利用染色质结构检测技术研究乳腺癌易感蛋白BRCA1转录激活区突变

乳腺癌易感基因BRCA1突变引起的遗传性乳腺癌占 4 0 %～ 5 0 % ,其突变引起的遗传性乳腺癌和卵巢癌的比例至少为 80 %。许多乳腺癌易感突变发生在BRCA1C末端转录激活结构域 (15 6 0～ 186 3aa) ,但该区域大部分突变导致何种表型 (良性多态性或乳腺癌易感突变 )目前还不清楚。由于染色质结构调节是基因转录调节的早期事件 ,该文基于lac阻遏物识别和结合lac操纵基因的原理 ,利用染色质结构检测技术比较BRCA1转录激活结构域不同突变体与野生型的染色质伸展活性。将 1种野生型、2种良性多态型 (S16 13G和M16 5 2I)和 4种乳腺癌易感突变型(A170 8E、M1775R、W1837R和Y185 3term)转录激活区片段以正确相位融合于lac阻遏物的下游 ,得到野生型重组质粒pwt和pS16 13G、pM16 5 2I、pA170 8E、pM1775R、pW1837R及pY185 3term 6种突变型重组质粒。Westernblot检测表明 ,这些重组质粒分别转染AO3-1细胞后均表达了相应的融合蛋白。对这些重组质粒的染色质伸展活性检测表明 ,野生型pwt和两种良性多态性突变体不具有染色质伸展活性或只有极微弱的染色质伸展活性 ,而其他 4种乳腺癌易感突变体均具有过强的染色质伸展活性 ,提示利用染色质伸展技术可预测BRCA1转录激活区基因型与乳腺癌发生风险的表现型的关系。

酵母双杂合系统

常规研究蛋白质相互作用的生化方法包括化学交联、免疫共沉淀等,这些方法反映的是体外的情况而非体内情况,而且这些方法无法让我们直接克隆与某已知蛋白质作用的未知蛋白质的基因。最近一种新的技术逐渐成熟并得到广泛应用,它就是“Yeast two-hybrid sys-tem”,我们姑且将其译为“酵母双杂合系统”。

雄激素受体基因多态性与男性冠心病关系的研究

目的研究雄激素受体(androgenrecceptor,AR)基因外显子1区CAG多态性与男性冠心病(coronaryarterydisease,CAD)及其危险因素的关系。方法所有入选病例均接受冠状动脉造影和常规生化检查,CAD严重程度采用冠脉狭窄≥50%的支数(0～3)及相应的GS评分进行评估,外周血AR转录激活区CAG重复序列的长度采用PCR法测定。结果CAG重复长度界于13～30之间,CAG重复≥24次者为长AR基因组,<24次者为短AR基因组。与长AR基因组比较:短AR基因组患者具有较低的平均体质指数(BMI)(t=-3.024,P=0.005)和较低水平的高密度脂蛋白(HDL)(t=-2.610,P=0.010);短AR基因组出现明显冠脉狭窄的可能性较大(χ2=4.82,P=0.028),GS(Gensiniscore,GS)较高(M-W检验,z=-2.644,P=0.008)。Spearman相关分析表明,AR基因CAG长度和GS显著负相关(r=-0.230,P=0.010),这种相关性独立于年龄、BMI、LDL、UA和HDL之外(偏相关系数r=-0.250,P=0.006)。结论具有短AR基因者与更加严重的冠心病相关,提示CAG多态性与男性CAG病情发展相关,AR表达增多,雄激素敏感性增高是男性CAD发病率较高的原因之一。

Egr-1诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制

早期生长反应基因1（Egr-1）（又名Zif268、NGF1-A、Krox24或TIS8）是一种含有锌指结构的转录因子，属于即刻早期基因家族（IEGs），其基因定位于人第5号染色体，长211kb，编码3．3kb的成熟mRNA。Egr-1基因组结构包括DNA结合区、转录激活区、转录抑制区。