肌肉转录调节因子和连接蛋白43基因表达对大鼠成纤维细胞分化的生长特性及生物学功能影响

目的通过观察转染肌肉转录调节因子(myoblast determining,MyoD)基因和连接蛋白43(connexin43,Cx43)基因的大鼠成纤维细胞(fibroblast,FB)分化生长及生物学功能的改变,初步探讨MyoD和Cx43基因转染FB治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease,IHD)的可能机制和途径。方法构建真核表达的质粒载体pLenti6/V5-DEST-MyoD和pLenti6/V5-DEST-Cx43,利用慢病毒表达系统,将MyoD和Cx43基因转入大鼠RFL-6FB;经终浓度为50μg/ml的Blasticidin进行筛选培养后,通过RT-PCR、Western blot等分子生物学手段确定MyoD和Cx43的转录和表达情况;借助免疫细胞化学、显微镜观察等手段对MyoD的肌肉特异性蛋白和Cx43连接蛋白进行检测,并观察转染后FB的生长情况。结果RT-PCR和Western blot检测出MyoD和Cx43基因转染后FB表达了相应mRNA及其蛋白,免疫细胞化学检测转染的FB细胞中Desmin、α-actin呈阳性表达。经分化培养基诱导,培养1周后,FB出现多细胞融合及肌管形成。结论MyoD及Cx43基因转染可改变FB的生物学特性,转向分化为成肌细胞,并能形成多核肌管及连接蛋白,形态学也得以证实,为进一步研究MyoD和Cx43基因转染FB治疗IHD提供了实验基础。

鼠肌肉转录调节因子MyoD基因真核表达载体的构建

目的 构建肌肉转录调节因子 Myo D基因真核表达载体 ,为深入研究 Myo D在肌肉修复中的分子调节机制 ,探讨其在肌肉损伤方面的生物学行为 ,为临床应用提供物质基础。方法 含 Myo D c DNA的质粒PEMMBC2 β5于大肠杆菌 E.Coli DH5 a内扩增 ;提取及纯化 PEMMBC2 β5质粒 ;经 DNA序列分析含 Myo Dc DNA;限制性酶切 Myo D c DNA片段 ,连接酶连接到真核表达质粒 pc DNA3- neo内 ,克隆出真核表达载体pc DNA3/ Myo D。结果 提取及纯化的 PEMMBC2 β5质粒含有大小正确的 Myo D c DNA碱基片段 ,其碱基序列为编码目的基因的正确序列 ,凝胶电泳结果证明已将此片段正确地克隆到 pc DNA3/ Myo D内。结论 成功的构建了Myo D基因的真核表达质粒 pc DNA3/ Myo D。

辛酸钠对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成及乳脂合成转录调节因子表达的影响

为研究辛酸钠对细胞甘油三酯合成能力及对乳脂合成关键转录调节因子固醇调节元件结合蛋白1（SREBPl）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）表达的影响，以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型，采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力，甘油三酯定量试剂盒检测培养液中甘油三酯浓度，实时荧光定量PCR（qRT—PCR）检测SREBP1和PPARγ相对表达丰度，Westernblot检测SREBP1和PPARγ蛋白相对表达水平。结果显示，与不添加辛酸钠组相比，4．0、8．0、12．0mmol／L的辛酸钠能显著抑制细胞活力和增殖能力；0．5～2．0mmol／L的辛酸钠以浓度依赖方式显著降低培养液中甘油三酯的浓度，且能降低或显著降低SREBP1、PPARγ的表达。表明，辛酸钠能抑制奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成，并对乳脂合成关键转录调节因子的表达具有抑制作用。

转录调节因子Ets-1在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究转录调节因子Ets 1在结直肠癌组织中的表达规律与特点 ,探讨其与肿瘤血管生成和肿瘤侵犯、转移等肿瘤进展的生物学行为的关系。方法 取我院从 2 0 0 1年 9月至 2 0 0 2年 11月间住院手术切除的结直肠癌标本 4 0例 ,同时取 5例正常结直肠组织和 3例结直肠息肉作对照。采用免疫组化技术链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶连接法 (S P法 ) ,检测转录调节因子Ets 1和CD34在它们中的表达特性 ,并结合临床病理参数进行综合分析。结果 正常结直肠组织和结直肠息肉几乎不表达Ets 1,结直肠癌细胞高表达Ets 1;4 0例结直肠癌组织中 ,Ets 1阳性表达及MVD均值显著高于正常结直肠组织和结直肠息肉 ,P <0 .0 1;Ets 1阳性表达组MVD值明显高于阴性组 ,P <0 .0 5 ;Ets 1、CD34在淋巴结转移组、肝转移组、Dukes分期的C期和D期的表达分别显著高于无淋巴结转移组、无肝转移组、Dukes分期的A期和B期 ,P <0 .0 1。结论 (1)Ets 1促进结直肠癌血管生成 ,并参与肿瘤浸润和淋巴道转移 ,与肝转移有关 ,可作为监测结直肠癌预后的重要指标 ;(2 )检测Ets 1的表达 ,可作为判定结直肠癌血管形成、浸润转移等生物学行为的重要指标。

基质金属蛋白酶-1、转录调节因子Ets-1与肿瘤关系的研究进展

在肿瘤发生发展过程中，侵袭与转移是其最主要的生物学特征之一，也是肿瘤药物的作用靶点之一。在此过程中，基质金属蛋白酶（MMPs）在降解基底膜（BM）和细胞外基质（ECM）中发挥重要作用，可促进肿瘤侵袭和转移。Ets-1作为转录调节因子和肿瘤的发生发展也密切相关。本文仅对MMPs家族中的MMP-1及其关联因子Ets-1与肿瘤关系的研究进展进行简要综述。

转录调节因子FoxO3a对小鼠Mac-1^＋细胞功能的影响

目的探讨FoxO3a基因缺失对于小鼠Mac-1+细胞功能的影响。方法采用流式细胞术计数FoxO3a基因敲除鼠及对照野生型鼠脾细胞中Mac-1+细胞数量及百分率。采用流式细胞分选技术分离脾细胞中Mac-1+细胞,利用Real-time PCR和Western印迹检测Mac-1+细胞中的炎性细胞因子S100A8、S100A9的表达水平。结果 FoxO3a基因敲除鼠的脾细胞中Mac-1+细胞数明显增加,细胞内S100A8和S100A9的基因及蛋白表达明显高于野生型鼠。结论 FoxO3a可能有抑制Mac-1+细胞过度活化、维持其稳态的作用。

炎症性肠病相关受体蛋白和转录调节因子的研究

一般认为炎症性肠病(inflammatoryboweldiseases,IBD)主要与结肠粘膜免疫功能紊乱有关,致炎细胞因子对疾病的发生、发展起着非常重要的作用。生理和病理状况下,炎症细胞因子的表达受到多种因素的调控。本文就IBD发生和发展过程中,Toll样受体(Tolllikereceptors,TLRs)和过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisomeproliferationactivatingreceptors,PPARs)及转录信号传导子和激活子(signaltransducerandactivatoroftranscription,STATs)、细胞因子信号传导抑制因子(suppressorofcytokinesignaling,SOCSs)、核因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)等相关信号传导转录调控因子的作用作一综合介绍。

转录调节因子VrhR负调控野油菜黄单胞菌的致病力

以野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)转录调节因子VrhR,VrhA和VrhB为研究对象,通过基因敲除和致病性分析确定它们在Xcc与宿主互作过程中的作用。结果表明:VrhR只含有HTH(helix-turn-helix)结构域;在基因组上vrhR位于其他2个lysR类转录调节因子(vrhA和vrhB)之间,但转录方向相反。vrhR突变会提高Xcc的致病能力,但vrhA和vrhB突变对病原菌的致病能力没有影响。同时,vrhR,vrhA和vrhB突变均不影响细菌的运动性及胞外酶(蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶)的活性。

瞬时受体电位香草酸亚型1通过调节Ca^(2+)依赖性转录调节因子参与促大鼠血管平滑肌细胞增殖

[目的]探讨瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)对Ca^(2+)依赖性转录调节因子表达的影响以及大鼠血管平滑肌细胞(RVSMC)增殖的作用。[方法]体外培养RVSMC,利用TRPV1特异性激动剂辣椒素(CAP)或抑制剂辣椒卓平(CPZ)促进或抑制TRPV1的表达。免疫细胞化学染色技术检测TRPV1的表达;噻唑蓝法检测细胞增殖活性;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;Western blot和实时荧光定量PCR检测Ca^(2+)依赖性转录调节因子活化T细胞核因子c1(NFATc1)、钙衰蛋白(CSEN)和肌细胞增强因子2C(MEF2C)的蛋白表达和mRNA水平。[结果]免疫细胞化学染色显示TRPV1主要表达在RVSMC的胞膜和胞质,CAP或CPZ能激活或抑制TRPV1的表达。与对照组相比,CAP可明显刺激RVSMC增殖活性和上调PCNA蛋白的表达(P<0.01),同时,NFATc1、MEF2C的蛋白和mRNA水平显著上调(P<0.01);CSEN蛋白表达显著增高(P<0.01),CSEN mRNA水平无明显变化(P>0.05)。CPZ作用后,与对照组比较,RVSMC增殖活性、PCNA蛋白表达降低(P<0.01),NFATc1、MEF2C的蛋白和mRNA水平显著下调(P<0.01);CSEN蛋白表达显著降低(P<0.01),CSEN mRNA水平无明显变化(P>0.05)。[结论]TRPV1可能通过上调Ca^(2+)依赖性转录调节因子的表达参与促RVSMC增殖。

NF-κB/IκB:重要的转录调节因子

核转录因子ｋａｐｐａ Ｂ（ＮＦκＢ）是一组重要的转录调节因子，可在免疫刺激剂等多种因素作用下激活而调节基因的转录，参与调节许多与免疫功能和炎症有关的基因。ＩκＢ（Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ＮＦκＢ）是其抑制分子，对其激活的调控起着关键作用。本文综述了ＮＦκＢ激活及调控的有关机理，为对其进一步研究提供理论依据。

人结直肠癌组织中转录调节因子Ets-1蛋白的表达

目的:检测结直肠癌组织中转录调节因子Ets-1蛋白的表达,以探讨其与结直肠癌浸润、转移等的关系。方法:取结直肠癌(男22例,女18例;腺癌29例,黏液腺癌11例;高分化15例,中低分化25例;浸润深度:深层28例,浅层12例;淋巴结转移:有16例,无24例)及其相应正常组织标本各40例,采用免疫组织化学SP法检测Ets-1蛋白的表达。结果:结直肠癌组织中Ets-1蛋白的阳性表达率高于正常组织(P<0.05)。结直肠癌组织中Ets-1蛋白阳性表达率与浸润深度有关(P<0.05),与肿瘤的分化程度和有无淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论:Ets-1蛋白的高表达可能与结直肠癌的发生及浸润转移有关。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞转录调节因子RUNX1的表达研究

目的:研究转录调节因子RUNX1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性。方法:采用免疫磁珠法分离CD34^+细胞,流式细胞术鉴定细胞纯度,反转录PCR和蛋白免疫印迹法分别检测RUNX1的mRNA和蛋白表达。结果:银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1 mRNA及蛋白表达水平均高于正常对照组(P<0.05)。结论:决定CD34^+细胞发育分化的关键转录因子RUNX1在银屑病患者骨髓CD34^+细胞中表达异常,RUNX1表达水平的增高可能引起骨髓造血干细胞和造血微环境的异常,并可能参与银屑病的发病。

大鼠真皮成纤维细胞肌肉转录调节因子基因转染后生物学特性观察

背景：利用转基因技术诱导皮肤真皮成纤维细胞分化为特殊器官组织功能的前驱细胞具有重要意义。目的：观察肌肉转录调节因子（myogenic determination，MyoD）基因转染对大鼠真皮成纤维细胞生物学特性的影响。设计、时间及地点：单一样本观察，细胞基因工程学实验，于2005-01／2007—02在同济大学附属东方医院心胸外科和细胞治疗室完成。材料：清洁级雄性SD大鼠6只，购自上海西普尔．必凯实验动物有限公司。Ⅱ型胶原蛋白酶为GIBCO公司产品，稻瘟菌素粉剂为美国Promega公司产品，慢病毒载体pLenti6／V5-DEST为Invitrogen公司产品，BrdU为美国Sigma公司产品。方法：无菌条件下切取大鼠腹侧全层皮肤，采用200IU／mL的Ⅱ型胶原蛋白酶在4℃下解离大鼠皮肤真皮组织，组织块培养法获取贴壁的真皮成纤维细胞，待生长近融合状态时传代扩增。取传至第3-6代细胞，利用携带MyoD cDNA的真核表达载体pLenti6／V5-DEST-MyoD进行转染，经终浓度为50mg／L稻瘟菌素筛选后，挑选转基因单克隆细胞传代培养，向细胞培养液中加入10μmol／L BrdU于37℃条件下孵育48h。主要观察指标：细胞形态学观察，免疫细胞化学染色鉴定，体外BrdU标记情况。结果：体外分离培养的真皮成纤维细胞纯度高，形态良好，生长增殖功能正常，转染后经稻瘟菌素筛选2周即可见克隆形成。光镜下真皮成纤维细胞免疫细胞化学染色后波形蛋白呈阳性表达，转染MyoD基因后肌动蛋白亦呈阳性表达。10μmol／LBrdU孵育48h的标记率〉98％，且连续传代5次后仍可检测到BrdU阳性细胞。结论：真核表达载体成功介导MyoD基因转染体外分离培养的大鼠真皮成纤维细胞，并诱导其转化为具有潜在功能的类骨骼肌细胞，可在体外稳定生长扩增。

转录调节因子-1在喉癌组织中的表达及其临床意义

目的研究转录调节因子-1(Ets-1)蛋白在喉癌组织中的表达及其在喉癌发生发展中的作用。方法应用免疫组化法(SP法)检测34例喉癌组织、癌旁组织及15例卢带息肉中Ets-1的表达,采用图像分析软件系统对免疫组化结果进行半定量分析。结果 Ets-1蛋白在喉癌组织中的表达量和阳性表达率明显高于癌旁组织和息肉组织(P<0.05);癌旁组织与息肉组织间的表达比较差异无统计学意义(P>0.05);喉癌患者中不同性别、年龄、肿瘤大小、临床分型Ets-1的表达差异无统计学意义(P>0.05);不同病理分级、临床分期及淋巴结转移间差异有有统计学意义(P<0.01)结论Ets-1在喉癌组织中的高表达对喉癌的发生。

转录调节因子Foxn1与胸腺的关系及研究现状

转录调节因子Foxn1主要表达于胸腺上皮细胞，在胸腺发育以及T细胞的增殖、分化、成熟等方面发挥重要作用，其表达异常可引起机体免疫功能紊乱，导致相关自身免疫性疾病及肿瘤等的发生。本文拟就Foxn1基因的研究进展及其在胸腺相关疾病中的作用做一综述。

Yes相关转录调节因子1、程序性死亡受体1在上皮性卵巢癌中的表达及其与肿瘤侵袭程度的相关性分析

目的探讨Yes相关转录调节因子1(YAP1)、程序性死亡受体1(PD-1)在上皮性卵巢癌中的表达及与肿瘤侵袭程度的相关性。方法收集106例上皮性卵巢癌患者的临床资料及上皮性卵巢癌组织,另收集接受手术治疗的62例生殖系统良性疾病患者的正常卵巢组织。比较上皮性卵巢癌组织及正常卵巢组织中YAP1、PD-1表达情况及不同临床特征上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达情况,并采用Pearson相关分析法分析上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达相关性及与肿瘤侵袭程度的相关性。结果上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1阳性表达率均明显高于正常卵巢组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为G_(1)级、有淋巴结转移、浸润深度为T_(3~4)期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中YAP1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为G_(2~3)级、无淋巴结转移、浸润深度为T_(1~2)期患者,差异均有统计学意义(P<0.01);FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、浆液性肿瘤、浸润深度为T_(3~4)期上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中PD-1阳性表达率分别明显高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、非浆液性肿瘤、浸润深度为T_(1~2)期患者,差异均有统计学意义(P<0.01)。上皮性卵巢癌组织中YAP1、PD-1表达无相关性(r=1.175,P>0.05);但YAP1、PD-1与肿瘤侵袭程度均呈正相关(r=0.657、0.671,P﹤0.05)。结论上皮性卵巢癌中YAP1、PD-1呈异常表达,且与肿瘤浸润程度有关,可能参与了肿瘤细胞发生、发展,可作为临床诊断上皮性卵巢癌的辅助诊断指标。

变异链球菌毒力相关转录调节因子的研究进展

研究发现众多转录调节因子参与调节变异链球菌耐酸性等关键致龋毒力因子的表达,虽然仍有许多转录调节因子的作用靶点和调控机制尚不明确,但已有学者针对变异链球菌个别宏观转录调控因子进行单基因突变研究。本文就已发现的影响变异链球菌致龋毒力因子表达的调节因子及其功能和可能的作用机制进行综述。

转录调节因子Ets-1及MMPs在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨转录调节因子Ets-1、基质金属蛋白酶(MMPs)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测转录调节因子Ets-1、MMP-1、MMP-3在结直肠癌、大肠腺瘤及腺瘤伴异型增生组织中的表达。结果Ets-1、MMP-1与MMP-3蛋白在大肠腺瘤、大肠腺瘤伴腺上皮异型增生及大肠癌组织中的阳性表达率依次递增。Ets-1、MMP-1、MMP-3高表达与1、3、5 a生存率呈负相关。Ets-1与MMP-1、MMP-3的表达呈正相关。结论Ets-1、MMP1、MMP3在大肠癌的发生、发展、浸润及转移中发挥重要作用,与大肠癌患者的预后有关。