目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊...目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊毛乳头部位的表达情况。采用按基因组序列设计的引物,通过PCR克隆人SFRP1启动子片段,将之插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建不同截短片段的重组质粒并瞬时转染毛乳头细胞,测定质粒在毛乳头细胞中的启动子活性,找到核心启动子区域,运用生物信息学方法预测其潜在的转录因子结合位点。结果:免疫组化结果显示AGA患者毛乳头中SFRP1表达量显著高于非AGA患者。经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人SFRP1启动子及其截短片段重组质粒,并确定其启动子活性区域位于-100~+50bp区域内,且可能含有E2F3、HIF1A::ARNT、FOXC1、SP1等转录因子结合位点。结论:SFRP1在AGA患者毛乳头中表达呈阳性,人SFRP1启动子荧光素酶报告质粒构建成功,其转录因子结合位点初步确定,为进一步的研究奠定基础。展开更多
目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X rec...目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。展开更多
文摘目的研究转录活化因子3(Stat3)、肿瘤转移相关蛋白1(metastasis-associated genes 1,MTA1)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor1α,HIF1α)在银屑病患者中的表达及意义。方法本文选取2017年1月-2019年1月在我院皮肤科就诊的70例寻常型银屑病患者标本,同时选取正常皮肤组织标本70例。采用严重程度指数(Psoriasis area and severity index,PASI)评分评估患者疾病严重程度,免疫组化染色后进行结果判定。结果银屑病组织中Stat3、HIF1α阳性表达率高于正常皮肤组织,MTA1阳性表达率低于正常皮肤组织(P<0.05)。点滴型、斑块型患者Stat3、MTA1、HIF1α阳性表达比较,无统计学差异(P>0.05)。进展期患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于稳定期患者,MTA1阳性表达率低于稳定期患者,具有统计学差异(P<0.05)。重度患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于中度患者,MTA1阳性表达率低于中度患者(P<0.05);中度患者Stat3、HIF1α阳性表达率高于轻度患者,MTA1阳性表达率低于轻度患者,具有统计学差异(P<0.05)。结论 Stat3、MTA1、HIF1α在银屑病患者中表达异常,其中Stat3、HIF1α表达较高,MTA1表达低,与银屑病患者临床分期、病情严重程度有关,参与银屑病发病,发挥协同作用。
文摘目的:探讨人分泌型卷曲相关蛋白1(secreted frizzled related protein 1, SFRP1)基因在人毛乳头中的表达及其转录机制。方法:应用免疫组化观察SFRP1在雄激素性秃发(androgenetic alopecia, AGA)患者秃发区的毛囊与非AGA患者的正常毛囊毛乳头部位的表达情况。采用按基因组序列设计的引物,通过PCR克隆人SFRP1启动子片段,将之插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建不同截短片段的重组质粒并瞬时转染毛乳头细胞,测定质粒在毛乳头细胞中的启动子活性,找到核心启动子区域,运用生物信息学方法预测其潜在的转录因子结合位点。结果:免疫组化结果显示AGA患者毛乳头中SFRP1表达量显著高于非AGA患者。经菌液PCR、双酶切、测序,成功构建了人SFRP1启动子及其截短片段重组质粒,并确定其启动子活性区域位于-100~+50bp区域内,且可能含有E2F3、HIF1A::ARNT、FOXC1、SP1等转录因子结合位点。结论:SFRP1在AGA患者毛乳头中表达呈阳性,人SFRP1启动子荧光素酶报告质粒构建成功,其转录因子结合位点初步确定,为进一步的研究奠定基础。
文摘目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。