信号转导及转录激活蛋白3与非酒精性脂肪性肝病

信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)被激活后转入细胞核内与特异性DNA结合,可影响基因转录,参与多种细胞的炎症、免疫反应、增殖与凋亡等过程。近年来大量国内外研究均发现非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)受STAT3信号通路的介导,目前的研究表明,STAT3基因缺失或过表达对NAFLD的发生发展有着重要影响。本文就STAT3与NAFLD发生发展的关系及其在NAFLD治疗中的作用研究进展做一综述。

基于白细胞介素-6/信号传导及转录激活蛋白3信号通路探讨长链非编码RNA-1614在乳腺癌骨转移中的调控机制

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)-1614和白细胞介素-6(IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号传导通路在乳腺癌骨转移患者的表达水平及其在潜在作用机制。方法回顾性分析2021年1月至2023年1月南昌市人民医院收治的25例乳腺癌骨转移患者的临床资料,检测并比较乳腺癌原发病灶肿瘤组织、乳腺癌原发癌癌旁组织、乳腺癌骨转移灶肿瘤组织、乳腺癌骨转移灶癌旁组织中LINC01614和IL-6、STAT3相对表达量,分析LINC01614与IL-6、STAT3相对表达量的相关性。选取SPF级健康雌性小鼠20只,进一步构建乳腺癌骨转移小鼠模型,获取模型小鼠骨转移灶组织作为模型组(n=10),同时,以正常健康小鼠作为对照组(n=10),检测并比较模型组与对照组乳腺癌骨转移肿瘤组织中LINC01614和IL-6、STAT3mRNA相对表达量。结果乳腺癌原发灶、乳腺癌骨转移灶癌组织中LINC01614相对表达量均高于乳腺癌原发灶、乳腺癌骨转移灶癌旁组织,且乳腺癌骨转移灶癌组织高于乳腺癌原发灶癌组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌骨转移灶癌组织中IL-6、STAT3相对表达量均高于乳腺癌骨转移灶癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌骨转移灶癌组织LINC01614相对表达量与IL-6、STAT3相对表达量均呈正相关(r>0,P<0.05)。乳腺癌骨转移模型组小鼠LINC01614及IL-6、STAT3的mRNA相对表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LINC01614在乳腺癌骨转移患者中表达水平异常升高,可能具有促进乳腺癌患者骨转移的作用,其作用机制可能与IL-6/STAT3信号传导通路的激活有关。

芹菜素对哮喘小鼠转录激活蛋白3及Th_2型细胞因子抑制作用的实验研究

目的研究芹菜素对哮喘小鼠2型辅助性T细胞(Th2)优势应答的抑制作用及其机制。方法选择32只6周龄SPF级BALB/c小鼠,随机分为4组,每组8只:正常组(A组)、哮喘组(B组)、芹菜素高剂量治疗组〔C组,20 mg/(kg.d)〕、芹菜素低剂量治疗组〔D组,2 mg/(kg.d)〕。卵白蛋白(OVA)致敏和激发制作哮喘模型。药物治疗组以芹菜素溶于1%二甲基亚砜(DMSO)腹腔注射。小鼠末次雾化吸入24 h后,用小鼠肺功能仪检测气道对乙酰胆碱(Ach)阻力;苏木精-伊红(HE)染色观察气道炎症浸润情况;支气管肺泡灌洗液(BALF)瑞氏染色计数嗜酸性粒细胞百分比;酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清总IgE、BALF液中Th2型细胞因子〔白细胞介素(IL)4、IL-13〕;免疫印迹(Western blot)测定肺组织中信号转导和转录激活蛋白3(GATA-3)表达水平。结果与正常组比较,哮喘组Ach气道阻力、气道炎症、BALF细胞计数和嗜酸性粒细胞分类计数、血清总IgE、BALF中IL-4、IL-13以及肺组织GATA-3蛋白表达明显增高(P<0.05)。与哮喘组比较,芹菜素治疗组各项指标均明显降低(P<0.05),而且高、低剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论芹菜素通过降低肺组织GATA-3和Th2细胞因子的表达而降低哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性,具有潜在的临床应用前景。

特异性敲除心肌白细胞介素⁃8抑制信号转导及转录激活蛋白3活化改善慢性心力衰竭小鼠心功能及炎症反应

目的研究特异性敲除心肌白细胞介素-8(interleukin⁃8,IL⁃8)抑制信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)活化改善慢性心力衰竭(CHF)小鼠心功能及炎症反应。方法野生型(WT)雄性小鼠分为WT对照组、WT模型组,心肌特异性IL⁃8敲除(KO)雄性小鼠分为KO对照组、KO模型组,采用腹主动脉缩窄法建立CHF模型。采用超声心动图及血清中N末端脑钠肽(BNP)前体评价心功能,检测白介素⁃1β(IL⁃1β)、干扰素⁃γ(IFN⁃γ)、肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)的水平,IL⁃8、p⁃STAT3的表达水平。结果WT模型组心肌中出现了CHF的病理改变,心功能弱于WT对照组,IL⁃1β、IFN⁃γ、TNF⁃α的水平及IL⁃8、p⁃STAT3蛋白表达水平均高于对照组(P<0.05);特异性敲除IL⁃8并进行CHF造模,KO模型组心肌中CHF病理改变明显减轻,心肌中不表达IL⁃8,心功能优于WT模型组,IL⁃1β、IFN⁃γ、TNF⁃α的水平及p⁃STAT3的蛋白表达水平均低于WT模型组(P<0.05)。结论心肌特异性IL⁃8敲除显著改善CHF小鼠的心功能及心肌炎症反应,抑制STAT3磷酸化活化是与之相关的分子机制。

白芍总苷通过白细胞介素-6/信号转导及转录激活蛋白3信号通路对脂多糖诱导的急性肺炎小鼠炎症反应的影响

目的探讨白芍总苷(TGP)通过白细胞介素-6/信号转导及转录激活蛋白3(IL-6/STAT3)信号通路对脂多糖诱导的急性肺炎小鼠炎症反应的影响。方法本研究起止时间为2019年10月至2020年2月。选择SPF级雄性小鼠50只,采用随机数字表法将小鼠随机分为五组,对照组、急性肺炎模型组、TGP低剂量组、TGP中剂量组和TGP高剂量组。采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织病理形态学;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β含量;采用蛋白质印迹(Western blotting)检测各组小鼠肺组织IL-6、STAT3、磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠肺组织IL-6、STAT3 mRNA表达水平。结果模型组小鼠肺组织结构被破坏,肺泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润;TGP药物组病理改变较模型组均存在不同程度改善,白芍总苷高剂量组肺组织仅存在少量炎性细胞浸润。与对照组(45.12±9.73)ng/L、(21.38±2.13)ng/L相比,模型组及TGP各剂量组小鼠肺组织TNF-α(89.30±9.26)ng/L,(84.32±5.08)ng/L,(75.36±4.67)ng/L,(64.06±5.90)ng/L、IL-1β含量(59.69±3.60)ng/L,(56.87±5.26)ng/L,(42.48±4.57)ng/L,(32.39±2.86)ng/L均升高(均P<0.05),IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达及IL-6、STAT3 mRNA表达水平均显著升高(均P<0.05)。与模型组相比,TGP中剂量组和TGP高剂量组小鼠肺组织TNF-α、IL-1β含量、IL-6、STAT3、p-STAT3蛋白表达及IL-6、STAT3 mRNA表达水平均显著降低(均P<0.05),而TGP低剂量组与模型组相比,小鼠肺组织各指标虽降低但差异无统计学意义(P>0.05)。结论TGP可有效降低LPS诱导的急性肺炎小鼠肺组织炎症水平,并抑制IL-6/STAT3信号通路的活化,进而改善肺组织损伤。

miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3减轻高氧性急性肺损伤

目的探讨miR21-5p调控转录激活蛋白STAT3在高氧性急性肺损伤(HALI)中的作用及机制。方法选择40只C57BL/6J小鼠随机分为常氧组、高氧组、高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组,吸入90%以上浓度氧气建立HALI小鼠模型。常氧组饲养于正常空气中;高氧+miR21-5p组及高氧+空载体组分别经气管导管滴入miR21-5p AAV6或空载体,饲养3周后建立HALI小鼠模型。高氧暴露48 h后,取肺组织采用ELISA试剂盒检测炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)和氧化应激标志物(SOD、MDA、ROS)水平;计算肺水含量;行HE染色观察形态学变化并行病理学评分;Tunel法检测肺组织细胞凋亡率;RT-PCR检测miR21-5p表达水平;Western blot检测STAT3、p-STAT3、Bax及Bcl-2蛋白相对表达水平。结果与常氧组比较,高氧组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平升高(P<0.05),MDA和ROS水平升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与高氧组比较,高氧+miR21-5p组肺损伤病理评分、肺水含量及肺组织细胞凋亡率降低(P<0.05),炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平降低(P<0.05),MDA和ROS水平降低(P<0.05),SOD水平升高(P<0.05),STAT3、p-STAT3及Bax蛋白表达降低(P<0.05),高Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05)。高氧组HE染色可见肺泡结构紊乱、间隔增厚,大量炎症细胞浸润,透明膜形成及肺泡萎陷,高氧+miR21-5p组HE染色结果显示肺损伤程度明显减轻。结论miR21-5p靶向转录激活蛋白STAT3活性抑制炎症反应及凋亡并维持氧化还原平衡减轻HALI。

两面神激酶2-信号传导及转录激活蛋白3信号通路在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎中的作用

目的探讨两面神激酶2-信号传导及转录激活蛋白3(JAK2-STAT3)信号转导通路在先天性巨结肠相关性小肠结肠炎发病中的作用。方法2019年2月至11月选择21 d龄内皮素受体B(Ednrb)基因敲除小鼠(先天性巨结肠模型鼠)作为实验组(12只),相应日龄野生型小鼠作为对照组(12只)。基因敲除小鼠(背景B6:129)由美国俄亥俄州立大学全国儿童医院捐赠,并在华中科技大学同济医学院动物实验中心培育、繁殖。收集结肠标本,依据形态将实验组小鼠结肠分为狭窄段及扩张段,对照组小鼠肠管相应分为结肠远、近段。苏木精-伊红(HE)染色法判断肠管炎症程度;酶联免疫吸附法(ELISA)进行定量分析各组结肠标本中白细胞介素(IL)-10的表达量;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组结肠标本磷酸化两面神激酶2(p-JAK2)、JAK2、磷酸化信号传导及转录激活蛋白3(p-STAT3)、STAT3的蛋白表达水平;实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测JAK2、STAT3的mRNA水平。组间比较采用t检验。结果Western blot结果发现先天性巨结肠模型鼠(Ednrb-/-小鼠)狭窄段肠管JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3表达水平较扩张段明显升高,差异有统计学意义(狭窄段:0.791±0.108、0.438±0.059、0.327±0.028、0.858±0.091,扩张段:0.479±0.109、0.206±0.024、0.297±0.013、0.579±0.102,t=7.074、12.679、3.428、7.096,P值均<0.05)。RT-qPCR检测显示Ednrb-/-小鼠结肠狭窄段JAK2、STAT3的mRNA表达水平高于扩张段,差异有统计学意义(狭窄段:0.427±0.042、0.272±0.044,扩张段:0.234±0.031、0.127±0.014,t=12.820、10.836,P值均<0.05)。ELISA显示Ednrb-/-小鼠扩张段肠管的IL-10的表达量下降,而狭窄段肠管升高,差异有统计学意义(狭窄段:2.540±0.710,扩张段:1.330±0.350,t=5.284,P<0.05)。结论先天性巨结肠小鼠模型扩张段炎症重,而狭窄段炎症较轻,其机制与JAK2-STAT3信号转导通路被抑制和激活有关。

敲减跨膜蛋白16A激活信号传导及转录激活蛋白3表达抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的研究

目的 通过研究敲减跨膜蛋白16A(TMEM16A)对卵巢癌增殖迁移及生存率的影响,并初步探讨其抑制卵巢癌的作用机制。方法 从The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中下载卵巢癌的基因转录数据及临床信息,根据TMEM16A和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达的中位值将患者分为高表达组和低表达组,应用Kaplan-Meier法进行生存分析。将卵巢癌SKOV3细胞分为阴性对照组[转染空载质粒(scrambled shRNA)]和敲减组[转染靶向TMEM16A特异性shRNA(TMEM16A shRNA)]。用细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖情况,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,用蛋白质印迹法检测细胞TMEM16A和STAT3蛋白的表达情况。结果 Kaplan-Meier生存分析显示TMEM16A高表达卵巢癌患者预后生存期显著降低,STAT3高表达卵巢癌患者预后生存期显著降低,TMEM16A与STAT3共同高表达组总生存显著低于共同低表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。卵巢癌SKOV3细胞阴性对照组和敲减组的细胞增殖率分别为(100.00±0)%和(54.12±4.01)%,迁移率分别为(84.89±0.04)%和(47.18±0.02)%,TMEM16A蛋白表达水平分别为0.79±0.12和0.11±0.08,磷酸化STAT3蛋白表达水平分别为0.69±0.09和0.18±0.06。阴性对照组的上述指标与敲减组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),说明敲减TMEM16A后磷酸化STAT3蛋白表达水平降低。结论 敲减TMEM16A激活STAT3信号通路可以抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖和迁移。

STAT3信号通路在神经退行性疾病中的研究进展

信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路是机体重要的信号通路,大量体内外研究显示该通路与神经退行性疾病密切相关,其激活引发的神经炎症等在疾病的发生发展中起着重要作用。在阿尔茨海默病和帕金森病中,多项生理生化研究显示STAT3信号通路在患者体内激活并与多项病理特征存在潜在联系,但其具体作用还存在争议;关于STAT3在其他神经退行性疾病(如血管性痴呆、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、多发性硬化)的病理生理作用的研究较少,大多集中于药效研究,有待进一步探索发现。本文对STAT3信号通路在神经退行性疾病中的作用进行综述,并列举靶向STAT3药物的最新研究进展,旨在为治疗该类疾病提供有潜力的新靶点。

瘦素对牦牛乳腺上皮细胞中SOCS3和STAT3蛋白表达的影响及催乳素的作用

[目的]本文旨在了解瘦素(LEP)对牦牛乳腺上皮细胞(YMEC)中细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)和信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)蛋白表达的作用特点及催乳素(PRL)对LEP功能发挥可能产生的影响。[方法]以牦牛乳腺上皮细胞为载体,以添加和不添加催乳素(500 ng·mL^(-1))为前提,用不同剂量瘦素(0、50、100、200、400、800 ng·mL^(-1))作用YMEC 48 h以及添加JAK2/JAK3信号通路阻滞剂AG490作用48 h,采用Western blot技术检测SOCS3和STAT3蛋白的相对表达水平及STAT3蛋白磷酸化水平。[结果]无催乳素时,除50 ng·mL^(-1)瘦素外,其余各剂量均抑制SOCS3蛋白的表达,而各浓度LEP均抑制STAT3蛋白的表达,STAT3蛋白磷酸化水平高于蛋白表达水平。有催乳素时,SOCS3蛋白除了在100 ng·mL^(-1)LEP下被抑制之外,其余各剂量均有促进作用;800 ng·mL^(-1)LEP对STAT3蛋白表达有显著抑制作用,STAT3磷酸化水平除100 ng·mL^(-1)组外,均有所升高。添加AG490之后,SOCS3与STAT3都主要是通过JAK2激活诱导。[结论]高浓度瘦素会抑制SOCS3及STAT3蛋白的表达,瘦素主要通过JAK2/STAT3通路发挥生理功能,而SOCS3是JAK2/STAT3通路的负反馈调节因子;PRL能够缓解高浓度LEP导致的瘦素抵抗作用,并且能促进SOCS3和STAT3蛋白的表达。

基于IL-6/JAK2/STAT3信号通路探讨灰树花提取物对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织炎症反应的影响

目的:探讨灰树花提取物通过调控白细胞介素6(IL-6)/蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和激活因子3(STAT3)信号通路,对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织炎症反应的影响及作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白对照组、UC模型组、灰树花治疗组、西药治疗组、联合治疗组,每组8只。采用3%DSS自由饮用法7 d建立UC大鼠模型后,治疗组分别灌胃灰树花提取物10 mg/(kg·d)、柳氮磺吡啶0.3 g/(kg·d)及等量两种药物,连续14 d。实验期间观察大鼠一般状态,计算疾病活动指数(DAI)评分;采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理改变;Western blot检测大鼠结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、pSTAT3蛋白表达水平;ELISA检测大鼠血清中IL-6含量;免疫组化法测定大鼠结肠组织中IL-6R、MPO蛋白含量及表达情况。结果:与空白对照组比较,UC模型组大鼠一般状态欠佳,DAI评分升高,HE染色可见明显的组织黏膜损伤与炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平及IL-6R、MPO含量均显著升高(P<0.01);血清中IL-6含量显著升高(P<0.01),差异有统计学意义。与UC模型组比较,各治疗组大鼠的一般状态均有所改善,DAI评分降低,HE染色可见黏膜损伤有不同程度改善,偶见炎症细胞浸润;结肠组织IL-6、JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.01),结肠组织IL-6R和MPO含量及血清中IL-6含量均明显减少(P<0.01或P<0.05),差异有统计学意义。结论:灰树花提取物可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路相关因子表达,减轻UC大鼠结肠组织炎症反应。

子宫内膜癌组织中STAT3 ADAMTS19的表达及与病理参数和预后的关系

目的:探讨子宫内膜癌(EC)组织中信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)、A解聚素和金属蛋白酶及血小板反应蛋白基序19(ADAMTS19)的表达及与病理参数和预后的关系。方法:选取我院2018年1月至2020年12月接受手术切除的EC患者82例,采用免疫组织化学法检测EC组织及癌旁组织STAT3、ADAMTS19表达。采用Phi相关系数分析EC组织中STAT3、ADAMTS19表达的相关性。根据EC组织STAT3、ADAMTS19表达分为STAT3、ADAMTS19阳性/阴性表达组,采用Kaplan-Meier法绘制STAT3、ADAMTS19阳性/阴性表达EC患者生存曲线,并通过Cox回归分析影响EC患者预后的因素;绘制ROC曲线评价癌组织STAT3、ADAMTS19表达对EC患者死亡的预测价值。结果:与癌旁组织比较,EC组织STAT3阳性表达率升高,ADAMTS19阳性表达率降低(P<0.05)。EC组织中STAT3与ADAMTS19表达呈负相关(φ=-0.443,P<0.001)。STAT3、ADAMTS19表达与EC患者国际妇产科联盟(FIGO)分期、肌层浸润深度、分化程度和淋巴结转移有关(P<0.05)。82例EC患者3年总生存率为69.51%(57/82)。STAT3阳性表达组3年总生存率60.71%低于STAT3阴性表达组88.46%,ADAMTS19阳性表达组3年总生存率88.89%高于ADAMTS19阴性表达组64.06%(P<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、肌层浸润深度≥1/2、低分化、淋巴结转移、STAT3阳性为EC患者死亡的独立危险因素,ADAMTS19阳性为独立保护因素(P<0.05)。癌组织STAT3、ADAMTS19表达联合预测EC患者死亡的曲线下面积为0.860,大于癌组织STAT3、ADAMTS19表达单独预测的0.758、0.750(P<0.05)。结论:EC组织STAT3高表达、ADAMTS19低表达,二者表达呈负相关,与FIGO分期、肌层浸润深度、分化程度、淋巴结转移和预后有明显的相关性,且STAT3、ADAMTS19表达联合对EC患者预后有较高预测价值。

针灸调控STAT3和CyclinD1改善DDP小鼠肝损伤的作用机制

目的:通过观察针刺和艾灸对顺铂(DDP)所致肝损伤小鼠肝脏中信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达的变化,以及血清中谷氨酸脱氢酶(GLDH)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性变化,并结合小鼠肝脏超微病理,阐释针灸对DDP所致肝损伤小鼠的保护机制。方法:选用40只清洁级雄性KM小鼠,随机分为4组,空白组按照0.01 mL/g腹腔注射0.9%NaCl溶液,模型组、针刺组、艾灸组按照体质量腹腔注射同剂量DDP溶液,24 h后模型成功。治疗组配伍腧穴“大椎”“肝俞”“肾俞”“足三里”,分别给予针刺和艾灸治疗,其余2组陪同固定不治疗,1次/d,持续5 d。断食24 h后取材,生化检测血清中GLDH、ALT、AST活性,Western Blot测定肝脏中STAT3、CyclinD1蛋白表达量,电镜下观察肝脏超微病理变化。结果:与空白组比,模型组GLDH、ALT、AST活性升高,STAT3蛋白表达升高,CyclinD1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,针刺组和艾灸组GLDH、ALT、AST活性降低,STAT3蛋白表达降低,CyclinD1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05),针刺组与艾灸组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺和艾灸可能通过调控肝脏中STAT3和CyclinD1蛋白的表达,促进肝脏细胞的增殖和分化,降低DDP所致肝损伤,对肝脏起到有效的保护作用。

LIF/LIFR/STAT3通路在多囊卵巢综合征大鼠的子宫内膜容受性中的作用

目的探讨白血病抑制因子/白血病抑制因子受体/信号转导和转录激活因子3(LIF/LIFR/STAT3)通路在多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)大鼠的子宫内膜容受性中的作用。方法将40只21日龄SD雌性大鼠平均分为正常(control)组、模型(model)组、假手术(sham-operation)组及LIF组,每组10只。颈后皮下注射硫酸普拉睾酮钠用于建造PCOS大鼠模型。检测每组大鼠血清中睾酮(T)、葡萄糖和胰岛素水平;HE染色观察各组大鼠子宫形态及内膜变化;免疫组化、Western blotting及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定大鼠子宫内膜中LIF及STAT3的蛋白及mRNA表达,用Mann Whitney-U检验或t检验统计分析。结果与control组相比,PCOS大鼠的整合素avb3、血清T、胰岛素及葡萄糖水平明显升高(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.001),补充外源性LIF可明显降低PCOS大鼠的整合素avb3、血清T、葡萄糖及胰岛素水平(P=0.000,P=0.002,P=0.003,P=0.007)。HE结果显示,外源性LIF可改善PCOS大鼠的宫腔及腺体形态,并可增加大鼠子宫腺体及腺腔的等效直径(P=0.000,P=0.000)和面积(P=0.000,P=0.000)、腺间质面积比(P=0.000)及子宫内膜平均厚度(P=0.006),差异具有统计学意义。免疫组化、Western blotting及qRT-PCR结果显示,与control组相比,model组中LIF及p-STAT3蛋白及mRNA表达明显降低;与model组比较,LIF组中LIF及p-STAT3蛋白及mRNA表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论外源性补充LIF可改善PCOS大鼠的子宫内膜容受性,其作用机制与LIF/LIFR/STAT3通路有关。

苗药白龙须对RA滑膜细胞STAT-3/IL-17炎症通路的影响

目的:观察苗药白龙须对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(RA-FLS)增殖及STAT-3相关炎症通路的影响,揭示白龙须对RA滑膜炎症的调控机制。方法:培养3~5代RA-FLS细胞,分为空白组(胎牛血清)、正常组(正常兔血清)、雷公藤多苷(TG)组、来氟米特(LEF)组、白龙须低剂量组、白龙须中剂量组和白龙须高剂量组,按各组剂量加含药血清培养,用CCK8法检测各组RA-FLS增殖抑制率的差异,ELISA法检测RA-FLS与CD4+T细胞共培养上清液中炎症细胞因子IL-6、IL-17、IL-23和TNF-α浓度,蛋白印迹法(Wersten Blots)检测RA-FLS中pSTAT-3、SOCS-3的蛋白表达。结果:白龙须能够抑制RA-FLS的增殖,降低共培养体系细胞上清中IL-6、IL-17、IL-23、TNF-α等4种炎症细胞因子的浓度,降低RA-FLS中pSTAT-3的表达量,同时上调SOCS-3蛋白表达。结论:白龙须可能通过抑制STAT-3/IL-17炎症通路的活化发挥抗炎作用,抑制RA-FLS持续性增殖。

红景天甙对结肠癌细胞微管形成与炎症应答及JAK2/STAT3磷酸化的影响

目的:探讨红景天甙对结肠癌细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制。方法:以不同浓度的红景天甙处理结肠癌细胞SW480,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞划痕愈合率,微管形成实验检测微管形成数目,RT-qPCR和ELISA法检测炎症因子水平,免疫印迹检测血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)和磷酸化信号转导及转录激活蛋白3(p-STAT3)蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,2.50 mmol/L红景天甙组SW480细胞各项指标均无明显差异,5.00 mmol/L和10.00 mmol/L红景天甙组SW480细胞凋亡率、侵袭能力和运动能力均显著降低,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素(IL)-1β水平显著降低,IL-10水平显著增高,VEGF和JAK2/STAT3磷酸化水平显著降低。添加JAK2/STAT3磷酸化抑制剂FLLL32后,与FLLL32组比较,FLLL32+5.00 mmol/L红景天甙组细胞凋亡率显著增加,细胞侵袭和运动能力显著降低,iNOS和IL-1β水平显著降低,IL-10水平显著增高,VEGF、p-JAK2和p-STAT3磷酸化水平显著降低。结论:红景天甙对结肠癌细胞的恶性生物学行为具有调节作用,其作用机制可能与下调JAK2/STAT3磷酸化水平有关。

葛根素对脑缺血再灌注大鼠海马组织P-STAT3、P53表达的影响

目的探讨葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马组织磷酸化的转录激活蛋白3(STAT3)、凋亡因子P53表达的影响及其保护机制。方法采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,利用葛根素干预,分别于缺血2 h再灌注6 h、24 h、72 h 3个不同时间点采用Longa评分法进行神经功能缺损评分、TUNEL法检测凋亡细胞数,免疫组织化学法检测海马组织磷酸化的STAT3(P-STAT3)及细胞凋亡因子P53的表达。结果与假手术组比较,葛根素组与缺血再灌注组的神经功能缺损加重,凋亡细胞数增多,P-STAT3和P53表达增高,差异均具有统计学意义(P<0.05);与缺血再灌注组比较,葛根素组神经功能缺损评分明显下降,凋亡阳性细胞数均见明显减少,P-STAT3和P53表达显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后STAT3被异常激活,其磷酸化水平显著增高;葛根素可能是通过抑制STAT3的磷酸化水平,降低P53的表达起到抗神经细胞凋亡作用,从而改善大鼠脑组织的缺血性损伤。

槲皮素对乳腺癌细胞的影响及作用机制实验研究

目的:探讨槲皮素对乳腺癌细胞的影响及其作用机制。方法:将人乳腺癌MDA-MB-231细胞分为空白对照组(无药物干预)、低、中及高剂量槲皮素组(分别加入10、20、40μmoL/L槲皮素共培养)和顺铂组(加入3 mg/L顺铂共培养)。显微镜下观察各组细胞形态。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。免疫印记实验检测细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)、信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)表达。结果:空白对照组MDA-MB-231细胞呈不规则状生长,分布较紧密。低、中剂量槲皮素组MDA-MB-231细胞间隙变大,数目减少,细胞质变浑浊,而高剂量槲皮素组及顺铂组MDA-MB-231细胞形态呈片状球形,并出现肿胀破裂且数目减少。与空白对照组比较,低、中及高剂量槲皮素组MDA-MB-231细胞侵袭数目、划痕距离、STAT3水平降低,凋亡率、SOCS1水平升高(均P<0.05)。低、中及高剂量槲皮素组MDA-MB-231细胞侵袭数目、划痕距离、STAT3水平依次降低,凋亡率、SOCS1水平依次升高(均P<0.05)。高剂量槲皮素组与顺铂组细胞侵袭数目、划痕距离、凋亡率及STAT3、SOCS1水平比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:槲皮素能够抑制乳腺癌细胞侵袭和转移,促进细胞凋亡,其机制可能与上调SOCS1、抑制STAT3表达有关。

丙泊酚和瑞马唑仑对前列腺癌细胞增殖的影响

目的探讨丙泊酚和瑞马唑仑对前列腺癌细胞增殖的影响及相关机制。方法选择人前列腺癌细胞系DU145和PC3,培养至对数生长期。将细胞随机分为四组:对照组(C组)、丙泊酚组(P组)、瑞马唑仑组(R组)和丙泊酚复合瑞马唑仑组(PR组)。C组用完全培养基培养,P组和R组分别在完全培养基中加入丙泊酚和瑞马唑仑的半数抑制浓度(IC_(50))培养(DU145和PC3细胞中丙泊酚的IC_(50)分别为120μg/ml和100μg/ml,瑞马唑仑的IC_(50)分别为500μmol/L和400μmol/L),PR组DU145细胞加入低浓度丙泊酚100μg/ml和瑞马唑仑400μmol/L共培养,PC3细胞加入低浓度丙泊酚80μg/ml和瑞马唑仑300μmol/L共培养。于培养后0、6、12、24、36 h采用CCK-8法测定待检测孔的吸光度。于培养后14 d采用平板克隆形成实验计算集落数量。采用qPCR法和Western blot法检测c-Myc和cyclin D1 mRNA表达量和蛋白含量。通过网络药理学分析找出丙泊酚和瑞马唑仑作用于前列腺癌细胞的关键靶基因,并采用qPCR法和Western blot法检测该靶基因的mRNA表达量和蛋白含量。结果与C组比较,DU145和PC3细胞P组、R组和PR组培养后36 h吸光度均明显降低、集落数量明显减少、c-Myc和cyclin D1 mRNA表达量和蛋白含量明显降低(P<0.05)。与P组比较,DU145细胞R组和PR组培养后36 h吸光度、cyclin D1 mRNA表达量明显降低,R组c-Myc mRNA表达量明显升高,PR组集落数量明显减少、c-Myc蛋白含量明显降低(P<0.05);PC3细胞R组cyclin D1 mRNA表达量和蛋白含量明显降低,PR组培养后36 h吸光度明显降低、c-Myc和cyclin D1 mRNA表达量和蛋白含量明显降低(P<0.05)。与R组比较,DU145和PC3细胞PR组集落数量明显减少,c-Myc mRNA表达量和蛋白含量明显降低(P<0.05)。网络药理学分析结果显示:丙泊酚、瑞马唑仑与前列腺癌的共同靶点为信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)。与C组比较,DU145和PC3细胞P组、R组和PR组STAT3 mRNA表达量和蛋白含量明显降低(P<0.05)。与P组比较,DU145细胞R组STAT3 mRNA表达量和蛋白含量明显升高,PR组STAT3蛋白含量明显升高(P<0.05);PC3细胞R组STAT3 mRNA表达量明显降低(P<0.05)。与R组比较,DU145细胞PR组STAT3蛋白含量明显降低(P<0.05)。结论丙泊酚和瑞马唑仑可以单独或协同抑制前列腺癌细胞增殖,降低前列腺癌细胞c-Myc和cyclin D1 mRNA表达量和蛋白含量,其机制可能与抑制HIF-1α通路中的STAT3靶点有关。

长链非编码RNA H19在小鼠溃疡性结肠炎相关结直肠癌发病过程中的作用研究

目的探讨小鼠溃疡性结肠炎相关结直肠癌(CAC)发病过程中,长链非编码RNA H19(H19)的表达和意义。方法将30只C57BL/6小鼠随机分成对照组和观察组。观察组小鼠用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠方式共同造模。对照组小鼠在相同时间给予腹腔内注射无菌生理盐水,同时饮用洁净水。第71天处死小鼠,比较两组小鼠结肠组织中H19、mRNA let-7a(let-7a)、p-Janus激酶2(p-JAK2)、p-转录激活因子3(p-STAT3)表达量的差异。结果观察组小鼠结肠组织中H19 mRNA表达量高于对照组(P<0.05),观察组小鼠结肠组织中let-7a mRNA表达量低于对照组(P<0.05)。观察组小鼠结肠组织中p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论H19在小鼠结肠癌组织中的高表达伴随着STAT3表达增加,对CAC发病起到了推动的作用。