MRI联合血清赖氨酸氧化酶样蛋白4、信号转导和转录激活因子3检测用于原发性肝癌诊断的价值

目的:探讨磁共振成像(MRI)联合血清赖氨酸氧化酶样蛋白4(LOXL4)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)检测用于原发性肝癌诊断的价值。方法:选取肝占位性病变患者214例,比较分析原发性肝癌和肝脏良性病变患者血清LOXL4、STAT3水平差异,以及原发性肝癌不同患者间差异,同时分析MRI联合血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的价值。结果:确诊为原发性肝癌患者92例,肝脏良性病变122例。原发性肝癌患者血清LOXL4、STAT3明显高于肝脏良性病变患者(均P<0.05)。TNM分期Ⅲ-Ⅳ患者血清LOXL4、STAT3明显高于肝脏良性病变患者(均P<0.05)。低分化患者血清LOXL4、STAT3明显高于中高分化患者(均P<0.05)。血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的ROC曲线下面积分别为0.890和0.896(均P<0.05)。MRI联合血清LOXL4、STAT3水平诊断原发性肝癌的灵敏性和阴性预测值分别为95.65%和96.00%,高于MRI检查(均P<0.05)。结论:原发性肝癌患者血清LOXL4、STAT3水平升高,与TNM分期及分化程度有关;MRI联合血清LOXL4、STAT3检测诊断原发性肝癌有较好的应用价值。

积雪草酸调控白细胞介素-6/信号转导子和转录激活子3/核转录因子-κB通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨积雪草酸调控白细胞介素(IL)-6/信号转导子和转录激活子3(STAT3)/核转录因子-κB(NF-κB)通路对哮喘小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发来制备哮喘小鼠模型,随机分为模型组、积雪草酸低剂量组(54 mg/kg)、积雪草酸高剂量组(108 mg/kg)、积雪草酸高剂量(108 mg/kg)+Colivelin(IL-6/STAT3/NF-κB激活剂,2 mg/kg)组,每组各10只。另选10只小鼠在致敏和激发阶段给予等剂量生理盐水设为对照组,用积雪草酸和Colivelin分组处理各组小鼠后检测其肺组织病理形态,肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞计数,外周血Treg/Th17,BALF和血清中Treg、Th17细胞分泌因子水平,肺组织IL-6/STAT3/NF-κB通路相关蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生明显病理损伤,外周血Treg细胞占比和Treg/Th17,BALF和血清IL-10、IL-35水平降低(P<0.05)。肺部炎症评分,BALF中白细胞计数与嗜酸粒细胞计数,外周血Th17细胞占比,BALF和血清IL-17、IL-6水平,肺组织IL-6蛋白表达与p-STAT3/STAT3、p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05)。低、高剂量积雪草酸可逆转哮喘模型小鼠上述病理变化,且高剂量积雪草酸作用更强。Colivelin可减弱积雪草酸对哮喘模型小鼠上述病理变化的作用。结论:积雪草酸可通过减弱IL-6表达与STAT3、NF-κB的磷酸化,抑制哮喘小鼠炎症细胞及炎症因子产生,从而减轻气道炎症及肺组织损伤,改善肺功能。

Kruppel样因子14介导的JAK-STAT信号通路对非小细胞肺癌预后的影响

目的探讨Kruppel样因子14(KLF14)介导的Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAKSTAT)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)预后的影响。方法收集2018年1月至2019年9月本院手术切除的80例NSCLC组织和25例癌旁非肿瘤组织。患者随访至2023年4月结束。采用免疫组织化学检测组织中KLF14表达,根据KLF14表达的中值水平将患者分为高表达组和低表达组。通过在A549细胞中转染KLF14、JAK1过表达质粒和在HCC827细胞中转染KLF14、JAK1特异性短发夹RNA(shKLF14、shJAK1)来过表达或敲低KLF14、JAK1。采用细胞克隆形成试验分析细胞的增殖活力。Transwell分析细胞的迁移、侵袭情况。结果与癌旁正常组织相比,KLF14在NSCLC组织中表达降低(P<0.001)。KLF14的低表达与肿瘤直径>3 cm、淋巴结转移、临床分期Ⅲ期显著相关(P<0.05)。在高KLF14表达组和低KLF14表达组之间的总存活率有显著差异,低KLF14表达的患者预后不良(P<0.05)。KLF14过表达后,A549细胞的增殖能力、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05),而KLF14敲低后,HCC827细胞的增殖能力、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05)。与Vector+KLF14组相比,JAK1+KLF14组A549细胞的集落数、迁移和侵袭数显著增加(P<0.05);而与shNC+shKLF14组相比,shJAK1+shKLF14组HCC827细胞的集落数、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论KLF14低表达与NSCLC患者较差的总生存期相关。KLF14上调显著抑制肺癌细胞在体外的增殖、转移能力,其作用机制可能与抑制JAK-STAT信号通路有关。

自发光转录激活子样效应因子的功能分析

目的:对转录激活子样效应因子(TALE)蛋白进行特异性标记.方法:通过分子生物学技术,在TALE蛋白的C-端融合了一种具有优异光学性能的萤光素酶.结果:融合蛋白不仅可对目的 DNA进行特异性识别,还可产生萤光素酶的特征光谱.结论:萤光素酶的融合不影响TALE蛋白的正常功能,其光谱信息有望成为分析TALE蛋白与DNA相互作用的特异性检测信号.

类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)介导的基因组定点修饰技术

人工构建的序列特异性核酸内切酶能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,从而引起基因组结构的定点改变。人工核酸内切酶技术使得研究人员有可能对任意物种的基因组进行定点修饰,开启了反向遗传学研究的新天地。类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)自2010年底开始成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease,ZFN)更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。文章综述了TALEN技术的研究进展及应用前景,重点介绍TALEN的结构、作用机制与构建方法和利用TALEN进行基因组定点修饰的策略,以及目前利用这一技术已成功实现突变的物种及内源基因,特别是在斑马鱼中的应用,为开展这一领域的研究工作提供参考。

急性脑梗死患者血清淋巴细胞过氧化小体增殖剂激活型受体γ、内皮素转换酶、可溶性骨髓细胞样转录因子-1水平变化及意义

目的探讨急性脑梗死(ACI)患者淋巴细胞过氧化小体增殖剂激活型受体γ(PPARγ)、血清内皮素转换酶(ECE)及可溶性骨髓细胞样转录因子-1(sTLT-1)的变化水平及临床意义。方法我院收治的ACI患者60例为研究组,同期健康体检者60例为对照组。将研究组按照美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分分为轻度、中度、重度3组。比较研究组与对照组血清PPARγ、ECE与sTLT-1水平差异,以及研究组各亚组血清PPARγ、ECE与sTLT-1水平差异;分析血清PPARγ、ECE、sTLT-1的表达水平与神经功能状况的相关性,以及PPARγ、ECE、sTLT-1表达水平对ACI患者神经功能重度损伤的临床预测价值。结果研究组PPARγ水平低于对照组,ECE、sTLT-1水平高于对照组(P<0.05);中重度组血清PPARγ水平低于轻度组,重度组低于中度组(P<0.05);中重度组血清ECE、sTLT-1高于轻度组,重度组高于中度组(P<0.05)。ACI患者NIHSS评分与血清PPARγ呈负相关,与ECE、sTLT-1呈正相关(P<0.01)。血清PPARγ为277.05 ng/L时,对ACI患者神经功能重度损伤预测价值最高,敏感性85.71%,特异性87.50%;其次为ECE,cut-off为74.27 pmol/L时,敏感性85.71%,特异性81.25%;sTLT-1含量为72.30 pg/ml时敏感性78.57%,特异性93.75%,约登指数为0.723。结论PPARγ、ECE与sTLT-1可反映ACI患者神经功能受损严重程度,当患者神经功能受损严重时PPARγ随之降低,ECE与sTLT-1水平随之升高。

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节及肾损伤的保护

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ激动剂对急性胰腺炎大鼠核转录因子-κB/Toll样受体4通路的调节以及肾损伤的保护作用。方法选择72只SD大鼠随机分为假手术组(SO组)、模型组(SAP组)和罗格列酮组(ROSI组),各组再随机分为术后6 h、12 h、24 h组,每组8只。SAP组采用两次腹腔注射L-精氨酸制备SAP模型,ROSI组30 min后股静脉注射10%罗格列酮溶液6 mg/kg,SO组腹腔注射等体积生理盐水。观察大鼠肾脏病理改变,测定肾脏TLR4、NF-κB蛋白表达水平,检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Cr含量。结果 ROSI组大鼠肾小管细胞病理损害较SAP组减轻;与SAP组比较,肾组织内NF-κB、TLR4蛋白明显下降(P<0.05);ROSI组外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和BUN、Cr含量与SAP组比较明显下降(P<0.05)。结论 PPAR-γ激动剂罗格列酮能减轻急性胰腺炎大鼠肾小管上皮细胞的损伤,同时抑制NF-κB、TLR4蛋白表达,降低促炎细胞因子水平,推测PPAR-γ激动剂对NF-κB/TLR4通路的调节可能是胰腺炎的保护机制之一。

类转录激活因子效应物及其在生物技术领域的应用

综述了类转录激活因子效应物(TALEs)技术的研究进展及生物技术应用前景,重点介绍TALEs的结构特征、作用机理、广谱抗性基因的人工构建及利用类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator like effector nucleases,TALENs)进行基因组定点修饰的策略。

类转录激活因子效应物核酸酶介导的E-cad和Bmi-1基因联合干预鼻咽癌的体外研究

目的:检测类转录激活因子效应物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-lymphoma Moloney murine leukemia virus insertion region-1,Bmi-1)基因联合干预对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法:构建多位点基因打靶载体p UC-DS1-E-cad-2ANeo-DS2(以下简称E-cad打靶载体)和p UC-DS1-Bmi-1 sh RNA-Zeo-DS2(以下简称Bmi-1打靶载体),将E-cad打靶载体、Bmi-1打靶载体及佛山科学技术学院分子医学研究院前期构建的TALEN载体以不同组合转染鼻咽癌CNE-2细胞。采用PCR检测靶基因的整合,Western印迹检测靶基因蛋白表达水平变化,细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力变化。结果:靶基因E-cad和Bmi-1 sh RNA表达元件成功整合到鼻咽癌CNE-2细胞的基因组中;转染后鼻咽癌CNE-2细胞中E-cad的蛋白表达水平明显上升,Bmi-1的蛋白表达水平明显下降;干预E-cad及Bmi-1不影响细胞的增殖、周期和凋亡,但显著抑制细胞的迁移和侵袭能力,且E-cad和Bmi-1联合干预比单独干预更能显著抑制鼻咽癌CNE-2细胞体外迁移能力(均P<0.01)。结论:TALEN介导的E-cad和Bmi-1联合干预能有效抑制鼻咽癌CNE-2细胞的体外迁移和侵袭,可为人类癌症的基因治疗建立前期的实验基础。

RNA干扰沉默信号转导和转录激活因子3对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰沉默信号转导和转录激活因子3(STAT3)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法取本院2012年2—12月行关节镜滑膜切除的RA患者的滑膜组织,先进行RA FLS培养。将FLS分为5组:空白组(正常培养的FLS)、阴性对照组(加入空白质粒的FLS)、RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组,后3个组均加入靶向小干扰RNA(siRNA)的重组质粒,分别针对3个不同的靶点。然后用反转录聚合酶链反应和免疫印迹法分别检测各组FLS中STAT3 mRNA及其蛋白的表达情况;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS增殖情况〔以490 nm处的吸光度(A)值代表活细胞数量〕。结果 (1)在转染RA FLS后,空白组、阴性对照组、RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组STAT3 mRNA表达抑制率分别为(27.32±2.06)%、(30.61±2.47)%、(76.99±2.05)%、(72.75±1.74)%和(66.50±2.47)%,STAT3表达抑制率分别为(44.35±2.04)%、(43.10±2.59)%、(83.57±1.56)%、(77.05±0.54)%和(69.44±2.76)%,5组STAT3 mRNA及其蛋白表达抑制率间差异均有统计学意义(F值分别为362.92和248.08;P<0.01);其中RNAi-1组、RNAi-2组和RNAi-3组STAT3 mRNA及其蛋白表达抑制率均高于空白组、阴性对照组(P<0.05)。(2)空白组、阴性对照组以及RNAi组(即RNAi-1组)A值分别为(0.553 3±0.343 2)、(0.535 0±0.337 3)和(0.158 3±0.079 4),3组间差异有统计学意义(F=3.761,P=0.047);其中空白组A值与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P=0.912);RNAi组A值均低于空白组、阴性对照组(P值分别为0.028和0.035)。结论 RNA干扰沉默STAT3能够有效抑制RA FLS中STAT3 mRNA及其蛋白的表达,并能明显抑制FLS的增殖。

基于类转录激活因子效应物(TALEs)的基因组定点操控技术

基于类转录激活因子效应物(transcription activator-like effectors,TALEs)的基因组定点操控技术能够对基因组功能体系的反向遗传操作于基因及转录水平进行精确操控。TALEs是来源于植物病原菌—黄单胞杆菌(Xanthomonas spp.)的DNA结合蛋白,其结合域通常由包含34个氨基酸残基的重复模块串联而成。根据编码规则,可人为重新编排重复模块顺序使其能够识别新的DNA序列。该人工设计TALEs对基因组的定点操控(包括转录调控和基因组编辑)已在体外培养的人类细胞和多种模式生物中得到了成功应用,为模式生物基因功能研究,农作物性状改善及人类遗传性疾病治疗等开辟了新时代。

环磷腺苷效应元件结合蛋白转录共激活因子在食管癌中的表达及与临床病理的关系

探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)转录共激活因子1(CRTC1)在食管癌组织与癌旁组织中的转录水平和翻译水平变化,及其变化与临床病理的关系。收集25例食管癌鳞癌患者的癌组织及与之配对的癌旁组织,通过qRT-PCR检测CRTC1的mRNA水平,Western blot检测CRTC1的蛋白水平。结果表明:在食管癌中,CRTC1蛋白表达低于癌旁组,而mRNA水平高于癌旁组;CRTC1在转录水平上与肿瘤位置和淋巴结转移有关。由此可见:CRTC1在食管癌中存在异常表达,CRTC1的mRNA有望用于食管癌诊断及淋巴结转移评估。

Janus激酶/信号转导子和转录激活因子通路与创伤脓毒症的关系

Janus激酶 /信号转导子和转录激活因子 (JAK/STAT )通路因其简单的构成模式和独特的激活方式而备受关注 ,它参与了多种早期细胞因子的信号转导及调控过程 ,其中尤以IFN γ、IL 1、IL 6、IL 10、IL 4与JAK/STAT活化关系密切。新近研究发现 ,JAK/STAT通路对脓毒症晚期介质———高迁移率族蛋白B1(HMGB1)表达亦具有明显的调节作用 ,抑制该信号转导途径可下调HMGB1的表达 ,有利于防止创伤脓毒症所致器官功能损伤的发生与发展。深入了解JAK/STAT转导机制对于进一步认识脓毒症时炎症及免疫反应失调具有重要意义 ,可望为脓毒症的防治开辟新的干预途径。

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3.1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.05)。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。结论MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。

米诺环素联合维他派克斯对慢性根尖周炎伴牙髓病患者的临床疗效及细胞因子的影响

目的研究米诺环素联合维他派克斯(vitapex)对慢性根尖周炎伴牙髓病患者的临床疗效及细胞因子的影响。方法112例慢性根尖周炎伴牙髓病患者随机均分为对照组(n=56,常规根管治疗)和观察组(n=56,对照组基础上采用米诺环素联合Vitapex治疗),治疗4周并随访8周,收集2组患者一般临床资料,比较2组患者治疗第4周的临床疗效;采用视觉模拟评分法(VAS)、口腔健康影响程度量表中文版(OHIP-14)评分评估2组患者治疗前及治疗第1、4、8周的口腔疼痛程度及口腔健康影响程度;采用牙周探针检测2组患者治疗前及治疗第4周的牙周指数[包括菌斑指数(PLI)、出血指数(BI)、牙周袋探诊深度(PD)及牙龈指数(GI)];取2组患者治疗前及治疗第4周患牙不可治愈的根尖周组织,采用免疫荧光双染法检测根尖周肉芽组织中Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)及细胞因子信号传导抑制因子3(SOCS3)的表达;取2组患者治疗前及治疗第4周的龈沟液,采用酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17及IL-23的水平。结果2组患者一般情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05);对照组患者治疗总有效率高于对照组(P<0.05);2组患者治疗第1、4、8周VAS评分较治疗前下降(P<0.05),观察组低于对照组且下降幅度更明显(P<0.001);2组患者治疗第1、4、8周OHIP-14评分较治疗前下降(P<0.05),观察组治疗后第4、8周低于对照组且下降幅度更明显(P<0.001);2组患者治疗第4周PLI、BI、PD、GI较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05);2组患者治疗第4周根尖周肉芽组织中JAK2、STAT3、SOCS3阳性细胞表达较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05);2组患者治疗第4周龈沟液中TNF-α、IL-1β、IL-17及IL-23水平较治疗前明显下降(P<0.001),且观察组低于对照组(P<0.05)。结论米诺环素联合Vitapex治疗慢性根尖周炎伴牙髓病患者有较好的临床疗效,可降低患者口腔疼痛感及口腔健康影响程度,改善牙周指数和JAK2、STAT3、SOCS3的表达及牙周炎症反应。

信号转导子与转录激活子3和细胞因子信号转导抑制因子-3蛋白在成年大鼠脊髓内的表达与定位

目的 分析JAK STAT信号转导途径重要成员STAT3蛋白和该途径抑制蛋白SOCS 3在大鼠脊髓内的表达和细胞内定位分布。 方法 免疫细胞化学技术和形态计量学方法。 结果 STAT3免疫阳性产物主要分布于脊髓前角运动神经元的胞浆内 ;SOCS 3免疫阳性产物广泛分布于脊髓前角及后角神经元内、部分胶质细胞及神经纤维内。在前角运动神经元内 ,SOCS 3免疫阳性产物主要分布于核内 ,有时也可分布于胞浆中。 结论 STAT3和SOCS 3广泛表达于正常大鼠脊髓内 ,其中SOCS 3具有核蛋白或胞浆蛋白两种存在形式。

转录激活因子5参与表没食子儿茶素没食子酸酯诱导的胰腺癌SW1990细胞凋亡

目的:研究转录激活因子5(ATF5)是否参与中国绿茶有效成分——表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导的人胰腺癌SW1990细胞凋亡。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的EGCG作用SW1990细胞不同时间后细胞的增殖情况;以100 mg/L EGCG作用SW1990细胞不同时间,观察细胞的形态学变化,并采用SR-VAD-FMK/7-AAD双染法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用RT-PCR检测100 mg/L EGCG作用不同时间后ATF5mRNA的表达变化。结果:EGCG可抑制胰腺癌SW1990细胞增殖,引起细胞皱缩,诱导细胞凋亡。随着EGCG作用时间的延长,细胞凋亡率显著提高(P<0.05),ATF5 mRNA的表达明显增强(P<0.05)。结论:胰腺癌SW1990细胞中存在ATF5的表达,在EGCG诱导的细胞凋亡过程中,ATF5表达量上升,提示ATF5参与EGCG诱导的细胞凋亡。

外周血单个核细胞锌指样转录因子2、锌指样转录因子4mRNA表达与脑梗死静脉溶栓预后的相关性分析

目的检测急性动脉粥样硬化性脑梗死(ACI)病人外周血单个核细胞锌指样转录因子家族(KLF)2、KLF4表达变化,并分析其与病人重组人组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)静脉溶栓后预后的关系。方法选取2016年4月至2018年4月郑州大学附属郑州中心医院就诊并接受rt-PA静脉溶栓治疗的ACI病人117例作为研究对象,并根据溶栓治疗结局将病人分为预后良好组和预后不良组。统计病人一般资料及24 h美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分。利用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测病人入院后及溶栓治疗24 h外周血单个核细胞KLF2、KLF4信使核糖核酸(mRNA)表达,酶联免疫吸附法(ELISA)法测定外周血白细胞介素(IL)-2、IL-6表达水平。结果与入院时比较,溶栓后24 h预后良好组病人外周血单个核细胞KLF2、KLF4 mRNA水平分别为(0.53±0.10)、(0.62±0.14)升高,外周血IL-2、IL-6表达水平分别为(4.08±0.85)、(4.19±0.74)降低(P<0.05),而预后不良组差异无统计学意义(P>0.05);与预后良好组比较,预后不良组病人入院时及溶栓后24 h外周血单个核细胞KLF2、KLF4 mRNA分别为(0.24±0.05)、(0.31±0.07)呈低表达,外周血IL-2、IL-6分别为(9.47±2.35)、(7.63±1.82)呈高表达(P<0.05);病人入院时外周血单个核细胞KLF2、KLF4 mRNA水平与90 d MRS评分负相关(r=-0.347、-0.349,均P<0.05);KLF2、KLF4 mRNA联合检测预测病人不良结局的AUC为0.970,灵敏度为85.90%,特异度为98.00%;logistic回归分析表明,入院时KLF2 mRNA≤0.36、KLF4 mRNA≤0.44、IL-2高表达、IL-6高表达、NIHSS评分>5分、糖尿病是溶栓治疗后ACI病人出现不良预后的危险因素(P<0.05)。结论预后不良病人入院时及溶栓后24 h外周血单个核细胞KLF2、KLF4 mRNA呈低表达,两者对急性动脉粥样硬化性脑梗死病人溶栓治疗90 d后结局具有一定预测价值。

先锋转录因子DUX4在人类胚胎合子基因组激活中的作用

总结近几年人类DUX4(double homeobox 4,DUX4)基因在细胞模型和早期胚胎基因组激活中的研究进展,发现先锋转录因子可与靶标基因的特定序列结合,诱导早期胚胎特异性染色质开放性建立及合子基因组激活(zygotic genome activation,ZGA),在母型-合子转换中发挥关键作用。探究先锋转录因子在人类早期胚胎ZGA中的作用,DUX4蛋白参与启动其他合子基因组激活基因的表达,可能是人类合子基因组激活的先锋转录因子,并对未来研究方向进行展望。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1通过糖原合成酶激酶-3β/信号转导和转录激活因子3通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞纤维化的研究

目的 探讨凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)通过糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路调控高糖诱导的心肌成纤维细胞(CFs)纤维化的相关机制。方法 分离、培养及鉴定CFs,构建LOX-1 RNAi慢病毒载体(LV-LOX-1)及慢病毒空载体(LV-Con)并感染CFs。将细胞分为正常对照(NC)组、25 mmol/L葡萄糖的高糖(HG)组、高渗(HPG)组、LV-LOX-1组和LV-Con组,LV-LOX-1及LV-Con感染CFs后加入HG培养24h,记为HG+LV-LOX-1组和HG+LV-Con组,分别使用10μmol/LSB216763和10μmol/L STATTIC处理HG+LV-LOX-1、HG+LV-Con组24h,记为HG+LV-LOX-1+SB216763组、HG+LV-Con+SB216763组、HG+LV-LOX-1+STATTIC组和HG+LV-Con+STATTIC组。CCK-8法检测CFs活力,q RT-PCR和Western blot法检测LOX-1、I型胶原(COL-I)、硫氧还蛋白5(TXNDC5)、GSK-3β、STAT3、p-GSK-3β、p-STAT3 mRNA和蛋白表达。结果 获得LV-LOX-1感染的CFs,荧光显微镜下呈绿色。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组LOX-1、COL-I、TXNDC5m RNA表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组COL-I、TXNDC5 mRNA表达降低(P<0.05)。与HG、HG+LV-Con组比较,HG+LV-LOX-1组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),LOX-1、p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-LOX-1组比较,HG+LV-LOX-1+SB216763组p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05),HG+LV-LOX-1+SB216763、HG+LV-LOX-1+STATTIC组p-STAT3、COL-I、TXNDC5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 LOX-1、GSK-3β、STAT3、TXNDC5、COL-I参与高糖诱导的CFs纤维化,LOX-1通过GSK-3β/STAT3通路促进TXNDC5和COL-I表达,抑制LOX-1可抑制高糖诱导的CFs纤维化。