烟草转录因子NtWRKY-R1的转录激活域鉴定

为确定烟草转录因子Nt WRKY-R1的转录激活域,本研究将Nt WRKY-R1的编码区分为7个不同片段,分别构建到酵母表达载体p GBKT7中与GAL4的DNA结合域融合,通过酵母双杂交试验确定,Nt WRKY-R1本身具有能够激活GAL4 BD转录起始的激活结构域,并将转录激活区定位于该转录因子蛋白肽链的N端75个氨基酸残基和C端80个氨基酸残基中。

陆地棉转录因子GhNAC78基因的特征及功能分析

本实验室从陆地棉中克隆得到GhNAC78,分析了其基因特征及功能。该基因cDNA全长为937 bp,开放阅读框为876bp,编码291个氨基酸,隶属于NAM转录因子亚家族。体外转录激活实验表明,GhNAC78具有转录激活活性。上游启动子区1537 bp序列的生物信息学分析可知其包含多种激素、胁迫和光响应元件,表明GhNAC78广泛地参与植物生长发育和胁迫响应的调控。荧光定量结果显示,GhNAC78在棉花叶片衰老过程中高调表达,推测其参与叶片衰老的调控。

PDZ结合域转录共激活因子在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中PDZ结合域转录共激活因子（TAZ蛋白）的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测56例结肠癌及对应癌旁组织中TAZ蛋白表达情况，比较不同病理特征患者TAZ的阳性表达率，并分析其表达与结肠癌患者生存预后的关系。结果TAZ蛋白表达主要定位于细胞核，其在结肠癌组织中的阳性率明显高于对应癌旁组织[73．2％（41／56）比12．5％（7／56），P=0．000]。TAZ蛋白在结肠癌组织中的表达与肿瘤大小（P=0．009）、浸润深度（P=0．026）、淋巴结转移（P=0．034）和TNM分期（P=0．002）有关。TAZ阴性表达患者5年生存率明显高于阳性表达患者（66．7％比22．9％，P=0．0017）。多因素回归分析显示，TAZ蛋白阳性表达是影响患者预后的独立因素[HR（95％CI）：3．532（1．266—9．858），P=0．016]。结论TAZ蛋白在结肠癌组织中的表达异常升高，且与结肠癌患者不良预后相关。

酵母双杂交系统的原理及应用

0引言 蛋白质和蛋白质的相互作用是很多生命现象的基础.随着分子生物学技术的发展,特别是人类基因组计划的完成,使人类对基因的结构和功能的认识不断加深,但基因编码的蛋白质的功能研究尚是一个难题.酵母双杂交(yeast two hybrid)技术是利用酵母遗传学方法分析蛋白质之间的相互作用,该方法建立以来,经过不断的完善和发展,不但可以检测已知蛋白质之间的相互作用,更重要的在于发现新的与已知蛋白相互作用的未知蛋白.

PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体的构建及其整合效率的检测

【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子载体PB-rtTA-NIT-STP和转座酶载体比只转染转座子载体获得的阳性克隆数提高了20倍。【结论】得到了基于PiggyBac转座子的可用于正负向筛选和诱导目的基因表达的转基因载体。

敲低转录共激活子对胶质瘤细胞生物学特性的影响

目的 研究敲低带PDZ结合域的转录共激活子（transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ）表达后对胶质瘤细胞株细胞生物学特性的影响.方法 采用TAZ小干扰RNA（TAZsiRNA）敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ表达,用实时定量聚合酶链式反应（real time-PCR） 及蛋白免疫印迹法（Western blot）分别鉴定转染后TAZ敲除效果,噻唑兰比色法检测两种细胞株的增殖能力变化;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;Western blot法检测凋亡、增殖及侵袭等相关蛋白的表达变化.结果 转染TAZ siRNA可显著敲低LN229和SNB19细胞株中TAZ mRNA及蛋白表达水平;两种细胞株中TAZ被抑制后,细胞增殖率均下降且呈逐渐下降趋势,而细胞凋亡率分别增高至（12.05±0.65）％和（8.02 ±0.66）％（LN229：F=414.2,P=0.000;SNB19：F=156.8,P=0.000）;两细胞株TAZ siRNA组细胞穿膜细胞数与对照组和无义序列组相比明显降低,划痕间隙融合能力也显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;Western blot法检测显示转染后细胞增殖核抗原（Kiel 67 antigen,Ki-67）、B淋巴细胞瘤2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP-9）等增殖、凋亡及侵袭相关蛋白表达明显下调.结论 敲低TAZ可抑制胶质瘤细胞株LN229和SNB19增殖和侵袭能力,提示TAZ可能成为治疗胶质瘤的新靶点.

疱疹病毒VP16研究进展

疱疹病毒VP16蛋白是疱疹病毒重要的皮层蛋白,参与病毒立即早期基因转录的激活、病毒在宿主细胞内的装配与释放等过程,与许多病毒蛋白和宿主蛋白都存在蛋白相互作用,且部分疱疹病毒VP16具有去泛素活性以及帮助病毒抵御宿主免疫的功能。本文将以疱疹病毒VP16蛋白的结构特点为基础来阐述VP16的功能及其复杂的相互作用,为深入研究疱疹病毒的成熟过程以及VP16涉及的相互作用提供参考。