利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡及转录活化因子6通路的影响

目的探究利拉鲁肽对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及对转录活化因子6(ATF6)通路的影响。方法按照利拉鲁肽浓度0、10、100、1000 nM培养人结肠癌HCT116细胞24、48、72 h,人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期、凋亡情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测作用后细胞中21KD蛋白(Bax)、半胱胺酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)及ATF6通路蛋白ATF6 p50、CCAAT⁃增强子结合蛋白(C/EBP)同源蛋白(CHOP)的表达水平。结果与对照组相比,利拉鲁肽各浓度间增殖率均有显著变化(P<0.05),同一时间点随着利拉鲁肽浓度的增加,0、10、100、1000 nM各组细胞的增殖率分别为(97.16±35.67)%、(81.69±33.37)%、(76.12±30.23)%、(70.65±28.89)%;(86.17±33.98)%、(58.68±26.77)%、(39.74±10.67)%、(30.17±9.24)%;(83.82±31.19)%、(38.77±10.19)%、(22.98±6.78)%、(16.63±6.12)%,均呈下降趋势。同一浓度随着时间推移,24、48、72 h各时间点细胞增殖率分别为(97.16±35.67)%、(86.17±33.98)%、(83.82±31.19)%;(81.69±33.37)%、(58.68±26.77)%、(38.77±10.19)%;(76.12±30.23)%、(39.74±10.67)%、(22.98±6.78)%;(70.65±28.89)%、(30.17±9.24)%、(16.63±6.12)%。不同浓度利拉鲁肽作用于HCT116细胞72 h后,10、100、1000 nM浓度的利拉鲁肽组的G2/M期细胞比例较0 nM组显著减少(P<0.05),且随着浓度的增加G2/M期细胞呈现下降趋势。0、10、100、1000 nM利拉鲁肽作用下细胞凋亡率分别为(9.06±0.98)%、(10.45±1.12)%、(13.89±1.54)%、(56.08±14.33)%,依次升高(P<0.05)。与0 nM组比较,10、100、1000 nM浓度的利拉鲁肽组细胞的凋亡率依次显著升高(P<0.05);与10 nM组比较,100、1000 nM组凋亡率依次显著升高(P<0.05);与100 nM组比较,1000 nM组凋亡率显著升高(P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示,10、100、1000 nM利拉鲁肽作用后细胞中Bax蛋白表达量分别为(0.69±0.13)、(0.93±0.24)、(1.19±0.25),显著升高(P<0.05),1000 nM组Bax蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),100、1000 nM两组间差异无统计学意义(P>0.05);Caspase⁃3蛋白表达量分别为(0.26±0.06)、(0.76±0.15)、(1.15±0.16)依次显著升高(P<0.05),100、1000 nM组Caspase⁃3蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),1000 nM组Caspase⁃3蛋白表达量显著高于100 nM组(P<0.05);ATF6 p50蛋白表达量分别为(0.69±0.11)、(0.96±0.09)、(1.20±0.08);CHOP蛋白表达量分别为(0.27±0.06)、(0.79±0.08)、(0.99±0.09),均显著升高(P<0.05),100、1000 nM组ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于10 nM组(P<0.05),1000 nM组ATF6 p50、CHOP蛋白表达量显著高于100 nM组(P<0.05)。结论利拉鲁肽对结肠癌HCT116细胞具有增殖抑制和凋亡促进作用,且呈时间⁃剂量的依赖性,其可能通过激活ATF6通路发挥促凋亡作用。

膀胱尿路上皮癌中信号转导和转录活化因子6和基质金属蛋白酶-2的表达

目的检测膀胱尿路上皮癌中信号转导和转录活化因子(STAT)6和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,分析其与临床病理特征的关系。方法 63例膀胱尿路上皮癌患者术后组织为观察组,21例膀胱正常黏膜组织为对照组。应用免疫组化(SP)方法检测STAT6和MMP-2的表达。结果观察组STAT6和MMP-2表达阳性率明显高于对照组。观察组STAT6和MMP-2表达均与肿瘤的浸润性、是否累犯膀胱周围组织相关,STAT6表达与肿瘤最大径和肿瘤级别相关。线性相关分析显示二者无相关性。结论膀胱尿路上皮癌中STAT6和MMP-2表达升高对肿瘤的迁移和进展有一定促进作用,STAT6对促进肿瘤形成和高级别转化可能有促进作用。STAT6和MMP-2之间无明显协同作用。

电针对帕金森病大鼠中脑黑质转录活化因子6和转录因子X盒结合蛋白1 mRNA表达的影响

目的:观察电针"风府""太冲"穴对鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)大鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、α-突触核蛋白(α-syn)、转录活化因子6(ATF6)和转录因子X盒结合蛋白1(XBP-1)表达的影响,探讨电针改善PD运动迟缓的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、模型组、电针组,每组12只。颈背部皮下注射鱼藤酮制备PD模型。电针组电针"风府"和双侧"太冲"穴,20 min/次,每日1次,连续治疗14 d。采用敞箱实验检测各组大鼠行为学改变,免疫组织化学法检测各组大鼠中脑黑质TH和α-syn的表达水平,实时荧光定量PCR法检测各组大鼠中脑黑质ATF6和XBP-1 mRNA的表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠自主运动的总路程、平均速度、运动总时间显著降低,休息总时间显著升高,中脑黑质TH阳性表达水平显著降低,α-syn阳性表达水平显著升高,ATF6和XBP-1 mRNA表达水平显著升高(均P<0. 01);与模型组比较,电针组大鼠自主运动的总路程、平均速度、运动总时间显著升高,休息总时间显著降低,中脑黑质TH阳性表达水平显著升高,α-syn阳性表达水平显著降低,ATF6和XBP-1 mRNA表达水平显著降低(均P<0. 01)。结论:电针能有效改善PD大鼠的运动迟缓,提高中脑黑质TH的阳性表达水平,该效应可能与电针降低中脑黑质异常聚集的α-syn,下调未折叠蛋白反应信号通路中ATF6、XBP-1的转录活性有关。

信号传导与转录活化因子6和程序性死亡配体-1在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨信号转导与转录活化因子6(STAT6)和程序性死亡配体-1(PD-L1)在乳腺癌中的表达及意义。方法采取2018年12月至2019年12月间玉溪市人民医院收治的手术治疗后诊断为非特殊型浸润性乳腺癌的166例患者乳腺癌组织为研究组,另选取40例癌旁组织标本为对照组,分析STAT6和PD-L1的表达,及在研究组不同分子分型乳腺癌中的表达。结果研究组患者STAT6和PD-L1阳性表达均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在研究组不同分子分型乳腺癌中,STAT6阳性表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);PD-L1阳性表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05),其中三阴型乳腺癌PD-L1阳性表达较高。研究组患者STAT6表达与组织学分级、临床分期及腋窝淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P<0.05);与年龄、绝经状态和肿瘤直径无关,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组患者PD-L1表达与组织学分级和临床分期有关,差异有统计学意义(P<0.05);与年龄、绝经状态、肿瘤直径和腋窝淋巴结转移无关,差异无统计学意义(P>0.05)。非特殊型浸润性乳腺癌细胞STAT6与PDL1表达具有正相关性(r=6.41,P<0.05)。结论STAT6的阳性表达在不同分子分型乳腺癌中无差异,与组织学分级、临床分期及腋窝淋巴结转移相关;PD-L1的阳性表达在三阴型乳腺癌中较高,与组织学分级和临床分期相关;非特殊型浸润性乳腺癌细胞STAT6与PD-L1表达呈正相关。

ATF6通过Hippo-YAP信号通路促进前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨转录活化因子6 (activating transcription factor 6, ATF6)对前列腺癌PC3细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集前列腺癌组织标本和前列腺增生组织标本,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测ATF6的mRNA和蛋白质水平。通过shRNA慢病毒干扰载体感染PC3细胞,敲降ATF6表达水平。CCK8和EdU实验检测PC3细胞增殖能力,划痕实验和Transwell侵袭实验检测PC3细胞迁移和侵袭能力。采用裸鼠异种移植模型评估ATF6在体内对肿瘤增殖的影响。使用JASPAR数据库预测和荧光素酶报告基因评估Yes相关蛋白(YAP)和ATF6之间的关联。qRT-PCR、免疫荧光检测YAP的mRNA和蛋白质水平。qRT-PCR检测YAP的两个下游因子结缔组织生长因子(CTGF)和富含半胱氨酸的61(Cyr61)的mRNA表达水平。结果 在前列腺癌组织中,ATF6的mRNA和蛋白质水平均显著升高(P<0.05)。敲降ATF6后,PC3细胞的增殖能力、侵袭能力和迁移能力均受到抑制(P<0.05)。动物实验证实敲降ATF6能明显抑制肿瘤生长(P<0.05)。JASPAR数据库预测发现ATF6与YAP之前存在启动结合位点,荧光素酶报告基因证实ATF6与YAP存在相互作用。敲降ATF6后显著下调YAP的mRNA及蛋白质表达水平(P<0.05),且YAP下游基因CTGF和Cyr61的mRNA表达水平也随之下调(P<0.05)。结论 ATF6能通过Hippo-YAP信号通路促进前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭。

ATF6在转基因敲除鼠人工诱导蜕膜化模型中的研究

目的利用小鼠人工诱导蜕膜化模型,探讨转录活化因子6(ATF6)在小鼠子宫内膜中的作用机制。方法构建繁育野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠,并构建小鼠人工诱导蜕膜化模型。雌鼠交配后见阴栓第1天记为Day 1。Day 4进行诱导蜕膜化,蜕膜化后48 h和72 h(即Day 6和Day 7)收集小鼠子宫进行相应指标检测,实时荧光定量PCR方法和蛋白质免疫印迹法检测Atf6 mRNA与蛋白质在蜕膜化子宫中的表达情况;免疫组织化学方法检测野生型(Atf6^(+/+))和ATF6敲除型(Atf6^(-/-))小鼠人工诱导蜕膜化模型中ATF6和催乳素(PRL)在子宫中的阳性信号表达情况。收集人子宫内膜生理周期中不同时相子宫内膜组织,进行石蜡包埋切片,免疫组织化学方法检测ATF6在子宫内膜中的阳性信号表达情况。结果与小鼠未蜕膜子宫相比,Day 6和Day 7蜕膜化子宫中的Atf6 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),细胞核内的蛋白水平也显著增高(P<0.05);Day 7时子宫大体形态学显示子宫较粗且均匀。野生型和敲除鼠诱导蜕膜化子宫HE染色显示,绝大部分子宫基质细胞变大变圆,表明诱导蜕膜化的子宫内膜蜕膜化充分;PRL免疫组化染色结果表明,在野生型(Atf6^(+/+))和敲除型(Atf6^(-/-))小鼠蜕膜化子宫内膜中,PRL染色阳性信号分布范围无显著性差异(P>0.05)。不同月经周期时相人子宫内膜组织的免疫组化结果提示,ATF6在月经期和增殖早期的表达水平较高,显著高于其余周期时相(P<0.05)。结论ATF6能够参与子宫内膜蜕膜化,但不是蜕膜化发生的必要条件;ATF6可能通过参与子宫内膜的生理修复过程参与子宫内膜生理周期。

哮喘模型IL-4、IL-13与肺组织炎症指标及STAT6的相关性研究

目的探讨哮喘模型支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13水平与肺组织炎症指标以及信息转导与转录活化因子6(STAT6)的相关性。方法利用PBS致敏、鸡卵白蛋白(OVA)激发作为正常对照组,采用OVA致敏和激发构建哮喘模型,比较两组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平,并对哮喘模型BALF中IL-4、IL-13水平与肺组织炎症指标以及STAT6的相关性进行分析。通过ELISA检测细胞因子,采用免疫组织化学方法分析STAT6的表达。结果哮喘模型鼠BALF中IL-4、IL-13水平以及肺组织STAT6的表达较正常对照组明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);哮喘模型鼠BALF中IL-4、IL-13水平与BALF中嗜酸性粒细胞计数、血清IgE含量以及STAT6呈明显正相关。结论 BALF中IL-4、IL-13水平是反应哮喘炎症水平的重要指标。

柚皮素通过调控平滑肌细胞TIMP-3表达促进动脉粥样硬化斑块稳定

[目的]探究柚皮素对动脉粥样硬化斑块胞外基质重构和斑块稳定性的影响。[方法]分离原代小鼠血管平滑肌细胞,进行不同剂量的柚皮素处理。对高脂诱导的ApoE-/-小鼠进行柚皮素灌胃16周,天狼星红-苏木精染色分析主动脉根部斑块坏死核面积、斑块内胶原含量和纤维帽厚度,Van Gieson染色检测弹力蛋白降解,明胶酶谱法和荧光标记明胶法检测斑块内基质金属蛋白酶(MMP)活性。[结果]柚皮素(50μmol/L)促进平滑肌细胞信号转导及转录活化因子6(STAT6)磷酸化和组织型基质金属蛋白酶抑制剂3(TIMP-3)的转录活性,TIMP-3的表达升高3.1倍(P<0.001)。柚皮素(80 mg/kg)处理后,与对照组相比,主动脉根部斑块坏死核面积降低53%(P<0.01)、纤维帽厚度提高近50%(P<0.05),弹力纤维降解程度降低。同时,柚皮素促进斑块内TIMP-3的表达,斑块内MMP活性也相应降低。慢病毒介导的体内抑制TIMP-3表达可降低柚皮素对斑块稳定的保护作用。[结论]柚皮素通过提高平滑肌细胞内TIMP-3表达,改善细胞外基质成分,促进动脉粥样硬化斑块稳定。

Brefeldin A调控ATF6通路增强顺铂抑制肺癌细胞增殖的作用

目的检测肺癌GLC-82细胞内质网应激ATF6通路的激活水平,以探究布雷菲德菌素A(BFA)增强顺铂(CDDP)抑制肺癌细胞增殖的分子机制。方法取对数期细胞,分别设置50 ng/mL BFA组、2μg/mL CDDP组及50 ng/mL BFA+2μg/mL CDDP组作为实验组,同时设置加入等体积二甲基亚砜(DMSO)的对照组。继续培养24 h后,利用CCK8法检测细胞增殖抑制率;培养24 h和48 h后,利用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测细胞GRP94、ATF6和ATF6B的mRNA水平和蛋白质水平。结果药物处理24 h后,BFA组、CDDP组和联合用药组细胞增殖抑制率分别为(28.6±6.8)%、(24.0±9.6)%和(57.1±3.1)%,均显著高于对照组(P<0.01),且联合用药组细胞生长抑制率亦显著高于BFA组和CDDP组(P<0.01、P<0.01)。与对照组相比,药物处理24 h后,联合用药组GRP94、ATF6 mRNA水平分别上调(19.9±2.8、22.9±4.7)倍,GRP94、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.3±0.4、6.1±1.8、5.7±1.8)倍(P<0.01或P<0.05);药物处理48 h后,联合用药组GRP94、ATF6 mRNA水平分别上调(10.5±0.7、12.1±1.8)倍(P<0.01),GRP94蛋白质水平下调(4.5±1.7)倍、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.4±0.3、2.6±0.9)倍(P<0.01或P<0.05)。结论 BFA协同增强CDDP抑制肺癌GLC-82细胞增殖的作用,与内质网应激ATF6通路和GRP94分子的激活密切相关,为肺癌的临床治疗方案提供更多的理论基础。

ILC2通过激活STAT6和分泌IL-13调节慢性肾功能衰竭患者的免疫功能

目的:探讨Ⅱ型固有淋巴细胞(ILC2)在慢性肾衰发生发展中的作用及其可能机制。方法:选择中山大学附属第一医院2016年3月~2016年12月入院的慢性肾功能衰竭患者36例,选取同期健康体检者32例为对照。流式细胞术(FCM)检测外周血单个核细胞(PBMC)中ILC2的比例;ELISA技术检测血浆中白细胞介素(IL)-13的浓度;提取慢性肾衰患者及健康对照者PBMC后分别分为3组(对照组、细胞因子刺激组、干预组)进行体外培养3 d后,ELISA法测定上清液中IL-13浓度;Western blot法对健康对照者PBMC在刺激前及刺激后15 min、30 min、1 h、2 h的转录活化因子6(STAT6)的磷酸化水平进行检测。结果:慢性肾功能衰竭患者PBMC中ILC2比例及血浆IL-13浓度均较健康人高(P<0.05);体外培养上清液中,慢性肾功能衰竭患者的3个亚组中IL-13浓度均较健康人高(P<0.05),且2类人群中均呈现出细胞因子刺激组较对照组升高,干预组较细胞因子刺激组降低的现象;Western blot结果显示p-STAT6的蛋白水平随时间的延长逐渐增高。结论:慢性肾衰患者外周血中ILC2的比例升高,同时ILC2内STAT6活化并分泌大量IL-13,介导Th2细胞的极化而调节免疫。

单宁酸调控ATF6-CHOP通路增强顺铂诱导肝癌HepG2细胞凋亡的作用

目的检测内质网应激ATF6-CHOP通路的激活水平,以探究单宁酸(TA)联合顺铂(CDDP)抗肝癌的分子机制。方法用180μmol/L TA、0.9μg/m L CDDP单独用药或者联合用药处理肝癌Hep G2细胞24和48 h后,利用实时荧光定量PCR(q-RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)技术检测细胞ATF6(ATF6α)、ATF6B(ATF6β)和CHOP的表达水平。结果药物处理24和48 h后,与对照组相比,TA组、CD-DP组和联合用药组ATF6 m RNA和蛋白水平、ATF6B蛋白水平、CHOP m RNA和蛋白水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论 TA能够联合CDDP增强肝癌Hep G2细胞内质网应激ATF6-CHOP通路的激活水平,ATF6-CHOP通路可能是TA和CDDP协同抗肝癌的分子机制之一。

黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响

目的:探讨黄芩苷对结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠IL-6/STAT3信号转导通路的影响。方法:选取SPF级健康雄性昆明种小鼠96只,采用人结肠癌HT-29细胞悬液右前肢腋窝处皮下注射建立结肠癌移植瘤模型。将小鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量组、黄芩苷中剂量组、黄芩苷高剂量组及阳性对照组,各16只,均腹腔注射给药10 ml/kg、1次/d,连续14 d。检测比较各组肿瘤体积、肿瘤质量、抑瘤率,肿瘤组织细胞凋亡指数(AI),血清IL-6、IL-10水平,以及肿瘤组织IL-6、STAT3、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平。结果:与模型组比较,各组小鼠抑瘤率、肿瘤组织AI较高,且黄芩苷低剂量组<黄芩苷中剂量组<黄芩苷高剂量组<阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠肿瘤体积和质量、血清IL-6、IL-10水平、肿瘤组织IL-6、p-STAT3、Bcl-2蛋白表达水平较低,且黄芩苷低剂量组>黄芩苷中剂量组>黄芩苷高剂量组>阳性对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:黄芩苷能剂量依赖性的抑制结肠癌HT-29细胞移植瘤小鼠肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,其作用可能与抑制IL-6/STAT3信号转导通路活性有关。

黄芪-当归配伍对气道变应性炎症大鼠IFN-γ,IL-4,STAT6,STAT4的影响

目的:通过研究黄芪-当归配伍对气道变应性炎症模型大鼠血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)含量及肺组织信号转导因子和转录活化因子4(STAT4)、信号转导因子和转录活化因子6(STAT6)表达的影响,探讨黄芪-当归配伍治疗气道变应性炎症的作用机制。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏及喷雾激发的方法造成大鼠气道变应性炎症模型,分别用黄芪、当归、黄芪-当归配伍灌胃给药治疗。应用ELISA方法测定血清中IFN-γ、IL-4含量。应用Western blot方法检测肺组织STAT4、STAT6表达。结果:模型组血清IFN-γ含量降低,IL-4含量升高。黄芪组血清中IFN-γ含量增加,当归组血清中IL-4含量降低,芪归配伍组可增加血清中IFN-γ含量,降低IL-4含量。模型组肺组织STAT6、磷酸化信号转导因子和转录活化因子6(p-STAT6)表达增加,STAT4、磷酸化信号转导因子和转录活化因子4(p-STAT4)表达减少。黄芪组可降低STAT6,p-STAT6表达,增加p-STAT4表达。当归组可降低p-STAT6表达。芪归组可降低STAT6,p-STAT6,增加STAT4,p-STAT4表达。结论:黄芪-当归配伍可能通过抑制STAT6、促进STAT4,调节气道变应性炎症中Th1/Th2细胞因子平衡,从而对气道变应性炎症有抑制作用。

小檗碱对小鼠非酒精性脂肪性肝病程序性坏死的影响及其与AMPK/STAT6通路的关系

目的评价小檗碱对小鼠非酒精性脂肪性肝病程序性坏死的影响及其与腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/转录活化因子6(STAT6)通路的关系。方法将25只8周龄雄性C57BL/6N小鼠分为对照组、脂肪肝组、小檗碱治疗组(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))、AMPK抑制剂Compound C治疗组(0.2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、STAT6抑制剂AS1517499治疗组(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))。第12周末给小鼠称重并采集血清检测天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、三酰甘油、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;留取肝脏组织称重并检测丙二醛和超氧化物歧化酶浓度,并予HE、Masson和油红O染色;Western印迹法检测程序性坏死蛋白受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、磷酸化(p-)混合系列蛋白酶样结构域(MLKL)及通路蛋白AMPK、p-AMPK、p-STAT6的表达。结果与对照组相比,脂肪肝组肝质量、肝指数、AST、ALT、三酰甘油、TNF-α、IL-1β、氧化应激程度明显加重(P<0.05),肝组织充满空泡样改变及炎性细胞浸润,可见广泛分布的红色脂滴和明显蓝色纤维,RIPK3及p-MLKL表达上调(P<0.05),p-AMPK和p-STAT6水平降低(P<0.05);与脂肪肝组相比,小檗碱干预可明显降低小鼠肝质量与肝指数,改善肝功能,降低血脂水平、促炎因子表达以及氧化应激水平,肝组织脂肪变性及纤维化程度明显减轻,RIPK3及p-MLKL表达下调(P<0.05),p-AMPK和p-STAT6水平显著增加(P<0.05);与小檗碱治疗组相比,给予AMPK和STAT6抑制剂处理均可抵消小檗碱对脂肪肝的保护效应,RIPK3及p-MLKL表达增加(P<0.05)。5组间AMPK总蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论小檗碱可激活AMPK/STAT6通路,抑制肝细胞程序性坏死,发挥对小鼠非酒精性脂肪性肝病的保护作用。

桂枝提取物对AS大鼠IL-6/STAT3信号通路的影响分析

目的:分析桂枝提取物对动脉粥样硬化(AS)大鼠白细胞介素-6(IL-6)/信号转导子和转录活化子3(STAT3)信号通路的影响。方法:选取健康纯种SD雄性大白鼠共366只,随机分为正常对照组、模型组和桂枝对照组。采用实时荧光定量PCR技术检测AS大鼠腹主动脉血管AGTRl、IL-6 m RNA的表达;采用Western blotting检测TLR4、LXR、NF-κB P65/p-NF-κB P65、JNK/P-JNK、JAK1/p-JAK1、STAT3/p-STAT3、P38 MAPK/p-P38MAPK、IL-6在AS大鼠腹主动脉中的表达;ELISA法检测ERK1/2/P-ERK1/2在大鼠腹主动脉中的表达。结果:与正常对照组比较,模型组腹主动脉血管IL-6表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,桂枝对照组IL-6的水平显著降低(P<0.05)。模型组腹主动脉p-JAK1水平与正常对照组比较,升高显著,同时p-STAT3水平显著降低(P<0.05);桂枝对照组p-JAK1水平与模型组比较,显著降低(P<0.05);而p-STAT3水平显著升高(P<0.05)。结论:桂枝提取物可以通过降低TLR4和TLR4 m RNA水平,升高LXR和LXR m RNA水平,同时抑制JNK、p38 MAPK和ERK1/2的磷酸化,作用于NFκB转录因子,抑制IL-6分泌,进而影响JAK2/STAT3信号转导通路。

BCG—CpG—DNA对支气管哮喘小鼠肺组织STAT4、STAT6表达的影响

目的观察BCG-CpG-DNA干预对支气管哮喘（简称哮喘）小鼠信号转导和转录激活因子4（sTAT4）、STAT6的影响，探讨其对小鼠哮喘的作用机制。方法将30只BALB／c小鼠随机分为3组：正常对照组（A组）、哮喘模型组（B组）、BCG-CpG-DNA治疗组（C组）。其中B、C组小鼠于第0天、第13天分别给予卵清白蛋白（OVA）和佐剂液态铝混悬液致敏，于第25天至第30天每天给予雾化OVA建立哮喘模型，C组于致敏后以BCG-CpG-DNA腹腔注射，A组以生理盐水代替OVA致敏和激发。所有动物于第31天处死，采用Westernblot技术检测小鼠肺组织中STAT4、STAT6的蛋白表达水平。结果与A组比较，B组STAT4、pSTAT4表达降低（P值均〈0．01），STAT6、pSTAT6的表达升高（P值均〈O．01）；与B组比较，BCG-CpG-DNA治疗后小鼠哮喘症状和肺组织的炎症病理变化减轻，STAT4、pSTAT4表达增加，STAT6、pSTAT6表达降低，差异具有统计学意义（P值均〈0．01）。结论BCG-CpG-DNA可能通过抑制STAT6、促进STAT4的表达，调节Th1／Th2细胞因子平衡，从而起到抑制气道炎症的作用。

姜黄素对肝星状细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的探讨姜黄素是否通过调控白细胞介素-6(IL-6)/信号转导和转录活化因子3(IL-6/STAT3)信号通路而调控肝纤维化鼠肝星状细胞((HSC))增殖、凋亡。方法(1)5个不同浓度(0,10,20,40,80μmol·L^-1)的姜黄素处理HSC,分别作为空白组和4个浓度姜黄素组。(2)将细胞分为4组:空白组(未处理细胞)、JSI-124组(10μmol·L^-1抑制剂JSI-124)、中浓度姜黄素组(姜黄素40μmol·L^-1),联合组(姜黄素40μmol·L^-1和IL-6100 ng·mL^-1共同处理)。以CCK-8法检测HSC细胞增殖水平,流式细胞术检测HSC细胞凋亡情况。分别加入IL-6/STAT3信号通路激活剂与抑制剂,观察其对HSC细胞增殖和凋亡的影响。以蛋白质印迹法检测IL-6和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达量。结果(1)于72 h,空白组和很低、低、中、高4个浓度姜黄素组的细胞凋亡率分别为(4.56±0.98)%,(8.33±1.65)%,(16.61±2.07)%,(22.44±1.97)%和(24.36±2.68)%;这5组的IL-6蛋白相对表达量分别为0.79±0.09,0.62±0.07,0.51±0.05,0.34±0.03和0.30±0.02;这5组的p-STAT3蛋白相对表达量分别为0.81±0.08,0.67±0.05,0.50±0.04,0.32±0.03和0.27±0.02;4个浓度姜黄素组与空白组相比,细胞凋亡率明显升高,而IL-6和p-STAT3蛋白相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。(2)空白组、JSI-124组、中浓度姜黄素组与联合组的细胞增殖抑制率分别为(0.19±0.05)%,(35.26±5.69)%,(43.26±6.19)%和(13.22±2.18)%;这4组的细胞凋亡率分别为(4.91±0.64)%,(21.69±2.25),(23.61±3.94)%和(6.59±1.22)%;上述指标:JSI-124组与空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);联合组与中浓度姜黄素组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论姜黄素可通过抑制IL-6/STAT3信号通路而抑制肝星状细胞增殖,促进细胞凋亡。