日本血吸虫RNA聚合酶转录因子SⅢ-p15真核正反义表达载体的构建和鉴定

目的 构建日本血吸虫 RNA聚合酶 转录延长因子 S - p15真核正反义表达载体 ,为进一步鉴定该因子的生物学功能奠定基础。方法 采用表达序列标签法从日本血吸虫成虫 c DNA文库中获得了 1个 RNA聚合酶转录因子 (S - p15 )全长 c DNA序列 ,克隆及序列测定后 ,将该片段正向及反向插入到真核表达载体 pc DNA 3中。重组载体采用氨苄青霉素 L B培养基筛选、双酶切、PCR及测序鉴定。结果 经鉴定 ,S - p15 - pc DNA3真核正反义表达载体构建成功。结论 构建成功 S -p15 - pc DNA3真核正反义表达载体 ,为下一步鉴定其生物学功能奠定基础。

日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ-p15亚单位的分离和序列分析

目的 分离和鉴定日本血吸虫 (Schistosomajaponisum ,Sj)新基因。 方法 应用表达序列标签 (Expressedse quencetags ,ESTs)法随机筛选SjcDNA文库 ,通过PCR直接序列测定技术和同源性比较对阳性插入片段进行鉴定。采用亚克隆技术和生物信息学分析对日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录延长因子SⅢ -p15亚单位进行结构和功能的鉴定。结果 我们从SjcDNA文库中随机筛选到一个cDNA克隆 ,它含有一个 371个碱基组成的阅读框 ,编码 118个氨基酸 ,与哺乳动物等的RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位具有较高的同源性 ,且具有该因子所特有的氨基酸序列 ,表明我们已经获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位。 结论 获得了日本血吸虫RNA聚合酶Ⅱ转录因子SⅢ - p15亚单位的全长cDNA序列 。

羊驼transcription elongation factor B(S III)(Tceb2)cDNA的获取与序列分析

【研究目的】分离和鉴定羊驼transcription elongation factorB(S III)(Tceb2)基因,分析其序列特征,为今后研究其生物学功能奠定理论基础。【方法】用Southern Blotting法从羊驼皮肤cDNA文库中筛选Tceb2基因,通过BLAST等生物学相关软件对其进行结果分析。【结果】有6个阳性克隆,测序结果得知,序列片段大小大约为472bp,具有完整的开放阅读框,可编码119AA,分子量为13.2KDa。序列特征、结构和同源性分析表明:该序列预测为全长cDNA序列,该基因序列及其编码的氨基酸序列与大鼠和小鼠的troponinc2同源性可达100%。【结论】该基因是获得的羊驼全长Tceb2(GenBank DQ646397)(命名为AlpTceb2)。