锌指转录调节蛋白KLF4在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的检测锌指转录调节蛋白KLF4在喉鳞状细胞癌组织中的分布、表达及其与临床特征的关系。方法采用免疫组化染色法检测并分析KLF4在48例经病理确诊为喉鳞状细胞癌组织中的分布及表达,以56例声带息肉组织作为对照。结果 KLF4蛋白在喉鳞状细胞癌及声带息肉组织的表达差异有统计学意义。同时,高分化鳞癌与低分化鳞癌的表达差异有统计学意义。结论 KLF4可能在喉鳞状细胞癌的发生发展中起了重要作用,并且可能主导了肿瘤的分化程度。

硫酸多糖聚甘古酯抑制HIV-1反式转录调节蛋白诱导的THP-1细胞炎症细胞因子释放及机制探讨

目的观察硫酸多糖聚甘古酯（SPMG）对HIV-1反式转录调节蛋白（Tat）刺激THP-1细胞释放具有神经毒性的炎症细胞因子如TNFα，IL-1β和IL-6的影响，并探讨其作用机制。方法用ELISA法检测SPMG对Tat刺激4h细胞上清液TNFα、刺激6h细胞上清液IL-1β和IL-6的影响；用Western blotting技术检测SPMG对PKCζ，PKCθ与PKCδ磷酸化影响。结果SPMG（50～100μg·mL^-1）显著抑制Tat诱导的TNFα，IL-1β与IL-6释放；Tat显著促进PKCζ，PKCθ和PKCδ的磷酸化，SPMG对PKCδ与PKCθ的磷酸化没有影响，但显著抑制PKCδ的磷酸化。结论SPMG可能通过抑制Tat对PKCδ活化，抑制炎症细胞因子TNFα，IL-6与IL-1β释放。

可卡因-苯丙胺调节转录肽蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用

目的:检测可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)蛋白疫苗在吗啡镇痛及其耐受中的作用。方法:利用基因克隆技术构建pGE-4T3-CART_(55-102)表达质粒,通过谷胱甘肽S转移酶(GST)亲和层析法纯化出GST-CART蛋白。实验分为6组:空白对照组,生理盐水组,GST+弗氏佐剂组,CART蛋白疫苗5μg组、10μg组和20μg组,免疫两次后热板法对各组进行痛反应检测。皮下注射6 mg/kg吗啡进行镇痛效应检测,计算最大镇痛效应百分率(MPE%)。随后建立吗啡耐受模型,并于末次给药12 h后皮下注射6 mg/kg吗啡进行耐受效应检测。结果:CART蛋白疫苗本身对基础痛阈没有影响(P>0.05)。10μg CART蛋白疫苗组显著降低了吗啡镇痛效应(P<0.05)。对比生理盐水组,疫苗组显示出抗耐受的潜力,其中10μg组MPE%增高具有显著性差异(P<0.05)。结论:CART蛋白疫苗本身对痛反应没有影响,但削弱了吗啡的镇痛效应,同时对吗啡镇痛耐受具有拮抗作用。

冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨冠心病患者血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3(CRTC3)及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化的相关性。方法选取2021年6月—2023年6月本院收治的154例冠心病患者为研究组,根据颈动脉粥样硬化程度分为轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组;另选取154例同期健康体检者为对照组。采用Pearson法分析血清CRTC3及氧化应激指标与颈动脉粥样硬化指标的相关性。结果研究组血清CRTC3、丙二醛(MDA)、颈动脉斑块面积和中层内膜厚度(IMT)高于或大于对照组,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。轻度硬化组、中度硬化组和重度硬化组血清CRTC3、MDA、颈动脉斑块面积和IMT依次升高或增大,SOD、GSH-Px水平依次降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清CRTC3、MDA水平与颈动脉斑块面积、IMT呈正相关(P<0.05),SOD、GSH-Px与颈动脉斑块面积、IMT呈负相关(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线显示,CRTC3、SOD、MDA和GSH-Px联合诊断重度颈动脉粥样硬化的曲线下面积(AUC)为0.990(95%CI:0.982~0.998),灵敏度为96.27%,特异度为76.28%。4项指标联合诊断的价值高于各指标单独诊断,差异有统计学意义(Z_(联合-CRTC3)=2.723,Z_(联合-SOD)=2.698,Z_(联合-MDA)=2.673,Z_(联合-GSH-Px)=2.803,P均<0.05)。结论冠心病患者血清CRTC3、MDA水平显著升高,SOD、GSH-Px水平显著降低;血清CRTC3、氧化应激水平均与颈动脉粥样硬化密切相关。

miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及SIRT1/Foxo1蛋白表达的影响

目的 探讨miR-125a-3p对骨关节炎大鼠软骨细胞活性、氧化应激反应及细胞沉默信息调节因子1/叉头框转录因子o1(SIRT1/Foxo1)蛋白表达的影响。方法 将40只大鼠随机分为对照组(健康大鼠)、模型组(骨关节炎大鼠,造模后不做其他处理及干预)、miR-125a-3p组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后于大鼠左膝关节关节腔内注射miR-125a-3p抑制剂)、阿利吉仑组(骨关节炎大鼠,造模成功7 d后给予大鼠50 mg/kg阿利吉仑灌胃),每组10只。通过氧化应激反应检测超氧物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH),HE、番红O、Masson染色检查大鼠软骨损伤情况,TUNEL检测软骨细胞凋亡,RT-PCR与免疫印迹检测SIRT1、Foxo1基因及蛋白水平。结果 软骨细胞凋亡率模型组高于miR-125a-3p组与阿利吉仑组(P<0.05),miR-125a-3p组与阿利吉仑组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE、番红O、Masson染色显示,模型组大鼠关节软骨面骨裂隙形成;miR-125a-3p组与阿利吉仑组大鼠关节软骨表面变得光滑,无明显裂隙。RT-PCR与免疫印迹检测显示,与模型组相比,miR-125a-3p组与阿利吉仑组SOD、GSH、SIRT1水平均升高(P<0.05), MDA、LDH、Foxo1水平均降低(P<0.05)。结论 miR-125a-3p通过调控SIRT1/Foxo1信号通路,可降低氧化应激反应,抑制软骨细胞凋亡,改善骨关节炎病情。

结直肠癌组织中Lgr5、GATA6表达变化及临床意义

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5(Lgr5)和转录调节因子GATA结合蛋白6(GATA6)的表达变化及临床意义。方法选取手术切除CRC组织41例为实验组,其配对的癌旁正常组织(距离癌组织边缘>5cm)作为对照组。采用免疫组化法检测组织中Lgr5、GATA6表达,分析两者与结直肠癌临床病理特征的关系,Spernman秩相关分析两者的相关性。结果CRC组织及癌旁正常组织中Lgr5蛋白高表达率分别为60.98%(25/41)、12.20%(5/41),比较差异有统计学意义(P<0.05);CRC组织及癌旁正常组织中GATA6蛋白高表达率分别为63.41%(26/41)、21.95%(9/41),比较差异有统计学意义(P<0.05)。Lgr5蛋白高表达率与CRC的TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和浸润深度无关(P均>0.05)。GATA6蛋白高表达率与CRC的浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度和肿瘤分期无关(P均>0.05)。Spernman秩相关分析结果显示,CRC组织中Lgr5、GATA6蛋白表达呈正相关(r=0.327,P<0.05)。结论CRC组织中Lgr5、GATA6呈高表达,二者可能协同促进CRC的发生发展。

益母草碱抑制ERK/NF-κB信号通路对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察益母草碱抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将大鼠随机分为Control组、HF组,低剂量益母草碱(L-益母草碱)组、高剂量益母草碱(H-益母草碱)组及ERK抑制剂组。采用腹腔注射阿霉素法建立HF模型,HF模型建立成功后根据分组进行给药干预,连续14 d。利用彩色多普勒动物超声仪测量心功能指标[左室射血分数(LVEF)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS)]变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;免疫组化法检测心肌组织凋亡相关蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织ERK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Control组比较,HF组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均减少,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均增加(P<0.05);与HF组比较,L-益母草碱组、H-益母草碱组、ERK抑制剂组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均增加,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均减少(P<0.05)。与Control组比较,HF组心肌组织磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、细胞核NF-κB p65蛋白均增加(P<0.05);与HF组比较,H-益母草碱组、ERK抑制剂组心肌组织p-ERK、p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白水平均减少(P<0.05)。结论:益母草碱可抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,改善心功能,可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活而实现。

嗜水气单胞菌生物被膜的特性与相关基因的研究

建立嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila,Ah)的生物被膜(BF)体外形成模型,用银染法及扫描电镜观察检测Ah致病株J1、N1及非致病株W1、4332株产生BF的情况,同时研究温度和消毒剂对AhJ1株的游离(FC)细菌(以下简称FC细菌)和具有BF的细菌(以下简称BF细菌)的影响。实验表明:致病株AhJ1、N1株均可形成BF,而非致病株AhW1、4332株均不形成BF。AhJ1株的BF细菌经85℃30min、-20℃80d、0.01%新洁尔灭处理后均有存活,而FC细菌无存活细菌。根据已发表的AhA1株的转录调节蛋白基因(AhyR)核苷酸序列,设计并合成了一对引物,对AhJ1、N1、W1、4332株的基因组进行PCR扩增和测序分析。发现致病性AhJ1、N1株可扩增出912bp的核苷酸片段,该片段与已发表的AhAhyR基因的同源性达99%,而非致病性AhW1、4332株无该基因片段。

雄激素受体与去势抵抗性前列腺癌关系的研究进展

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是雄激素剥夺治疗(ADT)后晚期前列腺癌终极阶段。雄激素受体(AR)是前列腺癌发生发展的重要因素,即使在CRPC阶段,AR途径信号的激活仍然起着重要作用,其可能的机制有受体基因的扩增或过表达、基因突变、结构性受体改变及剪接变异体等。本文对CRPC期AR的主要改变综述如下。AR是核受体超家族的一员,属于类固醇受体,是一种配体依赖型的反式转录调节蛋白,是雄激素作用的中介物质。

构建来自宫颈癌并带有突变及缺失LCR的HPV16重组体

为研究ＨＰＶ１６转录调节蛋白ＹＹ１结合位点改变对病毒致癌性的影响，以ＨＰＶ１６野毒株质粒ｐ１２０３为基础，经多次克隆，将来自宫颈癌组织并带有缺损突变的ＬＣＲ重组到地ＨＰＶ１６基因组中。核酸序列分析证实，质粒ｐＤＶ３９０在第２个ＹＹ１位点上有一Ｇ→Ａ点穷变，质粒ｐＤＶ３２６和ｐＤＶ４０１分别带有１１５ｂｐ和１４３ｂｐ的缺失突变，从而涉及２和４个ＹＹ１结合位点，重组质粒其它核苷酸序列与ＨＰＶ１６标准序列一致。这些重组质粒的组建为进一步研究ＹＹ１蛋白对ＨＰＶ１６致癌基因表达的调控及ＨＰＶ１６致癌作用的影响打下基础。

可卡因-苯丙胺调节转录肽在缺血性脑损伤中的保护作用

可卡因-苯丙胺调节转录肽（cocaine—and amphetamine—regulated transcript，CART）是一种内源性神经肽，广泛分布于脑、胃肠道和胰腺等器官组织，具有多种重要的生理功能，包括进食与肥胖、应激、精神焦虑行为、药物成瘾和内分泌调节等。前期研究提示，CART在中枢神经系统广泛分布，并且参与调节多种生理学过程，具有一定的中枢保护作用，是一种很有潜力的神经保护剂。文章就CART对卒中以及神经变性疾病的神经保护作用及其机制，以及其在中枢神经系统疾病治疗作用等方面的研究进展进行了综述。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对脑缺血再灌注小鼠梗死体积和脑组织4-羟壬烯醛含量的影响

目的探讨可卡因一苯丙胺调节转录肽（cocaine—andamphetamine—regulatedtranscriptpeptides，CART）对缺血再灌注小鼠梗死体积和脑组织4一羟壬烯醛（4．hydroxy-2一noneral，HNE）含量的影响。方法健康雄性小鼠随机分为缺血再灌注组（n=27）、CART组（n=27）、生理盐水对照组（n=27）和假手术组（n=15）。建立大脑中动脉闭塞（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）模型，CART组和生理盐水对照组在MCAO2h后分别经尾静脉注射给予CART55-102和同体积生理盐水，然后每隔24h重复1次。在再灌注后12、24、48和72h分别进行神经功能评分、梗死体积和脂质氧化应激代谢产物HNE含量检测。结果CART可显著改善脑缺血再灌注后不同时间点神经功能缺损评分（P均〈0．05），显著缩小梗死体积（P均〈0．05）；再灌注后各时间点HNE含量均显著增高（P均〈0．05），CART可显著下调缺血后脑内HNE水平升高（P均〈0．05）。结论CART能通过抑制脂质过氧化保护小鼠缺血性脑损伤。

miR-103靶向USP10对胰腺癌细胞YAP/TAZ表达及化疗耐药性的影响

目的探讨微小RNA-103(miR-103)靶向泛素特异性蛋白酶10(USP10)对胰腺癌细胞Yes相关蛋白(YAP)和包含WW结构域的转录调节蛋白1(TAZ)(YAP/TAZ)表达及顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1、人正常胰腺上皮细胞株hTERT-HPNE和耐DDP细胞PANC-1/DDP。将PANC-1/DDP细胞随机分为对照组、干扰RNA组(si-miR-103)和阴性对照(si-NC)组。用CCK-8法检测转染后细胞DDP半数抑制浓度(IC_(50));实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-103、USP10、MDR1基因表达情况;CCK-8法检测转染后各组PANC-1/DDP细胞存活率变化情况;流式细胞术检测转染后各组PANC-1/DDP细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞YAP、TAZ蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-103与USP10的靶向关系。结果与hTERT-HPNE细胞比较,PANC-1与耐药细胞PANC-1/DDP中miR-103表达水平显著升高,USP10表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与PANC-1比较,耐药细胞PANC-1/DDP中miR-103表达水平显著升高,USP10表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);经MiRcode数据库预测显示,miR-103与USP103'UTR区有结合位点。与USP10-3'UTR-WT+si-NC组比较,USP10-3'UTR-WT+si-miR-103组荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-miR-103组PANC-1/DDP细胞IC_(50)值、miR-103、MDR1表达水平、细胞增殖活性、YAP、TAZ蛋白表达下降显著降低(P<0.05),USP10 mRNA及蛋白表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论miR-103/USP10、YAP/TAZ与胰腺癌细胞DDP耐药存在调控关系,干扰miR-103表达可上调USP10并抑制YAP/TAZ表达,逆转胰腺癌耐药细胞对DDP耐药性。

可卡因-苯丙胺调节转录肽对氧葡萄糖剥夺的培养皮质神经元突触形成的影响

目的探讨可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine-and amphetamine-regulated transcript,CART)对氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)小鼠皮质神经元突触结构的影响。方法选用健康清洁级昆明小鼠16~17 d孕龄胚胎大脑皮质进行原代神经元培养,分为对照组、CART组、OGD组以及OGD+CART组。OGD+CART组在OGD处理后加入0.4 nmol/L CART55-102培养12 h;CART组予以等剂量CART55-102。采用流式细胞术检测神经元死亡率。通过免疫荧光分析观察神经元突触结构变化,并对轴突长度和突触蛋白Ⅰ阳性面积进行定量分析。采用实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白质印迹分析检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,OGD组神经元死亡率显著增高,神经元突触生长明显受到抑制,突触蛋白Ⅰ阳性面积显著缩小,BDNF mRNA和蛋白表达水平显著下调(P均<0.05)。与OGD组比较,加入CART55-102后能显著降低OGD神经元死亡率(P<0.05),逆转OGD对神经元突触生长的抑制作用,使神经元轴突长度及突触蛋白Ⅰ阳性面积显著增大(P均<0.05),并显著上调BDNF mRNA和蛋白表达水平(P均<0.05)。结论CART能保护OGD小鼠脑皮质神经元的突触结构,其机制可能与上调BDNF表达有关。

毛萼乙素通过调节STAT3通路抑制宫颈癌细胞增殖与转移的研究

目的 探究毛萼乙素通过调节STAT3通路抑制宫颈癌细胞增殖与转移的效果。方法 5、10、20μmol/L毛萼乙素处理宫颈癌细胞系SiHa 48 h,通过CCK8检测细胞增殖,通过流式细胞术检测细胞周期分布,通过Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力,通过Western blot检测CDK2、Cyclin E、E-caderin、MMP9、p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达。使用毛萼乙素(20μmol/L)单独或联合STAT3激动剂Colivelin(1μg/mL)处理SiHa细胞48 h,通过CCK8检测细胞增殖,通过Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力。结果 EriB以剂量依赖性的方式抑制细胞增殖速率,SiHa细胞系细胞周期出现明显停滞,同时EriB还能进一步抑制SiHa细胞系的迁移及侵袭能力;EriB处理后SiHa细胞系中CDK2、Cyclin E、E-caderin、MMP9、p-JAK2、p-STAT3表达下降(P<0.05)。联合给药STAT3激动剂Colivelin可抵消EriB对于SiHa细胞增殖、迁移与侵袭的影响(P<0.05)。结论 毛萼乙素可通过抑制STAT3信号通路抑制宫颈癌细胞增殖与转移。

二甲双胍抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路改善肾小管上皮细胞衰老的分子机制

目的:研究二甲双胍对D-半乳糖诱导肾小管上皮细胞(NRK-52E)衰老的保护作用及其对腺苷酸激活蛋白激酶/细胞沉默调节蛋白1/核转录因子-κB(AMPK/Sirt1/NF-κB)信号通路的影响。方法:Western blot检测不同浓度D-半乳糖(50,100,200 mmol·L^-1)和二甲双胍(10,30,60 mmol·L^-1)干预后细胞衰老标志物Klotho、P27和P16蛋白表达水平及AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路蛋白表达量;细胞计数试剂盒(CCK8)法检测NRK-52E细胞增殖活性。结果:与对照组比较,D-半乳糖干预能显著升高Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平,显著降低P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平(P<0.05),且D-半乳糖呈浓度依赖性。不同浓度二甲双胍干预后,与D-半乳糖组(100 mmol·L^-1)比较,Klotho和Ac-NF-κB蛋白表达水平显著降低,P27、P16、p-AMPK和Sirt1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且二甲双胍呈浓度依赖性,而细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在D-半乳糖诱导的NRK-52E细胞衰老模型中,二甲双胍在体外具有抗衰老的作用,并且通过抑制炎症相关AMPK/Sirt1/NF-κB信号通路而缓解衰老过程。

雄激素受体在前列腺癌发病和治疗中的作用

在前列腺癌（PCa）的发生和发展过程中，雄激素及其受体（AR）起到了重要的作用。AR是一种配体依赖型的反式转录调节蛋白，属类固醇受体，是真核转录因子。它与配体如双氢睾酮（HDT）结合后可以激活多种与细胞增殖凋亡密切相关的蛋白转录，从而维持肿瘤生长。

雄激素及其受体在痛风炎症反应中作用

雄激素是一类含有19个碳原子的甾体激素，能促进雄性性征的出现并维持其正常状态。雄激素受体（androgen receptor，AR）是一种配体依赖性反转录调节蛋白，主要位于睾丸间质细胞和支持细胞的胞核内。雄激素通过与特异的AR结合发挥生理学作用。近年来，痛风发病率呈逐年升高趋势，其中95％的痛风患者为男性，提示雄激素在痛风炎症反应中起着重要作用。以往，雄激素及其受体的相关研究主要集中在肿瘤、遗传性疾病等领域，但越来越多的研究认为雄激素及其受体与痛风的发病和发展同样有着密切的关系。本文将近年来从雄激素及其受体与细胞因子、细胞免疫等方面的研究来对雄激素及其受体与痛风的关系进行综述，希望对以后痛风的预防及治疗提供参考。