转录因子FoxO3a对PC12细胞朊蛋白管家基因表达调控的影响

目的探讨叉头转录因子O亚型(FoxO)3a对PC12细胞朊蛋白管家基因(PRNP)表达调控的影响。方法以PC12细胞为研究对象,采用siRNAs沉默基因实验、实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测PRNP转录及蛋白表达水平。通过双荧光素酶(Luc)报告基因检测试验检测Luc活性,进而评估启动子的活性。结果 FoxO3a基因沉默后,S1探针(S1)组PRNP基因表达明显上升(P<0.05);S1组FoxO3a基因被沉默后,朊蛋白(PrP)蛋白表达显著升高,与基因水平一致;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与基础对照组(pGL3-Basic+pRL-Tk)相比,阳性对照组(pGL3-Control+pRL-TK)FLuc/Rluc值明显提高(P<0.01),实验组Ⅰ(pGL3-PNRP+pRL-TK)FLuc/Rluc也显著高于基础对照组(P<0.01);当pGL3-PNRP质粒、pcDNA3.1-FoxO3a高表达质粒与海肾荧光素酶pRL系列(pRL-TK)质粒共转入细胞内,48 h后,与实验组Ⅰ相比,实验组Ⅱ(pGL3-PNRP+pcDNA3.1-FoxO3a+pRL-TK)的FLuc/RLuc值明显下降(P<0.01)。结论 FoxO3a可以负调控PRNP基因的表达,这种调控是通过结合PRNP基因启动子区域而抑制其转录来实现的。

吉马酮通过FOXO3-FOXM1轴调控甲状腺癌BCPAP细胞的增殖、迁移和化疗耐药

目的:探究吉马酮通过叉头盒蛋白O3(FOXO3)-FOX亚类M1转录因子(FOXM1)信号通路调控人甲状腺癌细胞BCPAP和多柔比星(DOX)耐药BCPAP细胞(BCPAP/DOX)的增殖、迁移和化疗耐药。方法:常规培养BCPAP细胞,用BCPAP细胞构建BCPAP/DOX细胞,用MTT法检测不同浓度吉马酮对BCPAP和BCPAP/DOX细胞增殖的影响。将BCPAP和BCPAP/DOX细胞分为Ctrl组(空白对照)、sh-NC组(转染sh-NC质粒)、低浓度吉马酮组(0.10 mmol/L)、高浓度吉马酮组(0.15 mmol/L)、高浓度吉马酮(0.15 mmol/L)+sh-FOXO3组(转染sh-FOXO3质粒),用转染试剂将sh-NC质粒和sh-FOXO3质粒转至相应的BCPAP和BCPAP/DOX细胞中。用CCK-8法、划痕愈合实验和WB法分别检测各组细胞的增殖、迁移能力,以及FOXO3、FOXM1、BAX、MMP-9和多药耐药-1(MDR-1)蛋白的表达。结果:在BCPAP和BCPAP/DOX细胞中成功地敲减了FOXO3的表达,低浓度和高浓度吉马酮均可显著抑制BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖、迁移能力,降低细胞中FOMX1、MMP-9或MDR-1(BCPAP/DOX细胞)蛋白的表达,提升FOXO3和BAX蛋白的表达(均P<0.05),与低浓度比较,高浓度吉马酮的作用更为显著(均P<0.05),敲减FOXO3后可部分逆转吉马酮对这两种细胞的作用(均P<0.05)。结论:吉马酮可能通过FOXO3/FOXM1信号通路调控BCPAP和BCPAP/DOX细胞的增殖和迁移能力,降低BCPAP/DOX细胞化疗耐药性。

干扰素调控因子3:细胞抗病毒反应的核心转录因子

固有免疫系统是宿主抵御病毒入侵的第一道防线.Ⅰ型干扰素是关键的抗病毒细胞因子,它在细胞建立抗病毒状态的过程中发挥了核心的作用.Ⅰ型干扰素的诱导表达是固有免疫的重要调节与效应机制.已有的研究表明:多种转录因子(NF-kappa B、ATF-2/c-Jun、IRF3、IRF7)通过在Ⅰ型干扰素的转录调控区形成稳定的转录增强复合物(enhanceosome),迅速并大量地诱导Ⅰ型干扰素表达.体内与体外的生物学分析已确立,干扰素调控因子3(IRF3)是介导细胞表达Ⅰ型干扰素最关键的转录因子,其转录活力与生物学功能直接影响细胞的抗病毒的能力.近年来,IRF3相关的细胞信号转导与调控机制等研究取得重大进展.围绕IRF3的结构、功能以及分子调控机制等方面,概述相关的研究进展,并做前沿展望。

转录因子NRF3结构、功能及其表达调控的研究进展

“帽领”(Capncollar,CNC)家族包括果蝇CNC1,线虫Skn-1,脊椎动物核因子E2样蛋白1(nuclear factor E2-like protein 1,NFE2L1)/核因子E2相关因子1(nuclear factor E2-related factor 1,NRF1)、NFE2L2/NRF2和NFE2L3/NRF3,以及相似性较低的BACH1和BACH2蛋白[1]。在信号传递过程中,CNC因子与小Maf家族蛋白形成异源二聚体,以进一步识别并结合多种反应元件如NFE2、Maf识别元件(Maf recognition element,MARE)、抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)、应激反应元件(stress response element,STRE)和亲电子反应元件(electrophile response element,EpRE),进而调控靶基因的表达[2]。

细胞信号负调控因子3调控Wnt/β-Catenin信号通路对肿瘤干细胞的影响及其在脑胶质母细胞瘤中的应用

背景:有研究表明,细胞信号负调控因子3、Wnt/β-Catenin信号通路与脑胶质母细胞瘤的发生密切相关。目的:探讨细胞信号负调控因子3与Wnt/β-Catenin信号通路对肿瘤干细胞的影响及在治疗脑胶质母细胞瘤中的作用机制。方法:从手术切除的脑胶质母细胞瘤标本中,分离、培养及鉴定脑肿瘤干细胞。反转录PCR扩增细胞信号负调控因子3基因,转染至脑胶质母细胞瘤干细胞。反转录PCR、Western blot检测细胞信号负调控因子3转染前后,脑胶质母细胞瘤干细胞中细胞信号负调控因子3、信号转导与转录活化因子3、β-Catenin及抑癌因子人第10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源基因mRNA及蛋白的表达。结果与结论:高表达细胞信号负调控因子3可能通过抑制信号转导与转录活化因子3的表达,从而抑制Wnt/β-Catenin通路的传导,以增强人第10号染色体缺失磷酸酶及张力蛋白同源基因活性,降低胶质瘤细胞增殖及侵袭能力同时诱导细胞凋亡,为脑胶质母细胞瘤的靶向治疗提供新的途径。

MEX3A、CDX2、MUC2与MUC5AC判断可癌变胃肠化生的应用价值

目的 探讨MEX3A与胃癌和肠上皮化生(以下简称肠化生)分化特性的相关性及其联合尾型同源盒转录因子2(caudal-related homeobox transcription factor 2,CDX2)、黏蛋白2(mucin 2,MUC2)和黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)判断可癌变肠化生的作用。方法 选取2010年1月至2014年12月沈阳医学院附属中心医院、沈阳医学院附属第二医院外科手术切除的胃癌及癌旁石蜡包埋组织样本410例,根据病理诊断将其分为对照组(轻度浅表性胃炎,79例)、肠化生组(149例)和胃癌组(182例)。免疫组织化学检测各组MEX3A、CDX2、MUC2和MUC5AC的表达。结果 MEX3A高表达于胃癌组及肠化生组,特别是弥漫型胃癌、低分化胃癌和Ⅲ型肠化生(P<0.05);CDX2和MUC2高表达于胃癌组和肠化生组,特别是肠型胃癌、高中分化胃癌、Ⅰ型和Ⅱ型肠化生(P<0.05);MUC5AC高表达于对照组,低表达于胃癌组和肠化生组,特别是肠型胃癌、Ⅰ型和Ⅲ型肠化生(P<0.05)。胃癌和肠化生分化程度与MEX3A和MUC5AC表达均呈负相关,与CDX2和MUC2表达呈正相关(P<0.05)。胃癌组织中MEX3A与CDX2、MUC2表达呈负相关,与MUC5AC表达呈正相关(P<0.05);肠化生组织中MEX3A与CDX2、MUC2表达呈负相关(P<0.05),CDX2与MUC2表达呈正相关(P<0.05)。结论 MEX3A与胃癌和肠化生分化程度呈负相关,胃癌具有MEX3A高表达、CDX2和MUC2低表达的特点。

肝细胞癌患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR的表达水平及其与病理特征和预后的相关性

目的检测血清蛋白质酪氨酸磷酸酶3(PTPN3)、血管内皮生长因子(VEGF)、易洛魁族同源盒基因5(IRX5)、长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,并分析其与患者的病理特征和预后的相关性,为临床工作提供血清学参考。方法选取2020年6月至2022年10月南阳市中心医院收治的117例HCC患者作为观察组,另选取同期117例良性肝内结节患者作为对照组,比较两组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,分析HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与病理特征的关系。随访6个月,依据患者预后情况分为预后良好组72例和预后不良组45例,比较不同预后患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的效能,采用相对危险度(RR)分析血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平与HCC预后的关系。结果观察组患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(181.42±10.19)ng/mL、(154.66±11.82)μmol/L、(82.42±8.23)ng/mL、1.20±0.28,明显高于对照组的(86.64±13.28)ng/m L、(83.64±9.50)μmol/L、(34.80±6.63)ng/m L、1.07±0.25,差异均有统计学意义(P<0.05);不同TNM分期、分化程度、肿瘤直径、伴肝硬化、区域淋巴结转移、Ki-67指数、脉管内瘤栓、包膜侵犯HCC患者血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤多发患者的血清VEGF水平为(154.10±10.26)μmol/L,明显高于肿瘤单发患者的(191.62±9.45)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后2个月,预后良好患者的血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR水平分别为(153.69±22.24)ng/m L、(113.27±25.64)μmol/L、(70.53±10.24)ng/m L、1.15±0.23,明显低于预后不良患者的(217.58±27.06)ng/m L、(215.33±38.19)μmol/L、(96.35±14.88)ng/m L、1.36±0.28,差异均有统计学意义(P<0.05);绘制血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR单独及联合预测HCC预后的ROC,结果显示各血清联合预测的AUC最大,为0.924(95%CI:0.860~0.965);HCC预后不良的危险度分析结果显示,血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR所致RR值分别为4.604(95%CI:2.602~8.145)、7.139(95%CI:3.660~13.924)、4.733(95%CI:2.749~8.149)、4.690(95%CI:2.575~8.544)(P<0.05)。结论血清PTPN3、VEGF、IRX5、HOTAIR在HCC中的表达异常升高,且与病理特征联系密切,对患者预后有一定评估作用。

nNOS、Pax3和Cx43蛋白在人胚胎早期脊髓中的表达及意义

目的探讨神经元型一氧化氮合酶（nNOS）、转录调控因子成对盒3（Pax3）和连接蛋白43（Cx43）在人胚胎发育早期脊髓中的分布规律及其表达意义。方法应用免疫组织化学SABC法,检测第5～16周人胚胎脊髓前角中nNOS、Pax3和Cx43蛋白的表达情况。结果在第5～16周,nNOS和Pax3蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中由弱阳性逐渐变为阳性表达;在第5～12周,Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中均呈阴性表达;第13～16周,Cx43蛋白在人胚胎脊髓前角细胞中呈阳性表达。结论nNOS、Pax3和Cx43蛋白与人胚胎脊髓的生长发育关系密切。

lncRNA Zeb1-AS1调控JAK2/STAT3信号通路影响骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)E盒结合锌指蛋白1反义1(Zeb1-AS1)对骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡的影响,并探讨其机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路有关。方法:将骨关节炎软骨细胞分为si-NC组、si-Zeb1-AS1组、si-Zeb1-AS1+JAK2/STAT3信号通路抑制剂(AG490)组。运用细胞计数试剂盒、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。Western blotting分析B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果:与si-NC组比较,si-Zeb1-AS1组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.01)。与si-Zeb1-AS1组比较,si-Zeb1-AS1+AG490组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论:干扰lncRNA Zeb1-AS1通过激活JAK2/STAT3信号通路能够促进骨关节炎软骨细胞增殖、抑制细胞凋亡。

基于FOXO3a/Nrf2信号通路探讨尿毒症骨骼肌自噬的分子机制

目的:探讨叉头盒(forkhead box,FOX)O蛋白3a(forkhead box O3a,FOXO3a)/转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)信号通路的调节尿毒症骨骼肌自噬的机制。方法:24只小鼠随机分为假手术组(Sham组)、慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)组和CKD+AST-120(AST)组,每组8只。通过5/6肾切除术建立CKD模型。在肾切除术后4周,CKD+AST组小鼠给予含AST-120粉末(尿毒毒素的木炭吸附剂)饮食,持续8周。透射电子显微镜观察腓肠肌组织中的自噬溶酶体。C2C12小鼠成肌细胞分为对照(Control,Con)组、硫酸吲哚酚(indophenol sulfate,IS)组、IS+si-FOXO3a组。实时RT-PCR和蛋白质印迹法分析FOXO3a表达情况。Giemsa染色对C2C12肌管直径进行量化。结果:与CKD组相比,CKD+AST组血清IS水平和腓肠肌组织中FOXO3a表达、自噬溶酶体的数量明显降低(P<0.05),以及腓肠肌、胫骨前肌、比目鱼肌质量明显增加(P<0.05)。与IS组相比,IS+si-FOXO3a组C2C12细胞中FOXO3a、肌肉萎缩盒基因(Muscle Atrophy F-box,atrogin-1)肌肉环脂蛋白1(muscle RING-finger protein-1,MuRF-1)的表达和细胞自噬通量明显降低(P<0.05),以及细胞直径明显增加(P<0.05)。与Sham组相比,CKD组小鼠腓肠肌组织中Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,KEAP1)表达明显升高(P<0.05),和NRF2表达明显降低(P<0.05)。AST治疗逆转了CKD小鼠腓肠肌组织中这些蛋白的变化。si-NRF2逆转了FOXO3a敲低对自噬流量的抑制作用。结论:IS可能通过持续刺激FOXO3a-KEAP1-NRF2轴促进骨骼肌过度自噬,参与尿毒症少肌症的发病机制。

ZHX3基因沉默对BMSCs中成骨相关因子表达的影响

目的探讨锌指蛋白和同源框3(ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(BMSCs)中smad3、smad4、RUNX2表达的影响。方法构建ZHX3低表达慢病毒载体并转染大鼠BMSCs(ZHX3沉默组),同时设空载病毒转染BMSCs(载体对照组)及不做任何处理的BMSCs(空白对照组)。荧光显微镜下测定细胞转染率并采用免疫印迹技术鉴定转染是否成功;采用免疫荧光化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时smad3、smad4、RUNX2表达情况。结果(1)复苏培养的细胞具有BMSCs表型。(2)转染后,ZHX3沉默组和载体对照组均表达绿色荧光,空白对照组不表达荧光,且沉默组ZHX3基因表达显著低于载体对照组。(3)免疫荧光结果显示,smad3、smad4的阳性表达位于细胞核和细胞质,RUNX2的阳性表达主要定位于细胞核。3组细胞均可见阳性表达细胞,且空白对照组与载体对照组之间荧光强度未见显著差异,但ZHX3基因沉默组的荧光强度显著低于2个对照组。(4)免疫印迹检测smad3、smad4、RUNX2的条带于空白对照组和载体对照组中无显著差异,但均显著高于ZHX3沉默组(P<0.05)。结论ZHX3基因沉默后BMSCs体外成骨能力延迟,可能通过下调smad3、smad4、RUNX2来发挥作用。

miR-128-3p靶向调控ZEB1表达对结肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨miR-128-3p在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响和可能的作用机制。方法选取2015年6月至2017年5月我院手术切除的56例结直肠癌组织及癌旁组织标本,并收集结直肠癌细胞系和人正常结直肠黏膜细胞,采用qPCR法检测miR-128-3p相对表达水平并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系。分别将miR-128-3p mimic、mimic NC、miR-128-3p inhibitor和inhibitor NC转染至SW620细胞,采用transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-128-3p与ZEB1的靶向关系,将ZEB1质粒单独或联合miR-128-3p mimic转染至SW620细胞,采用transwell实验检测其侵袭和迁移能力改变,分别采用qQCR和WB实验检测SW620细胞中ZEB1蛋白及mRNA的表达。结果miR-128-3p在结直肠癌组织和结直肠癌细胞中低表达(均P<0.05),其表达水平与肿瘤分化程度、淋巴结转移和远处转移有关(均P<0.05);瞬时转染miR-128-3p mimic能显著抑制SW620细胞的侵袭和迁移,瞬时转染miR-128-3p inhibitor能显著增强SW620细胞的侵袭和迁移。双荧光素酶报告基因实验证实miR-128-3p直接靶向调节ZEB1的表达,过表达ZEB1能促进SW620细胞的侵袭和迁移,同时转染miR-128-3p可下调ZEB1蛋白和mRNA表达,SW620细胞的侵袭和迁移能力下降。结论miR-128-3p在结直肠癌中低表达并与肿瘤分化程度、淋巴结转移和远处转移相关,miR-128-3p通过靶向调控ZEB1抑制结直肠癌的侵袭和迁移。

壮医针挑疗法对哮喘小鼠肺组织中胸腺基质淋巴细胞生成素、T盒转录因子和锌指蛋白3mRNA表达的影响

目的:观察壮医针挑疗法对哮喘小鼠肺组织中T盒转录因子(T-bet)和锌指蛋白3(GATA 3)mRNA表达以及胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的影响,探讨其治疗哮喘的机制。方法:成年雌性BALB/c小鼠30只,随机分为对照组、模型组、针挑组,每组10只。采用卵清蛋白致敏及激发制备哮喘小鼠模型。选取"大椎""肺俞""定喘""风门""肾俞"及"脾俞"等穴,每天针挑1次,共治疗7次。采用RT-PCR法检测肺组织T-bet及GATA 3mRNA表达水平;免疫荧光法检测TSLP表达;HE染色观察肺组织病理变化。结果:和对照组比较,模型组小鼠肺内TSLP、GATA 3mRNA相对表达量均显著升高(P<0.01),而Tbet mRNA相对表达量降低(P<0.05)。和模型组比较,针挑组小鼠肺内TSLP、GATA 3mRNA相对表达量显著降低(P<0.01),而T-bet mRNA相对表达量升高(P<0.05)。针挑组小鼠肺组织上皮增厚减轻,气管血管周围炎性反应细胞浸润较少。结论:降低肺组织TSLP含量和GATA 3mRNA表达,提高T-bet mRNA表达,可能是壮医针挑疗法治疗哮喘的机制之一。

circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3与糖尿病视网膜病变的相关性研究

目的探讨环状RNA(circRNA)-锌指蛋白532(ZNF532)、circRNA-同源域相互作用蛋白激酶3(HIPK3)与糖尿病视网膜病变(DR)的相关性。方法纳入109例DR患者(DR组)、110例单纯糖尿病患者(DM组)和65例健康体检志愿者(对照组)。实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达,酶联免疫吸附试验检测血清血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。Pearson分析DR患者血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与血清VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平相关性。单因素和多因素Logistic回归分析DR危险因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3诊断DR的价值。结果DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达以及VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平高于DM组和对照组(P<0.05)。DR组血清circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达与VEGF、IL-1β、TNF-α、IL-6水平均呈正相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示高水平circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3及VEGF是糖尿病患者发生DR的独立危险因素(P<0.05)。三者诊断糖尿病患者发生DR的曲线下面积分别为0.736、0.740和0.864,联合诊断高于单独诊断(P<0.05)。结论糖尿病患者血清中circRNA-ZNF532、circRNA-HIPK3表达上调与DR发生有关,两者可以作为DR辅助诊断的潜在指标。

多囊卵巢综合征孕妇血清PCSK9、CRTC3水平及对不良妊娠的预测价值

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)孕妇血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调控的转录共激活因子3(CRTC3)水平及对不良妊娠的预测价值。方法纳入2020年12月—2022年9月武汉市第三医院产科收治PCOS孕妇123例为研究组,同期选择医院孕检并生产的健康孕妇120例作为对照组。根据是否发生不良妊娠结局,将PCOS孕妇分为不良妊娠亚组32例与妊娠良好亚组91例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定2组研究对象血清PCSK9、CRTC3水平。Pearson法分析PCOS孕妇血清PCSK9、CRTC3水平的相关性。多因素Logistic回归分析PCOS患者发生不良妊娠结局的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清PCSK9、CRTC3水平对PCOS孕妇发生不良妊娠结局的预测价值并计算和比较曲线下面积(AUC)。结果与对照组比较,研究组PCOS患者PCSK9、CRTC3、睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平均显著升高(t/P=8.611/<0.001、7.794/<0.001、29.474/<0.001、73.271/<0.001、6.258/<0.001、24.295/<0.001、16.511/<0.001);与妊娠良好亚组比较,妊娠不良亚组PCOS患者PCSK9、CRTC3水平显著升高(t/P=7.449/<0.001、7.943/<0.001)。Pearson法分析显示,PCOS患者血清PCSK9与CRTC3水平呈正相关(r=0.639,P<0.001)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清PCSK9、CRTC3是PCOS孕妇发生不良妊娠结局的危险因素[OR(95%CI)=4.152(2.288~7.534)、10.369(2.422~44.396)]。血清PCSK9、CRTC3及二者联合预测不良妊娠结局的AUC优于PCSK9、CRTC3单独预测(Z/P=2.618/0.009、3.104/0.001)。结论PCOS孕妇血清PCSK9、CRTC3水平显著升高,与妊娠结局密切相关,二者联合检测对预测不良妊娠结局具有重要价值。

转录因子Sp3与釉蛋白基因转录调控关系的研究

目的 探讨转录因子Sp3对釉蛋白基因（enamelin）的转录调控作用,以明确Sp3是否直接参与了釉蛋白基因的转录调控.方法 采用生物信息学软件预测釉蛋白基因上游调控区含有Sp3的结合位点;运用凝胶阻滞实验检测牙胚中的Sp3蛋白与釉蛋白调控区Sp3识别序列间的结合能力及其特异性;采用体外基因重组技术和双荧光素酶报告分析,将釉蛋白基因5＇调控区构建至pGL3-basic载体中,并将其与Sp3表达质粒体外共转染至永生化成釉细胞株（LS8）中,检测Sp3对釉蛋白基因的激活.结果 凝胶阻滞实验与双荧光素酶报告分析结果显示,Sp3不能直接结合在釉蛋白上游调控区并激活其转录.结论 Sp3没有以直接作用的方式参与釉蛋白基因的转录调控.

FOXO3a与神经细胞的相关研究进展

FOX转录因子是2000年命名的一个新的蛋白质家族,在转录调控机体生长发育、代谢、细胞周期、凋亡等方面起重要作用。其中研究最深入的是O亚家族（FOXO）。目前已知哺乳动物中FOXO家族有4个成员,即FOXO1、FOXO3a、FOXO4和FOXO6。他们定位于不同的染色体上,由不同的基因编码[1-2]。最近研究发现,去磷酸化状态的FOXO3a可促进神经细胞凋亡,在PI3K-Akt通路激活时亦发挥重要作用[3-4]。

MDPC-23细胞内核心结合因子A1增强Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因的表达

目的 :研究转录因子核心结合因子A1(CBFA1)在Smad分子调控牙本质涎磷蛋白 (DSPP)基因表达中的作用。方法 :细胞培养 ,基因转染和报告基因检测。结果 :转化生长因子 β1(TGF β1)抑制DSPP基因启动子活性的表达。Smad3过表达显著增强了TGF β1对DSPP基因表达的转录抑制。单独过表达CBFA1对DSPP基因启动子活性无明显影响。但是 ,CBFA1与Smad3共转染显著增强Smad3对DSPP基因启动子的抑制作用 ,在TGF β1存在时 ,其作用进一步增强。结论 :在成牙本质细胞系MDPC 2 3内 ,CBFA1可能作为一种转录因子协同调控Smad3对DSPP基因转录的调控。

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达及其意义

目的:检测慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平,探讨其对慢性HBV感染者病情转归的影响。方法:选择86例住院患者,根据慢性乙型肝炎防治指南诊断标准,共分为4组,包括慢性乙型肝炎(CHB)中度组患者33例、CHB重度组患者21例、重型肝炎组患者16例和乙型肝炎肝硬化组患者16例,另选取健康者10名作为对照组。采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA3和FoxP3mRNA的表达水平。结果:CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组研究对象PBMCs中T-bet的表达水平分别为0.597±0.094、0.724±0.071、0.860±0.060、0.528±0.059和0.514±0.071;CHB重度及重型肝炎组患者T-bet表达水平均高于对照组(P<0.05);CHB中度组患者T-bet表达水平低于CHB重度组患者(P<0.05);CHB重度组患者T-bet表达水平低于重型肝炎组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组GATA3的表达水平分别为0.966±0.037、0.973±0.021、0.725±0.028、0.759±0.037和0.535±0.028;各组患者GATA3表达水平均高于对照组(P<0.05);重型肝炎组患者GATA3表达水平低于CHB中、重度组患者(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组FoxP3的表达水平分别为0.935±0.034、0.919±0.047、0.804±0.021、0.984±0.060和0.772±0.083,除重型肝炎组患者外其他各组患者FoxP3表达水平均较对照组显著升高(P<0.05);重型肝炎组患者FoxP3表达水平低于其他各组(P<0.05)。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和健康对照组T-bet/GATA3的表达分别为0.618±0.100、0.744±0.072、1.187±0.082、0.697±0.078和0.963±0.133,各组比值与健康对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),CHB中度组患者T-bet/GATA3比值低于CHB重度组和重型肝炎组(P<0.05);重型肝炎组患者T-bet/GATA3比值高于其他各组(P<0.05)。结论:随着肝病炎症的加剧,T-bet与GATA3的表达呈反方向变化,慢性HBV感染患者T-bet/GATA3比值与FoxP3mRNA表达呈显著负相关关系。

SOCS3过表达细胞模型的建立

目的建立体外高表达细胞因子信号转导负调控蛋白3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的细胞模型,为进一步研究SOCS3在炎症因子信号通路中的作用机制提供研究手段。方法通过RT-PCR克隆SOCS3的编码片段,连接至pIRES2-EGFP真核表达质粒,经测序鉴定后,转染至293T细胞。通过荧光显微镜观测转染效率,RT-PCR和Western印迹法检测SOCS3表达情况,同时检测SOCS3高表达对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。结果经测序证实,pIRES2-EGFP-SOCS3重建质粒中的SOCS3序列完全正确,转染后细胞中可见明显绿色荧光,且SOCS3在mRNA和蛋白水平表达均显著增加,过表达SOCS3可显著抑制由LPS诱导的STAT3的磷酸化。结论成功构建SOCS3基因重组质粒,转染293T细胞,获得高表达具有功能性SOCS3分子。该细胞模型建立为进一步研究SOCS3的调节机制提供了有利工具。