哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1的表达与气道炎症关系的研究

目的 研究哮喘豚鼠气道上皮细胞信号转导子和转录活化子1(STAT_1)的表达及动态变化,探讨STAT_1蛋白与哮喘气道炎症的相关性及地塞米松的影响。方法 48只豚鼠随机分为6组,卵白蛋白腹腔注射与雾化吸入诱发豚鼠哮喘发作,在激发后0h、24h、72h、5d,以及地塞米松治疗后第5d,测定哮喘豚鼠支气管粘膜周围肺组织嗜酸粒细胞(EOS)浸润与支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸粒细胞数量,酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中γ-干扰素浓度,免疫组化测定哮喘豚鼠气道上皮细胞中STAT_1表达。结果 豚鼠在诱喘后各个时相(0h、24h、72h及5d)BALF中嗜酸粒细胞的变化与支气管粘膜肺组织EOS浸润密度正相关(r=0.815,P<0.001)。气道上皮细胞中STAT_1表达与支气管粘膜周围肺组织EOS浸润及BALF中EOS数量均呈正相关(r=0.752,P<0.001;r=0.692,P<0.01)。地塞米松能抑制上皮细胞STAT_1表达(5d与治疗组相比,P<0.01)。BALF中γ-干扰素浓度与气道上皮细胞STAT_1表达呈负相关(r=0.499,P<0.05)。结论 支气管哮喘存在支气管上皮细胞STAT_1的持续活化及过度表达,并与嗜酸粒细胞聚集增多有密切关系。

刺梨黄酮对心力衰竭大鼠心脏结构、功能及心室肌信号传导子和转录活化子1蛋白表达的影响

目的探讨刺梨黄酮对心力衰竭大鼠心脏结构、功能及心室肌中信号传导子和转录活化子1(STAT1)蛋白表达的影响。方法将24只Sprague Dawley雌性大鼠随机分为对照组(n=6)、模型组(n=9)和刺梨黄酮组(n=9)。模型组和刺梨黄酮组大鼠腹腔注射0.5 g·L^(-1)盐酸阿霉素溶液(2 mL·kg^(-1))制备心力衰竭模型,每日1次,共10 d;空白对照组大鼠仅腹腔注射等量的生理盐水。造模的同时,刺梨黄酮组大鼠于每次注射阿霉素后给予0.1 g·L^(-1)刺梨黄酮溶液灌胃(2 mL·kg^(-1)),每日1次,共10 d;模型组和对照组大鼠给予等量的生理盐水灌胃。造模后超声检测各组大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室收缩末期内径(LVESD)和左心室舒张末期内径(LVEDD),然后处死大鼠,取左心室制备冰冻切片及超薄切片进行形态学观察,免疫组织化学和荧光技术检测各组大鼠心室肌组织中STAT1和factorⅧ蛋白表达,利用Image J软件对免疫组织化学结果进行定量分析。结果实验过程中模型组和刺梨黄酮组分别有4只大鼠死亡。光学显微镜和电子透镜观察结果显示,对照组大鼠心肌纤维排列整齐,心肌细胞完整,线粒体结构清晰,未见异常改变。模型组大鼠心肌纤维紊乱呈波浪状,心肌间隙明显增宽,某些区域存在心肌细胞水肿、肌原纤维溶解和炎性细胞浸润,肌丝排列紊乱,出现明显的收缩带,Z线增粗,线粒体及细胞质基质出现局灶性溶解,并发生"鞘样"改变;细胞核发生棘突样改变,肌细胞表面出现大小不一的"指状突起"。刺梨黄酮组大鼠心室肌的状态较模型组改善,接近对照组。模型组大鼠LVEF低于对照组,LVESD和LVEDD高于对照组(P<0.05);刺梨黄酮组大鼠LVEF高于模型组,LVESD和LVEDD低于模型组(P<0.05)。对照组、模型组和刺梨黄酮组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量分别为0.27±0.02、0.56±0.07和0.32±0.03,模型组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量高于对照组(P<0.05),刺梨黄酮组大鼠心室肌中STAT1蛋白表达量低于模型组(P<0.05)。STAT1与factorⅧ蛋白存在共表达。结论刺梨黄酮可以减少阿霉素对心肌细胞的毒性作用,可通过下调STAT1蛋白表达来改善大鼠的心功能。

功能获得性信号转导和转录活化子1基因缺陷

慢性皮肤黏膜念珠菌病（CMC）特征为持续或反复指甲、皮肤、口腔或生殖道黏膜白色念珠菌感染，可由各种免疫内在缺陷引起。CMC可见于T淋巴细胞免疫缺陷病、高IgE综合征、白细胞介素（IL）－12p40和IL－12受体β1（IL－12Rβ1）缺陷、Caspase募集结构域9缺陷和自身免疫性多内分泌病念珠菌病外胚层发育不良。CMC的发病机制提示IL－17A、IL－17F、IL－22免疫受损。常染色体隐性遗传IL－17RA缺陷，显性负调节的IL－17F突变是孤立的CMC（CMCD）的病因。近一半的CMCD患者由功能获得性信号转导和转录活化子1突变所致。患者还有细菌感染、病毒感染、自身免疫和炎症疾病等，提示具有广阔的临床异质性。

JAK/STAT1信号转导通路在博莱霉素致肺纤维化大鼠中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸激酶(JAK)信号传导子和转录活化子1(STAT1)信号转导通路在肺纤维化中的作用机制。方法将30只Wistar大鼠随机分为博莱霉素(BLM)组和生理盐水(NS)组,分别于气管内灌注BLM及NS后第7、14、28天处死。右肺支气管肺泡灌洗,进行细胞分类、计数;左肺组织匀浆测定胶原含量;免疫组化法测定STAT1、血小板源性生长因子(PDGF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白的表达。结果BLM组肺组织胶原含量在7、14、28 d均明显高于NS组(P<0.01);BLM组肺组织STAT1、PDGF蛋白表达在第7天达高峰,之后下降,第28天时仍高于NS组(P<0.05),且与支气管肺泡灌洗液中的细胞总数呈正相关(r=0.880,P均<0.01);BLM组肺组织中PAI-1表达在第7天开始升高,第28天达高峰,且与肺组织中胶原含量呈正相关(r=0.952,P<0.01)。结论JAK/STAT1信号转导通路可能通过调节STAT1、PDGF和PAI-1表达,参与肺纤维化的形成。

STAT1反义寡核苷酸雾化吸入对肺纤维化大鼠肺组织STAT1、ICAM-1及PDGF-A表达的影响

目的:观察信号转导子与转录活化子1(STAT1)反义寡核苷酸(ASON)雾化吸入对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织STAT1、细胞粘附分子-1(ICAM-1)和血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响。方法:取Wistar大鼠45只,随机分成生理盐水(NS)组、BLM组和ASON组,NS组气管内灌注NS,BLM组和ASON组气管内灌注BLM,随后NS组和BLM组雾化吸入NS,ASON组雾化吸入STAT1ASON,隔天雾化一次,共4次,分别于雾化后第7天、第14天、第28天处死大鼠各5只,右肺行支气管肺泡灌洗(BAL)进行细胞分类、计数;左肺免疫组化法测定肺组织中STAT1、ICAM-1和PDGF-A蛋白的表达。结果:①与BLM组比较,ASON组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P<0.05)。②与NS组比较,BLM组、ASON组肺组织STAT1、ICAM-1和PDGF-A表达水平均显著升高(P<0.01)。BLM组第7天STATl、ICAM-1、PDGF-A在肺组织中表达水平显著升高,随后下降,第28天时仍高于NS组(P<0.05)。与BLM组比较,ASON组各时间点STAT1、ICAM-1和PDGF-A表达水平降低(P<0.05)。结论:STAT1ASON雾化吸入能减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化,其机制可能与STAT1被抑制后,炎症细胞在肺部浸润减轻,致炎因子和致纤维化因子分泌减少有关。

IFN-γ通过非依赖STAT1途径对人胃癌组织中P53表达的调控机制

目的:探讨胃癌中IFN-γ通过非依赖STAT1途径对P53表达调控的作用及机制.方法:SGC7901经IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸处理,RT-PCR及灰度分析法检测STAT1和p53mRNA水平变化,应用Hoechest33258观察细胞凋亡.人胃癌组织经免疫组织化学染色检测STAT1和P53蛋白.各组平均吸光度值通过t检验分析.结果:SGC7901细胞经IFN-γ处理后,STAT1和p53mRNA表达上升(P<0.05).经不同浓度STAT1反义寡核苷酸处理后,STAT1mRNA表达下降,有浓度依赖性(P<0.05).p53mRNA表达量始终低于未处理组(P<0.05).经IFN-γ和不同浓度STAT1反义寡核苷酸联合处理后,STAT1mRNA和蛋白表达较IFN-γ单独处理逐渐下降,有浓度依赖性(P<0.05),p53mRNA表达量始终高于IFN-γ单独处理组(P<0.05).所有处理组中,STAT1mRNA与p53mRNA表达无关.人胃癌组织经免疫组织化学染色检测,STAT1和P53蛋白表达无关.经IFN-γ和STAT1反义寡核苷酸处理后细胞无明显凋亡.结论:IFN-γ可通过非依赖STAT1途径促进胃癌组织中P53的表达.

RNAi技术沉默STAT1基因对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默转导子与转录活化子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)基因对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 :将32只4周龄BALB/c雌鼠随机分为正常组、PBS组、空质粒(随机片段RNAi)组和si RNA(p GSTAT1-2)组,利用RNAi沉默支气管哮喘小鼠中STAT1基因,采用免疫组织化学检测STAT1蛋白的表达;通过单肺灌洗留取肺泡灌洗液(BALF),应用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测气道炎症介质如γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素5(IL-5)的表达水平。结果 :si RNA组的IFN-γ浓度高于PBS组、空质粒组(P<0.05),而IL-5的表达水平低于PBS组、空质粒组(P<0.05),二者在PBS组和空质粒组组间均无差异(P>0.05);si RNA组BALF中嗜酸性粒细胞(EOS)数量和IL-5浓度较空质粒组和PBS组中均明显减低,而IFN-γ的浓度增高,IFN-γ与EOS呈负相关,IL-5与EOS呈正相关,si RNA组BALF中白细胞(WBC)数量较空质粒组和PBS组中均明显减低;STAT-1蛋白主要表达于气道上皮细胞,si RNA组STAT-1蛋白表达明显低于PBS组与空质粒组,正常组低于si RNA组、PBS组和空质粒组,有统计学意义(P<0.05)。结论 :si RNA能有效抑制哮喘小鼠气道上皮细胞STAT1蛋白的表达,减轻哮喘小鼠的气道炎症反应。

地塞米松对肺纤维化大鼠肺组织STAT1和PDGF表达的影响

目的观察地塞米松(dexamethasone,DXM)对肺纤维化大鼠肺组织信号传导子和转录活化子1(STAT1)和血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法45只Wistar大鼠随机分为地塞米松组(DXM组)、博来霉素组(BLM组)和对照组(NS组):①DXM组,气管内灌注BLM(5mg/kg,用生理盐水配制BLM溶液浓度为5mg/ml)诱导肺纤维化,随后每日用地塞米松3mg/kg腹腔注射进行干预;②BLM组,气管内灌注BLM(剂量与用法同上),随后每日用生理盐水(NS)3mg/kg腹腔注射进行干预;③NS组,气管内灌注和腹腔注射均用NS(剂量与用法同上)。于气管内灌注后第7、14和28天各分别处死5只大鼠,取右肺支气管肺泡灌洗液(BALF),进行细胞分类、计数;采用免疫组织化学法测定STAT1和PDGF蛋白的表达。结果①BLM组BALF中细胞总数在第7天达到高峰,第14天和第28天开始下降;DXM不同时间组细胞总数均低于BLM组,尤其以第7天差异明显(P<0.05);②BLM组肺组织中STAT1和PDGF蛋白表达在第7天达高峰,之后下降,第28天时仍高于NS组(P<0.05),均与BALF中的细胞总数呈正相关(r=0.880和0.902,P均<0.01);DEX组STAT1和PDGF蛋白表达明显低于同期BLM组(P<0.01)。结论地塞米松能够抑制BLM诱导的肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能通过早期抑制肺组织STAT1和PDGF的表达而发挥作用。

人胃癌IFN-γ-STAT1通路的作用及其机制

目的:分析人胃癌组织和胃癌SGC7901细胞中STAT1、Caspase-7及p21waf的表达关系,并探讨胃癌中IFN-γ-STAT1分子通路特点.方法:人胃癌组织免疫组织化学染色,IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸处理SGC7901细胞.免疫细胞化学、RT-PCR及图像分析的方法检测mRNA和蛋白水平变化,应用Hoechest33258观察细胞凋亡.结果:人胃癌组织Caspase-7与STAT1和p21waf正相关(r=0.32,0.22,均P<0.05);SGC7901细胞经IFN-γ处理后,STAT1、Caspase-7和p21wafmRNA和蛋白表达明显上升(P<0.05).经IFN-和不同浓度STAT1反义寡核苷酸联合处理后,STAT1mRNA和蛋白表达较IFN-γ单独处理明显下降,有浓度依赖性(P<0.05).Caspase-7和P21waf蛋白表达较IFN-γ单独处理明显下降,有浓度依赖性(P<0.05),但是mRNA表达量则随着STAT1反义寡核苷酸浓度变化,出现Caspase-7先下降后上升,p21waf先上升后下降的变化.经IFN-γ和STAT1反义寡核苷酸处理后细胞无明显凋亡.结论:人胃癌组织和胃癌细胞系SGC7901中存在IFN-γ-STAT1通路,且可上调Caspase-7和p21waf的表达,但无明显凋亡调控作用;胃癌IFN-γ-STAT1分子通路的下游分子在mRNA水平和蛋白水平表达变化不一致.

胃癌细胞SGC7901中STAT1，NF-κB p65和caspase 8的关系

目的:探讨信号转导子与转录活化因子1 (STAT1)、核因子κB(NF-κB)p65和凋亡因子caspase 8在胃癌细胞SGC7901中的关系.方法:SGC7901细胞经IFN-γ及STAT1反义寡核苷酸(STAT1ASON)处理后,应用RT-PCR方法检测STALT1,NF-κB p65和caspase 8在mRNA水平的改变.结果:IFN-γ(1000 U)处理SGC7901细胞,在0.5,3和24 h,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平出现先下降后上升的变化,二者呈正相关关系(r=0.403,P=0.009);使用不同浓度的STAT1ASON处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关关系(r=-0.556,P=0.015):IFN-γ和不同浓度的STAT1ASON联合作用处理SGC7901细胞24 h,在mRNA水平,STAT1和NF-κB p65呈负相关(r =-0.783,P=0.002),caspase 8呈上升趋势,与STAT1呈负相关关系(r=-0.667,P=0.002),与NF-κ3 p65呈正相关关系(r=0.594,P=0.021).结论:IFN-γ能促进STAT1,NF-κB和caspase 8的表达,STAT1和NF-κB p65在mRNA水平上呈负相关;caspase 8与STAT1呈负相关关系,与NF-κB p65呈正相关关系.

DNA甲基转移酶3b对肝癌细胞株中STAT1及其下游基因c—myc的表达和启动子甲基化的影响

目的探讨DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）在人肝癌细胞株（SMMC7721）中对STAT1和c-myc基因表达及其启动子甲基化水平的影响，并进一步探讨DNMT3b的作用。方法用DNMT3bsiRNA抑制DNMT3b在SMMC7721细胞系中的表达，用Western blot技术检测其转染前后DNMT3b及STAT1和c-myc基因的表达。应用甲基化特异性PCR（MSP）技术分别检测两组细胞中STAT1和c-myc基因启动子区的甲基化状况。结果转染DNMT3bsiRNA的实验组DNMT3b表达水平明显低于对照组，STAT1基因的表达高于对照组；c—myc基因的表达低于对照组。两组中STAT1和c—myc基因启动子区甲基化状态无差异，均未发生甲基化。结论DNMT3b可以调节STAT1和c—myc基因的表达，而不改变基因的甲基化状态，可能发挥了转录调控因子的作用。

γ-干扰素对沙眼衣原体感染细胞信号蛋白表达的影响

分析IFN-γ对沙眼衣原体感染细胞信号蛋白的影响,探讨IFN-γ抗沙眼衣原体的可能分子机制。采用IFN-γ作用于沙眼衣原体感染的M cCoy细胞,用免疫印迹法检测蛋白质酪氨酸激酶磷酸化改变及其对JAK激酶(Janus k inase,JAK)、信号转导子及转录活化子1(signal transducers and activators transcription,STAT1)的诱导活化。与对照组比较,IFN-γ可以在短时间内引起沙眼衣原体感染细胞内的蛋白质酪氨酸激酶的磷酸化,上调JAK1、JAK2和STAT1p91的表达。结论IFN-γ可诱导沙眼衣原体感染细胞的信号蛋白表达,此作用可能与IFN-γ抗沙眼衣原体感染有关。

呈孟德尔遗传的分枝杆菌病

呈孟德尔遗传的分枝杆菌病是少见的遗传异常，特征为对弱毒力的分枝杆菌敏感，如卡介苗和环境分枝杆菌。干扰素（IFN）－γ/白细胞介素（IL）－12通路是控制分枝杆菌感染的关键，数个相关基因已被鉴定。IFN－γ分泌受损见于IL－12p40和IL－12受体β1（IL－12Rβ1）缺陷患者，对IFN－γ反应受损见于IFN－γ受体1、IFN－γ受体2和信号转导和转录活化子1（STAT1）缺陷患者。其他已获得鉴定的相关生殖突变基因包括细胞色素b（－245）β亚单位（CYBB）、干扰素调节因子8（IRF8）、泛素样修饰子（ISG15）、RORC和TYK2。一半的患者除易感沙门菌外，并不表现有常见的相关感染。现就相关疾病的发病机制、分子特征、临床特点、实验室发现、诊断、治疗及预后等方面的内容进行阐述，为儿科医师在此领域的诊疗工作提供相关信息。

N^(pro)蛋白可抑制poly(I:C)和流感病毒激活的天然免疫应答

【目的】猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)感染猪引起出血综合征和免疫抑制,是一种高度传染性的猪病。本研究以CSFV为研究对象,探究CSFV抑制宿主天然免疫的机制及其在免疫抑制条件下对甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)感染的潜在作用。【方法】首先,为探究CSFV对宿主天然免疫的影响,利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)、荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative PCR,RT-qPCR)和Western blotting技术检测PK-15细胞感染CSFV后对Poly(I:C)诱导干扰素(interferons,IFNs)、干扰素诱导基因(IFN-stimulated genes,ISGs)和信号传导子和转录活化子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)磷酸化的影响。其次,利用过表达CSFV蛋白的细胞系筛选并确定抑制天然免疫的关键蛋白。最后,在过表达CSFV N^(pro)蛋白的细胞系上,利用RT-PCR、RT-qPCR、Western blotting和病毒噬斑实验技术研究N^(pro)蛋白对天然免疫和IAV感染的影响。【结果】CSFV可抑制poly(I:C)诱导的Ⅰ型和Ⅲ型IFN的表达。CSFV N^(pro)蛋白在体外直接抑制STAT1的磷酸化,引起寡腺苷酸合成酶样蛋白(OASL)、2',5'-寡腺苷酸合成酶1(OAS1)、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)和干扰素刺激基因15(ISG15)表达下调。重要的是,CSFV N^(pro)蛋白可抑制IAV诱导的Ⅰ型和Ⅲ型IFN的表达,并导致STAT1的磷酸化和OASL、OAS1、IFITM3和ISG15的表达显著下降,进而显著促进IAV在过表达N^(pro)蛋白的PK-15细胞中复制。【结论】猪瘟病毒的N^(pro)蛋白能够拮抗由poly(I:C)和IAV所激活的天然免疫应答,表明N^(pro)蛋白可抑制RIG-I依赖的信号通路并可促进IAV在表达N^(pro)蛋白的PK15细胞中复制。