表达量与临床病理参数和患者预后的相关性,探讨影响脑胶质瘤患者预后的因素。分析脑胶质瘤中TEFM基因与其他线粒体转录调控基因mRNA表达水平的相关性。结果与非肿瘤脑组织相比,人脑胶质瘤组织中TEFM基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。脑胶质瘤中TEFM基因mRNA表达量与患者年龄、WHO分级、病理类型、头痛史与幕上定位具有显著相关性(P<0.05); TEFM mRNA表达量与脑胶质瘤患者的总体生存率相关性显著(P<0.05)。脑胶质瘤患者年龄、WHO分级、病理类型与幕上定位是影响患者预后的独立因素(P<0.05)。脑胶质瘤中TEFM基因的表达水平与TFAM、TFB1M、TFB2M、MTERF1～4、NRF1基因的表达水平呈显著正相关性(均P<0.01,R=0.59、0.51、0.68、0.70、0.36、0.51、0.51、0.48),与POLRMT基因的表达水平呈显著负相关性(P<0.01,R=-0.18)。结论 TEFM基因mRNA表达量在人脑胶质瘤组织比非肿瘤脑组织中显著升高,且和病理特征具有良好相关性,其表达可能具有预测脑胶质瘤进展和预后的价值。

基于生物信息学分析TCEB1在肝癌中的表达及意义

为探讨转录延伸因子B1(transcription elongation factor B subunit 1,TCEB1)基因在肝癌中的表达和临床意义,利用GEPIA、UALCAN分析TCEB1在肝癌中的表达以及与患者临床病理特征和预后的关系;采用cBioPortal分析肝癌中TCEB1基因的改变情况;利用LinkedOmics分析肝癌中TCEB1的相关基因,并通过Metascape对TCEB1相关基因进行GO和KEGG通路分析;最后通过GeneMANIA构建TCEB1相互作用蛋白质网络。GEPIA和UALCAN的分析结果显示,TCEB1在肝癌组织中显著高表达(P<0.05),且表达水平越高,患者肿瘤分级和预后越差(P<0.05)。cBioPortal数据库检测结果显示,5%(52/1136)的肝癌患者的肝癌样本发生TCEB1基因改变,且基因拷贝数扩增与TCEB1 m RNA表达呈正相关,发生基因改变的患者预后显著较差(P=0.0129)。GO分析结果提示,TCEB1及其相关基因的分子功能主要与转录因子结合、泛素样蛋白转移酶活性、钙黏着蛋白的结合等有关。GeneMANIA分析提示,TCEB1与TCEB2、VHL、CUL2等蛋白质相互作用。本研究表明,TCEB1可作为肝癌患者预后的生物标志物和肝癌治疗新的潜在靶点。

TCEAL7通过负向调控ERK/c-FOS通路抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移

目的探讨转录延伸因子A样蛋白7(TCEAL7)对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响。方法利用GEPIA网站分析正常卵巢组织及卵巢癌组织中TCEAL7的表达差异。通过定量聚合酶链式反应(PCR)及免疫印迹(Western blot)实验检测人卵巢表层上皮细胞(HOSEpiC)及人卵巢癌细胞株CAOV-3、HO-8910、OVCAR-3及SKOV-3中TCEAL7的mRNA及蛋白表达。通过慢病毒转染过表达SKOV-3细胞中的TCEAL7,再利用噻唑蓝(MTT)实验检测在24、48、72及96 h SKOV-3细胞增殖的变化。利用划痕实验检测过表达TCEAL7后SKOV-3细胞迁移能力的变化。结果GEPIA网站分析结果显示,正常卵巢组织中TCEAL7的表达量显著高于卵巢癌组织。TCEAL7在4种卵巢癌细胞株中的mRNA及蛋白表达同样均显著低于HOSEpiC。本研究进一步发现过表达TCEAL7可显著抑制SKOV-3细胞的增殖及迁移,并可显著降低SKOV-3细胞中细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)及即刻早期基因(c-FOS)的磷酸化水平。结论本研究表明TCEAL7在卵巢癌中的表达下调,并可通过负向调控ERK/c-FOS通路抑制卵巢癌细胞的增殖及迁移,提示TCEAL7可能是卵巢癌的一个潜在治疗靶点。

人类真核翻译延长因子1A2在胰腺癌中抑制凋亡致癌机制研究

目的探讨人类真核翻译延长因子1A2(Homo sapiens eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)可能的致癌机制。方法培养人胰腺导管细胞腺癌细胞株BxPC-3;采用EEF1A2 siRNA干扰EEF1A2高表达的胰腺癌细胞株BxPC-3,另设空白对照组和阴性对照组。采用Western印迹检测各组EEF1A2蛋白水平变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率;分别应用流式细胞仪、透射电镜以及末端脱氧核苷酰转移酶原位标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。结果靶向EEF1A2的序列特异性的siRNA可以高效地抑制BxPC-3细胞EEF1A2基因表达。EEF1A2 siRNA干扰细胞24、48 h后,与阴性对照组相比,实验组细胞的细胞增殖被显著抑制(23.51%比37.67%和11.53%比48.89%,P<0.05),凋亡明显增加[(2.820±0.240)%比(8.505±2.454)%和(2.850±1.117)%比(4.075±1.068)%。P<0.05].TUNEL标记分析和透射电镜均发现典型凋亡特征。结论EEF1A2可能是胰腺癌的一个癌基因。EEF1A2可能通过抑制细胞凋亡途径促进胰腺癌细胞生长。

人线粒体DNA复制与转录调控

线粒体是真核细胞能量代谢、物质代谢和信号调控的核心细胞器。线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)的复制与转录调控对维持正常的线粒体功能至关重要。研究表明,线粒体转录延伸因子(mitochondrial transcription elongation factor,TEFM)和线粒体DNA单链结合蛋白(mitochondrial DNA single-strand binding protein,mtSSB)作为调控mtDNA复制与转录之间转换的分子开关,实现特异性调控mtDNA的维持和表达。本文就TEFM和mtSSB对mtDNA复制与转录的调控作简要总结,以期为相关疾病的致病机制和干预研究提供思路。

以p-TEFb为靶点抗HIV药物高通量筛选模型建立及在中药初筛中的应用

目的建立以正向转录延伸因子(p-TEFb)为靶点的抗HIV药物快速高通量筛选模型,并运用此模型筛选抗艾滋病中药。方法构建BD-Tat和AD-CyclinT1融合的酵母双杂交质粒,分别转入AH109和Y187,经接合实验获得二倍体菌株并对其进行毒性检测、自激活实验和报告基因表达检测,建立基于酵母双杂交的筛选模型。结果运用此系统筛选具有提高机体免疫功效的20种中药,获阳性中药2种,其抗HIV活性已被体外抑制HIV实验证实。结论该筛选模型可成功用于抗艾滋病化合物和中药的高效筛选,得到的2种阳性中药狗脊和黄连,值得进一步进行干扰HIV Tat和CyclinT1互作的有效成分分离研究。