MicroRNA-486和TGF-β_1对人主动脉瓣膜钙化的影响及其机制研究

目的研究microRNA-486(miRNA-486)对人主动脉瓣膜间质细胞(VICs)钙化的影响及作用机制。方法体外培养VICs,经成骨诱导后用双荧光素报告基因检测miRNA-486靶基因。转染miR-486mimic、miR-486 Inhibitors后,将细胞分为miR-486 mimic组、miR-486 mimic NC组、miR-486 Inhibitors组、miR-486 Inhibitors NC组。采用茜红素染色、ALP试验分析各组钙化程度,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫荧光试验检测miR-486靶基因及成骨相关因子mRNA和蛋白的表达水平。结果双荧光素报告基因检测和Western blot检测结果显示,转录生长因子-β_1(TGF-β_1)为潜在靶基因。茜红素染色、ALP试验结果显示,miR-486 mimic组钙化程度高于miR-486 Inhibitors组。qRT-PCR、免疫荧光试验结果表明,miR-486 mimic组TGF-β_1、SMAD3 mRNA和蛋白表达水平较低(P<0.05);miR-486 mimic组RUNX2、骨钙素mRNA表达水平较miR-486 Inhibitors组高(P<0.05)。结论 miR-486可通过下调TGF-β_1的表达,促进RUNX2、骨钙素的表达和活性,诱导间质细胞向成骨细胞分化。

糖尿病大鼠肾组织TGF-β1和CTGF的表达及来氟米特的干预作用

目的研究糖尿病肾损伤大鼠模型TGF-β1、CTGF的表达及来氟米特的干预作用,进一步探讨来氟米特对糖尿病大鼠的保护作用及可能机制。方法 36只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:①对照组;②模型组;③来氟米特干预组。摘除右肾后,模型组与来氟米特组分别以链脲佐菌素(STZ):40mg/kg腹腔注射,对照组腹腔注射等量柠檬酸缓冲液。来氟米特组在成模后以5mg/kg每日灌胃。于8周、12周末测24h尿量及24h尿蛋白定量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);HE、PAS染色光镜观察肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、CTGF蛋白的表达。结果免疫组化结果显示:模型组大鼠肾组织TGF-β1、CTGF的表达明显增加,而经来氟米特治疗后表达显著减少,与同期模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论来氟米特对糖尿病大鼠具有一定肾脏保护作用及抗肾小球纤维化的作用,其作用机制可能是通过下调TGF-β1、CTGF的表达而实现的。

胃癌患者外周血Th17细胞相关因子检测及其临床意义

目的探讨检测外周血Th17细胞相关因子在胃癌患者中的意义。方法将我院收治的86例胃癌患者纳入胃癌组,并根据胃癌分期标准分为早期胃癌组46例和中晚期胃癌组40例,将同期35例健康体检者纳入对照组。检测所有研究对象的血清IL-17、IL-21、IL-23及TGF-β1水平。结果胃癌组患者的血清IL-17、IL-21、IL-23及TGF-β1水平均明显高于对照组(P<0.01);早期胃癌组患者血清IL-17、IL-21、IL-23及TGF-β1水平均明显低于中晚期对照组患者(P<0.01)。结论胃癌患者血清IL-17、IL-21、IL-23及TGF-β1等Th17细胞相关因子明显升高,且随着病情的进展,Th17细胞相关因子水平持续升高,因此检测Th17细胞相关因子水平有助于疾病进展的判断。

大黄[庶虫]虫丸经p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路抑制小鼠硅肺纤维化的机制探讨

目的:运用中医经方大黄[庶虫]虫丸干预小鼠硅肺纤维化模型,观察其对小鼠硅肺纤维化的影响并探讨其作用机制。方法:选用SPF级雄性昆明种小鼠36只,分为正常组,模型组,大黄?虫丸高、中、低剂量(1.560,0.780,0.390 g·kg^(-1))组,汉防己甲素组(0.039 mg·kg^(-1)),每组6只。除正常组外,其余组均用静式染毒法连续40 d吸入二氧化硅(SiO2)粉尘复制小鼠硅肺纤维化模型,并用相应药物进行干预28 d后处死小鼠,获得血清和肺组织样品,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL^(-1)β),IL-6和羟脯氨酸(HYP)的含量,运用肺组织样本进行病理切片观察,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测肺组织中p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),核转录因子-κB(NF-κB),转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Smad2,Smad3,Smad7的蛋白和mRNA的表达水平。结果:与正常组比较,模型组中的TNF-α,IL^(-1)β,IL-6和HYP的含量均明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,大黄[庶虫]虫丸高剂量组能够明显降低小鼠血清中TNF-α,IL-6和HYP的含量(P<0.05,P<0.01),可见大黄[庶虫]虫丸能够减轻硅肺小鼠肺部炎症。同时,与正常组比较,模型组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均显著降低(P<0.01);与模型组比较,大黄?虫丸高剂量组中的p38 MAPK,NF-κB p65,TGF-β1,α-SMA,Smad2和Smad3蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.05,P<0.01),Smad7蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:大黄[庶虫]虫丸能改善硅肺小鼠肺泡炎症、细胞外基质沉积的情况,因而起到减轻纤维化的作用,这可能是通过调节p38 MAPK/NF-κB/TGF-β1通路来实现的。

公共数据库GEO分析TGFB1I1在胃癌中表达及临床意义

目的利用在线表达谱芯片数据,探讨转化生长因子-β1诱导转录蛋白1(TGFB1I1)在胃癌中的表达情况与临床病理学参数的关系,评价TGFB1I1对胃癌的预后价值。方法利用GEO数据库的胃癌数据集GSE62254和K-M plotter数据库,分析TGFB1I1表达与临床病理参数的相关性及预后。采用基因集富集分析(GSEA)预测TGFB1I1在胃癌中调控的相关基因。结果 TGFB1I1在GSE62254中的表达与性别、年龄无关;与肿瘤浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、肿瘤分期(P<0.01)、Lauren分型(P<0.01)显著相关。TGFB1I1的表达与胃癌患者的复发和死亡显著相关(P<0.01)。K-M plotter数据库进一步验证,TGFB1I1高表达患者生存期更短(P<0.01)。TGFB1I1高表达的肿瘤样本中富集到粘着斑、细胞外基质受体、钙通路及细胞间隙连接等基因通路。结论利用在线数据库,发现TGFB1I1的表达与胃癌的预后不良临床参数显著相关,TGFB1I1高表达的患者预后更差,并且可以调控细胞粘附、转移相关的分子通路。

周期性张力对骨髓间充质干细胞分化的血管平滑肌细胞的表型调节

目的 探讨周期性张力对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）诱导分化的血管平滑肌细胞（VSMCs）的表型的调节机制.方法 原代全骨髓法培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞.作成脂、成骨、成平滑肌细胞方向诱导,验证BMSCs的多向分化潜能.将细胞分为4组：A组用含10 μg/L转化生长因子-β1（TGF-β1）的完全培养基培养,B组用幅度10％、频率1 Hz周期性张力诱导,C组采用TGF-β1＋周期性张力联合诱导,D组用含10％胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基培养作对照.3d后观察诱导后的细胞形态,并行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肌动蛋白（α-actin）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）、钙调节蛋白1（calponin1）、钙调节蛋白3（calponin3）的mRNA表达水平,Western blot观察细胞内α-actin、SM-MHC、calponin1、calponin3蛋白表达水平.结果 经流式细胞术鉴定,所培养细胞为BMSCs.诱导3d后,A、B、C3组的VSMC标志物均较D组明显升高,以SM-MHC和calponin3增加为主.A组（0.919 2±0.028 1）较B组（0.823 6±0.024 6）的SM-MHC蛋白表达水平高,但低于C组（1.043 1±0.090 7）,其差异均有统计学意义（P＜0.05）.C组中calponin3 mRNA表达量比蛋白表达量变化更明显,而calponin1蛋白表达量和mRNA表达量同步增高.结论 周期性张力能够诱导BMSCs分化为VSMCs,对分化的VSMCs的表型调节还需要细胞因子的参与.