免疫检查点T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域、人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的分析免疫检查点T细胞激活抑制物免疫球蛋白可变区结构域(VISTA)、人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2(HHLA2)在子宫内膜癌(EC)中的表达及临床意义。方法选取2017年9月至2019年10月唐山市妇幼保健院收治的120例的EC患者作为研究对象,收集其的EC组织和癌旁正常组织。检测EC组织和癌旁正常组织VISTA、HHLA2的表达;采用Spearman分析免疫检查点VISTA、HHLA2的相关性;Kaplan-Meier分析VISTA、HHLA2与预后的关系;Cox回归分析影响EC患者预后的危险因素。结果EC组织中VISTA、HHLA2阳性表达率显著高于正常癌旁组织(P<0.05)。Spearman相关性结果显示EC组织中VISTA与HHLA2表达呈正相关性(r=0.587,P<0.05)。EC组织中VISTA、HHLA2表达与临床病理特征有关(P<0.05)。Kaplan-Meier曲线结果显示VISTA阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(χ^(2)=11.864,P<0.05),HHLA2阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(χ^(2)=4.975,P<0.05)。Cox回归分析结果显示VISTA和HHLA2是影响EC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论免疫检查点VISTA、HHLA2在EC中高表达,其是影响EC预后的危险因素,二者可能是有价值的预后标志物。

人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2在人食管胃交界腺癌组织中的表达

目的探索新型免疫检查点人内源性逆转录病毒-H长末端重复关联蛋白2(HHLA2)在人食管胃交界腺癌组织中的表达及其临床意义。方法选取2016年3月至2018年6月安阳市肿瘤医院收治的食管胃交界腺癌患者126例作为研究对象,采用免疫组化染色检测食管胃交界腺癌和癌旁正常组织中HHLA2表达,随访终点为患者死亡。采用COX回归风险模型进行多因素生存分析,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果HHLA2在食管胃交界腺癌组织中阳性表达率为68.9%(78/126),高于癌旁正常组织的21.1%(27/126)(χ^(2)=42.465,P<0.001)。多因素COX分析显示,TNM分期、HHLA2表达是患者总生存期的独立预后因素(HR=4.217,P<0.001;HR=2.467,P=0.003)。高表达HHLA2和低表达HHLA2的食管胃交界腺癌患者5 a生存率分别为24.4%和56.3%(χ^(2)=21.140,P<0.001)。结论HHLA2在食管胃交界腺癌组织中表达升高,且与患者总生存期存在相关性;高表达HHLA2和TNM分期进展是导致患者总生存期缩短的独立危险因素。

结直肠癌转录因子激活蛋白2α和2β表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系

目的探讨结直肠癌转录因子激活蛋白2α(TFAP-2α)和转录因子激活蛋白2β(TFAP-2β)表达与腹腔镜下根治术后复发的临床关系。方法选取该院收治的147例行腹腔镜根治术的结直肠癌患者作为研究对象,采用免疫组化法检测TFAP-2α和TFAP-2β表达。根据患者术后3年的复发情况,将其分为复发组和未复发组,比较癌组织与切缘正常组织、复发组与未复发组中TFAP-2α和TFAP-2β的表达,并采用Cox回归分析法探讨术后复发的影响因素。结果结直肠癌患者癌组织与切缘正常组织相比,TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低(P<0.05)。随访期间,结直肠癌患者术后复发率为23.13%。复发患者与未复发患者相比,癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高(P<0.05);经Cox回归分析显示,病理分期T3至T4期、N1至N2期、血管侵犯占比较高,以及癌组织TFAP-2α、TFAP-2β阳性表达率降低,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌患者癌组织TFAP-2α和TFAP-2β阳性表达率较低,两者阳性表达率降低,以及病理分期T3至T4期、N1至N2期和血管侵犯占比较高,是结直肠癌患者腹腔镜下根治术后复发的危险因素。

黄姑鱼转录因子激活蛋白AP2α的克隆和特征分析

转录因子激活蛋白AP2α是一类能特异地结合DNA的核转录因子,参与动物胚胎发育的调节、细胞生长、细胞凋亡、肿瘤发生以及免疫反应等多种生物过程。课题组前期通过基因组关联分析(GWAS)发现,AP2α是黄姑鱼(Nibea albiflora)抗哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的候选基因。本研究克隆了黄姑鱼转录因子AP2α,其开放阅读框(ORF)为1275 bp,编码424个氨基酸;所编码的AP2α蛋白质N端是富含脯氨酸和谷氨酰胺(P/Q-rich domain)的反式激活结构域,中间是中心基本结构(central basic region),C端为高度保守的helix-span-helix基序,负责结合DNA和蛋白质二聚化。氨基酸序列多重比对表明,AP2α保守性强,与所检测的鱼类、两栖类、鸟类和哺乳动物同源性在84.63%以上。实时荧光定量PCR检测结果显示,AP2α基因的mRNA广泛分布于所检测的黄姑鱼9种组织样品中,其中血液中的表达量最高;受哈维氏弧菌攻毒感染后,肝脏、脾脏和头肾中AP2α表达量均明显升高,特别是在肝脏中,AP2αmRNA表达水平在24 h时达到攻毒前的39倍。通过构建重组真核表达质粒pGEFP-AP2α并转染HEK293T细胞进行亚细胞定位研究的结果显示,AP2α分布于HEK293T细胞的细胞核中。进一步通过原核克隆表达获得了可溶性的GST-AP2α融合蛋白。以上结果表明,AP2α在黄姑鱼抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。本研究对AP2α在硬骨鱼类先天免疫中的重要功能提供了新的见解,为深入研究黄姑鱼的分子免疫机理和抗病分子育种奠定了基础。

烟草C2H2锌指蛋白转录因子家族成员的鉴定与表达分析

C2H2锌指蛋白转录因子家族在真核生物中具有重要的生物学功能,广泛参与植物叶的发生、花器官的调控、侧枝的形成及逆境胁迫等生命过程。植物C2H2锌指蛋白不仅结合DNA和RNA,而且与蛋白质之间相互作用。本研究利用普通烟草(Nicotiana tabacum)基因组数据库,运用Blastp比对,结合Pfam和SMART分析,鉴定了118条普通烟草C2H2锌指蛋白家族成员;对烟草C2H2锌指蛋白家族进行了进化树分析、结构域分析、物理化学性质分析、染色体定位、基因结构分析、三维结构分析及组织表达分析等。结果表明:不同成员的氨基酸长度差异较大;系统进化及结构域分析显示,所有C2H2家族成员可以被分为5个亚家族,同一亚家族成员之间在结构域和理化性质上呈现较高一致性;每个成员都含有C2H2结构域,在数量上存在较大差异;将所有基因家族成员定位在22条染色体上;组织表达分析表明,每个C2H2亚家族都有成员在不同组织中表达,在叶及根中有些基因的表达量较高。

转录因子激活蛋白-2α重组质粒的构建及其对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响

目的构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响。方法采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定。利用慢病毒包装系统将重组质粒转染入293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的m RNA和蛋白的表达。通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化。结果成功构建重组真核质粒p LV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株。重组质粒组TFAP2αm RNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P<0.05)。MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P<0.05)。平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P<0.05)。与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G_0/G_1期细胞比例显著升高(P<0.05),S期细胞比例显著降低(P<0.05),G_2/M期细胞比例无统计学差异(P>0.970)。结论过表达TFAP2α能明显降低肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2细胞增殖能力,影响细胞周期变化,停留在G_0/G_1期的细胞明显增加,而S期的细胞明显减少,使其发生G_1/S期阻滞从而抑制细胞增殖。

EGFR突变NSCLC组织LncRNA TCF7L2表达及临床病理特征和预后分析

目的 探究长链非编码RNA(LncRNA)转录因子7类似物2(TCF7L2)在表皮生长因子受体基因(EGFR)突变的非小细胞肺癌(NSCLC)组织表达及其与病人临床病理特征和预后相关性。方法 选取2019年3月—2021年6月河北北方学院附属第一医院治疗的EGFR突变NSCLC病人104例为研究对象,分别取其癌组织和癌旁组织应用逆转录PCR(RT-PCR)检测LncRNA TCF7L2的表达,比较不同组织TCF7L2表达及其与临床病理特征和预后的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示,癌组织中LncRNA TCF7L2表达量显著高于癌旁组织(t=12.410,P<0.05)。与LncRNA TCF7L2低表达病人比较,高表达者发生淋巴结转移更多、肿瘤体积更大(χ^(2)=4.579、7.762,P<0.05);LncRNA TCF7L2高表达病人6、9和12个月的生存率较低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 LncRNA TCF7L2在EGFR突变NSCLC病人癌组织表达高于癌旁组织,且TCF7L2高表达病人的淋巴结转移风险较高、肿瘤体积较大,其生存率可能较低。

基本转录元件结合蛋白2反义基因转染对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的:探讨基本转录元件结合蛋白2(BTEB2)反义RNA对血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化的影响。方法:采用Ⅰ型胶原酶消化法培养大鼠VSMC;通过RT-PCR法检测血清诱导的VSMC表型标记基因(SMαA和SMemb)mRNA表达的变化;用反义BTEB2重组腺病毒转染VSMC后,采用RT-PCR法检测SMαA和SMemb的mRNA表达,用免疫细胞化学技术检测SMαA和SMemb蛋白表达。结果:血清剌激后,SMemb mRNA表达增加,而SMαA mRNA表达减少;BTEB2反义基因转染显著抑制血清诱导的SMemb mRNA和蛋白表达的增加以及SMαA表达的减少。结论:BTEB2反义RNA可显著抑制血清诱导的VSMC表型转化。

转录因子激活蛋白-2α在肿瘤中的作用与研究进展

转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)是一种能与DNA特异性结合的转录因子,它参与调节正常细胞增殖分化及胚胎发育,并通过调控信号转导来开启、关闭、增强或减弱多种靶基因的表达,对肿瘤细胞的增殖、分化、侵袭及转移发挥重要调控作用。近年来国内外对TFAP2α基因在肿瘤中的作用进行了大量研究,TFAP2α在多种肿瘤组织中存在异常表达,且表达程度与肿瘤类型、临床分期、病理分化程度等有着密切的关系,它在不同肿瘤中发挥促癌或抑癌的作用。本文重点介绍TFAP2α基因的结构和功能及其在肿瘤发生发展中的作用。

转录因子活化蛋白-2在颞叶癫痫模型小鼠海马的表达变化

目的观察海人酸(KA)致癫痫模型小鼠海马转录因子活化蛋白-2(AP-2)的表达变化。方法雄性C57小鼠32只,随机分为对照组(8只)和模型组(24只),模型组再依据造模后小鼠处死时间分成3 h、8 h、24 h共3组。采用KA侧脑室注射建立癫痫动物模型,建模成功后观察癫痫发作情况,采用RT-PCR检测小鼠造模后各时间点海马AP-2 mRNA转录情况,Western印迹法测定小鼠造模后各时间点AP-2的含量,并与对照组比较。采用免疫组化检测小鼠造模后各时间点AP-2在海马的表达,并且采用免疫荧光观察AP-2在海马组织中与神经元共表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠海马AP-2蛋白含量在癫痫发作后3 h即上升,8 h达高峰,24 h已有降低(P<0.05)。基因、蛋白、免疫组化、行为学结果均呈正相关(P<0.05)。AP-2在海马神经元中有共表达。结论致痫小鼠脑内存在AP-2上升,可能进一步诱发神经凋亡,成为癫痫发病重要机制之一。

转录因子激活蛋白-2α在大肠癌组织的表达及意义

目的研究转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)的表达在大肠癌发生发展过程中的作用。方法以60例大肠癌手术标本为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法分别检测大肠癌和癌旁正常组织中AP-2α基因的mRNA表达水平;以60例大肠癌组织AP-2αmRNA的表达均值为界限,将大肠癌组织AP-2αmRNA表达分为高、低表达,比较不同临床资料、病理参数下大肠癌组织AP-2αmRNA的表达率。结果大肠癌组织中AP-2αmRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.01);大肠癌组织AP-2αmRNA低表达率在不同性别、年龄、肿瘤部位患者差异均无统计学意义(P>0.05),但其表达降低或缺失与大肠癌的组织学分级、Duke's分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05,P<0.01)。结论转录因子AP-2α在大肠癌的发生发展过程中起重要作用,可能成为大肠癌防治的一个新靶点。

壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达特点

目的探讨壶腹癌组织中人内源性逆转录病毒H长末端重复缔合蛋白2抗体(HHLA2)、埃滋蛋白(Ezrin)、人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)的表达特点。方法选取壶腹癌患者52例。从胰十二指肠切除术后的标本中取适量的壶腹癌组织和距离肿瘤病灶约2 cm处的癌旁组织,免疫组化法检测组织标本中HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达情况。收集患者的人口学特征及肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润;出院后对患者进行3 a随访,记录生存情况。结果壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01)。HHLA2阳性率在不同分化程度、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润情况的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义(P<0.05);HHLA2阳性率在不同性别、年龄、肿瘤大小的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ezrin、Bcl-2阳性率在不同淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义(P<0.01);Ezrin、Bcl-2阳性率在不同性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义(P>0.05)。52例壶腹癌患者3 a生存率为71.15%(37/52)。HHLA2、Ezrin、Bcl-2阳性的壶腹癌患者3 a生存率明显低于HHLA2、Ezrin、Bcl-2阴性的胃癌患者(log-rank χ^(2)分别为13.528、16.705、12.911,均P<0.01)。ROC曲线分析显示,HHLA2、Ezrin、Bcl-2在预测壶腹癌患者生存情况中具有较高的应用价值(P<0.05),其中,各指标联合检测对壶腹癌患者生存情况的预测价值最高(AUC=0.950,95%CI:0.895~0.983,P<0.001)。结论壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2高表达,且与病理参数和生存情况相关,联合检测对患者生存情况具有较高的预测价值。

转录因子激活蛋白-2在Buerger’s病中的表达与意义

目的:观察转录因子激活蛋白-2(transcription factor activator protein-2,AP-2)在Buerger’s病中的表达与分布。方法:临床收集2011年1月至2012年3月共23例行腰交感神经节切除术Buerger’s病患者腰交感神经节标本,应用RT-PCR、Western blot方法检测AP-2在Buerger’s病组中基因和蛋白的表达变化,使用免疫组化的方法检测AP-2在Buerger’s病组中的表达分布规律,以观察在该组中的表达特点。临床收集12例正常病例标本以同样方法处理。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,与正常对照组中相比,Buerger’s病组中AP-2基因和蛋白表达水平具有统计学差异(P<0.05),免疫组化显示病理组AP-2表达高于正常组,主要分布在细胞核。结论:Buerger’s病组中AP-2水平升高,表明AP-2在Buerger’s病的发生与发展过程中可能发挥了重要作用。

COUP-TFⅡ在胃癌组织中表达及对胃癌SGC7901细胞中VEGFR3-NRP2轴转录活性的调控

目的:探讨COUP-TFⅡ在胃癌中对淋巴转移相关因子VEGFR3-NRP2轴的调控分子机制。方法:收集2015年3月至2015年8月在滨州医学院附属医院手术切除的60例胃癌组织和相应的癌旁组织及正常胃黏膜活检组织,用免疫组化和qPCR法检测COUP-TFⅡ、VEGFR3和NRP2的表达;培养胃癌细胞SGC7901和BGC823,构建过表达和siRNA-COUP-TFⅡ质粒后转染SGC7901细胞,用WB和qPCR检测转染后SGC7901细胞中COUP-TFⅡ、VEGFR3、NRP2的表达,用免疫共沉淀(CHIP)和双荧光素酶报告基因实验验证COUP-TFⅡ与VEGFR3-NRP2轴的靶向关系。结果:免疫组化检测显示,VEGFR3、NRP2、COUP-TFⅡ在胃癌组织中呈高表达(P<0.01);q PCR结果显示,与癌旁组织和正常组织相比,胃癌组织VEGFR3、NRP2和COUPTFⅡ的mRNA呈高表达(P<0.05或P<0.01);WB和qPCR法结果显示,与对照组相比,过表达COUP-TFⅡ组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平表达均显著升高(均P<0.01);敲减组SGC7901细胞中COUP-TFⅡmRNA和蛋白水平均显著下降(P<0.05或P<0.01),且VEGFR3和NRP2 mRNA水平也均显著下降(均P<0.01);CHIP结果显示,SGC7901和BGC823细胞中COUP-TFⅡ抗体的免疫共沉淀物中含有VEGFR3和NRP2启动子DNA序列;双荧光素酶报告基因实验结果显示,COUP TFⅡ表达水平与VEGFR3和NRP2表达水平呈正相关。结论:COUP-TFⅡ在胃癌组织中高表达且对VEGFR3-NRP2轴存在正性调控作用,且在胃癌中高表达,COUP-TFⅡ可能为胃癌治疗的新靶点。

转录因子激活蛋白-2α在急性肺损伤大鼠肺组织中的表达

目的观察转录因子激活蛋白-2α(AP-2α)在急性肺损伤(ALI)大鼠模型肺组织中的表达差异,为ALI的治疗提供新的思路。方法将40只健康SPF级成年SD大鼠,随机分成对照组(A组)、油酸组(B组)、盐酸组(C组)和脂多糖(LPS)组(D组)。A组:不做任何处理;B组:尾静脉注射高浓度(99%)油酸0.04 mL/kg;C组:经气管导管给予0.1 mol/L的盐酸1.0 mL/kg;D组:经气管导管给予LPS 16 mg/kg。均在4 h后,取动脉血清测定转化生长因子-β1(TGF-β1)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,立即处死大鼠后取肺组织光镜下进行病理学分析,并用免疫组化和Western blot方法检测AP-2α的阳性表达。结果 (1)在光镜下,与A组比较,B、C、D组均可见肺泡间隔增宽,有明显肺间质及肺泡水肿,肺泡腔内有浆液性渗出物及大量炎性反应细胞、红细胞渗出,部分可见"透明膜"样改变;B、C、D组肺组织光镜下病理评分均高于A组。(2)B、C、D组肺组织中AP-2α的表达较A组明显升高(P<0.05)。(3)B、C、D组动脉血清中TGF-β1和MCP-1浓度较A组明显升高(P<0.05)。结论 ALI大鼠模型动脉血清中的TGF-β1和MCP-1的含量明显升高;AP-2α的表达在ALI大鼠模型肺组织中存在明显升高,可能与ALI的发生、发展有关,为ALI的治疗提供新的思路。

人转录因子激活蛋白TFAP_2γ促进乳腺癌细胞生长

目的:构建带Flag标签的人转录因子激活蛋白2γ(TFAP_2γ)基因真核表达载体,获得Flag-TFAP_2γ蛋白,检测其对乳腺癌细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增出人TFAP_2γ基因,并将其正确插入Flag载体;将重组质粒与空载体转染人乳腺癌细胞系ZR75-1和MCF-7细胞后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明,Flag-TFAP_2γ真核表达质粒构建成功,转染ZR75-1和MCF-7细胞后获得表达;生长曲线实验结果表明,TFAP_2γ可促进乳腺癌细胞的生长。结论:构建了带Flag标签的人TFAP_2γ基因真核表达载体,并能在乳腺癌细胞ZR75-1和MCF-7中表达,且能促进细胞的生长。本实验为进一步研究TFAP_2γ在乳腺癌中的功能奠定了基础。

显性负性突变体对AP2α转录因子及其活性的影响

转录蛋白2α(activator protein-2α,AP2α)的转录活性可能是全反式视黄酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)神经分化的关键调控点,但具体机制尚不清楚,显性负性突变是研究基因功能的一个经典手段.以携带AP2α全长基因的pAd-AP2α质粒为模板,分别扩增缺失bHLH及缺失TAD区域的AP2α片段,采用AdEasy腺病毒包装系统获得两种AP2α缺失型显性负性突变体重组腺病毒Ad-dnAP2α-△bHLH及Ad-dnAP2α-△TAD,腺病毒感染ATRA诱导24 h的大鼠MSCs可观察到60%以上RFP阳性细胞.Real-time-PCR、Western blot及免疫荧光结果显示AP2α定位于MSCs细胞核,经A-TRA诱导24 h,AP2α的表达无变化,而其下游基因bcl-2及c-kit表达增高,两种缺失型显性负性突变体腺病毒感染MSCs对野生型AP2α的mRNA及蛋白表达没有影响,却能有效抑制AP2α对下游靶基因bcl-2和c-kit的转录激活作用.为进一步研究AP2α转录活性在ATRA诱导MSCs成神经分化中的作用提供重要的分子手段.

TFAP2A基因重组真核表达载体的构建及鉴定

目的构建转录因子增强子结合蛋白-2α的真核表达载体并进行鉴定,为TFAP2A的后续研究提供有效工具。方法采用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ对真核表达载体CV702质粒进行酶切获得线性化载体;通过PCR扩增制备TFAP2A的cDNA片段,将线性化载体和TFAP2A的cDNA扩增产物进行体外环化连接,构建CV702-TFAP2A重组质粒。将连接产物进行细菌转化,挑取平板上的单克隆进行PCR鉴定,对阳性克隆进行测序及结果分析。将CV702-TFAP2A重组真核表达载体转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,通过Western blot检测TFAP2A的表达效率。结果菌落PCR扩增和测序结果显示,CV702-TFAP2A重组真核表达载体构建成功;Western blot结果与Image J灰度值分析结果显示,与CV702对照载体相比,转染CV702-TFAP2A重组质粒的MDA-MB-231中的Flag-TFAP2A蛋白相对表达量更高(P<0.05)。结论成功构建CV702-TFAP2A的重组真核表达载体,证实转染CV702-TFAP2A的细胞中Flag-TFAP2A的表达水平升高。

转录因子激活蛋白-2a在老年肺腺癌病人中的表达情况及与临床病理参数的相关性

目的探讨转录因子激活蛋白-2a(TFAP-2a)在老年肺腺癌病人中的表达情况及与临床病理参数的相关性。方法通过生物信息学数据挖掘TFAP-2a在肺腺癌组织与正常肺组织中的表达差异及其对肺腺癌预后的影响;收集2015年8月至2020年3月切除的64份老年肺腺癌组织标本及25份老年正常肺组织标本,采用免疫组化染色法测定TFAP-2a的表达情况,分析老年肺腺癌组织中TFAP-2a的表达水平与临床病理参数的相关性。结果GEPIA数据库分析结果显示,肺腺癌组织中TFAP-2a的表达量显著高于正常肺组织(P<0.05),但TFAP-2a的表达水平与肺腺癌的TNM分期无关(P>0.05)。KMplot数据库分析结果显示,TFAP-2a低表达的肺腺癌病人的无复发生存期和总生存期相较于高表达病人明显获益(均P<0.05)。免疫组化染色结果显示,老年肺腺癌组织TFAP-2a高表达的比例显著高于老年正常肺组织(P<0.01),并且在有淋巴结转移及中-低分化的老年肺腺癌病人中,TFAP-2a高表达的比例更高(P<0.05)。结论TFAP-2a在老年肺腺癌病人中呈高表达,过表达TFAP-2a的老年肺腺癌分化更差,更易发生淋巴结转移。

IL-6通过调控JAK2/STAT3信号通路减轻急性肺损伤的机制研究

目的探讨IL-6通过调控酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路减轻急性肺损伤(ALI)的机制。方法将人肺癌细胞A549细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+IL-6过表达组、LPS+IL-6干扰组、LPS+空载组。空白对照组细胞正常培养,LPS组LPS处理细胞,LPS+IL-6过表达组LPS处理细胞后转染IL-6过表达质粒,LPS+IL-6干扰组LPS处理细胞后转染IL-6干扰质粒,LPS+空载组LPS处理细胞后转染空载质粒。采用细胞计数试剂盒法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(ROS)水平,试剂盒检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,ELISA法检测炎性因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平,qRT-PCR法检测IL-6、JAK2、STAT3 mRNA表达水平,Western blot法检测磷酸化JAK2(p-JAK2)/JAK2、磷酸化STAT3(p-STAT3)/STAT3蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,过表达IL-6可增加LPS诱导的ALI细胞凋亡率、ROS、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β水平,JAK2、STAT3 mRNA表达水平,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平,降低细胞增殖率和SOD水平;干扰IL-6则相反。结论IL-6可通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,降低氧化应激和炎症反应,从而减轻ALI。