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构建靶向Runx2基因成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体
被引量:
1
1
作者
秦晗
龚永庆
徐宏志
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2018年第28期4429-4433,共5页
背景:研究表明成骨细胞特异性转录因子(Runx2)的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因。目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道。目的:构建...
背景:研究表明成骨细胞特异性转录因子(Runx2)的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因。目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道。目的:构建靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体,为颅骨锁骨发育不全的研究提供实验依据。方法:根据预实验结果在含5 mg/L Polybrene的ENi.S培养液中,病毒按MOI=40进行感染,按病毒序号分为4组:NC组:pFU-GW-016PSC53349-1;KD1组:LVpFU-GW-016PSC60107-1;KD2组:LVpFU-GW-016PSC60108-1;KD3组:LVpFU-GW-016PSC60109-1。转染后16 h换液,72 h后,Celigo全视野细胞扫描分析仪观察检测基因的表达情况;两步法进行Real-Time PCR检测Runx2基因的沉默效果。结果与结论:(1)病毒转染后72 h,NC组未见荧光表达;KD1组可见少量荧光表达;KD2组荧光表达增强;KD3组可见强绿色荧光;(2)Real-Time PCR结果提示KD3组获得较好Runx2基因沉默效果;(3)实验成功构建靶向Runx2基因的MC3T3-E1细胞慢病毒载体,筛选出特异性抑制成骨细胞Runx2基因的病毒,并初步确定其作用的时间、相应的计量。
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关键词
基因
成骨细胞
慢病毒属
转
染
:
组织
工程
组织
构建
Runx2基因
MC3T3-E1细胞
慢病毒
转
染
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题名
构建靶向Runx2基因成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体
被引量:
1
1
作者
秦晗
龚永庆
徐宏志
机构
徐州医科大学附属连云港医院口腔科
出处
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2018年第28期4429-4433,共5页
基金
国家自然科学基金(81500893)~~
文摘
背景:研究表明成骨细胞特异性转录因子(Runx2)的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因。目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道。目的:构建靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体,为颅骨锁骨发育不全的研究提供实验依据。方法:根据预实验结果在含5 mg/L Polybrene的ENi.S培养液中,病毒按MOI=40进行感染,按病毒序号分为4组:NC组:pFU-GW-016PSC53349-1;KD1组:LVpFU-GW-016PSC60107-1;KD2组:LVpFU-GW-016PSC60108-1;KD3组:LVpFU-GW-016PSC60109-1。转染后16 h换液,72 h后,Celigo全视野细胞扫描分析仪观察检测基因的表达情况;两步法进行Real-Time PCR检测Runx2基因的沉默效果。结果与结论:(1)病毒转染后72 h,NC组未见荧光表达;KD1组可见少量荧光表达;KD2组荧光表达增强;KD3组可见强绿色荧光;(2)Real-Time PCR结果提示KD3组获得较好Runx2基因沉默效果;(3)实验成功构建靶向Runx2基因的MC3T3-E1细胞慢病毒载体,筛选出特异性抑制成骨细胞Runx2基因的病毒,并初步确定其作用的时间、相应的计量。
关键词
基因
成骨细胞
慢病毒属
转
染
:
组织
工程
组织
构建
Runx2基因
MC3T3-E1细胞
慢病毒
转
染
Keywords
Genes
Osteoblasts
Lentivirus
Transfection
Tissue Engineering
分类号
R318 [医药卫生—生物医学工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
构建靶向Runx2基因成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体
秦晗
龚永庆
徐宏志
《中国组织工程研究》
CAS
北大核心
2018
1
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