胃癌抗原肽Hsp70复合物对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的 应用联合修饰的树突状细胞(DC)在体外诱导高效而特异的抗胃癌免疫效应。方法 先将全长野生型p53导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC,然后用胃癌抗原肽-HSP70复合物等因素修饰已转染全长野生型 p53的 DC(wt-p53 DC),检测这种DC诱导小鼠脾脏淋巴细胞特异的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的能力,分泌细胞因子功能,以及表面分子表达的高低。结果Western blot检测转染小鼠 p53cDNA的 BMDC及其培养上清中均可以检测到 p53表达;细胞因子含量明显增加(P<0.05),而的其他组的细胞因子含量与对照相比,无显著变化;经流式细胞仪(FACS)检测 wt-p53DC表面高表达 B7-1、B7-2、MCH-Ⅰ、MCH-Ⅱ;脾淋巴细胞经刺激后,能够特异性地杀伤胃癌细胞,杀伤率为91.6％。结论 全长野生型p53基因转染+抗原肽联合修饰DC能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性,显著提高DC的抗原提呈功能。

胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞(wtp53DC)免疫功能的影响。方法先将全长野生型p53导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp53DC,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果抗原肽修饰的wtp53DC和单纯DC的上清3种细胞因子含量明显增加,分别为(545.2±12.1)ng/L,(511.1±13.3)ng/L,(537.1±11.1)ng/L(P<0.05);wtp53DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.01);该细胞高表达B7-1、B7-2、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ(P<0.05);能够特异性地杀伤胆管癌细胞,杀伤率81.6%。结论全长野生型p53基因转染+胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。

胆管癌抗原肽对转染全长野生型p53的树突状细胞免疫功能的影响

目的 研究胆管癌抗原肽对转染全长野生型 p5 3的树突状细胞 (wtp5 3DC)免疫功能的影响。方法 将全长野生型 p5 3导入脂质体内并转染小鼠骨髓来源的DC ,然后用胆管癌抗原肽修饰wtp5 3DC ,检测这种树突状细胞的抗原提呈功能。结果 抗原肽修饰的wtp5 3DC和单纯DC这 4种上清 3种细胞因子含量明显增加为 :( 5 45 .2± 12 .1)ng/L ,( 5 11.1± 13 .3 )ng/L ,( 5 3 7.1±11.1)ng/L ;wtp5 3DC刺激小鼠脾脏T细胞增殖水平明显高于对照组 (P <0 .0 1) ;该细胞高表达B7 1、B7 2、MCH Ⅰ、MCH Ⅱ (P <0 .0 5 ) ;能够特异性地杀伤胆管癌细胞 ,杀伤率为 81.6%。结论全长野生型 p5 3基因转染与胆管癌抗原肽联合修饰树突状细胞能诱导小鼠细胞毒性T淋巴细胞的特异性。

转染野生型p53对乳腺癌细胞所致细胞凋亡的研究

目的 为研究 p5 3对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响 ,用重组人野生型 p5 3全长 c DNA的逆转录病毒载体转染Bcap37细胞 ,观察其增殖的凋亡变化。方法 应用 Northernblotting和 Western blotting检测 Bcap37细胞 p5 3表达变化 ,流式细胞仪计数检测细胞增殖及周期变化 ,MTT及苔盼兰计数观察紫外线刺激后细胞存活率差异 ,DNA末端原位标记技术检测细胞凋亡变化。结果 外源野生型 p5 3在Bcap37细胞表达后 ,使细胞生长速度变慢 ,克隆形成所需时间增加 ,并使细胞周期发生变化 ,主要表现在 G1 期生长抑制 ,即细胞停滞于 G1 期 ,紫外线刺激后 ,细胞存活率比对照细胞下降 2 0 %～ 40 % ;细胞凋亡明显增加 (所有数据均 P<0 .0 1)。结论 转染野生型 p5 3的 Bcap37细胞出现生长抑制 ,并加速 U

转染野生型p53基因诱发家兔动脉粥样硬化斑块不稳定性的实验研究

目的探讨野生型p53基因对血管平滑肌细胞(VSMC)的促凋亡作用在构建动脉粥样硬化(As)不稳定斑块动物模型中的价值。方法54只雄性新西兰纯种兔用球囊损伤腹主动脉+高脂喂养10周,于8周末随机分成A组(p53基因组,27只)和B组(LacZ基因组,27只),在腹主动脉斑块形成处分别转染携带野生型p53基因或LacZ基因的重组腺病毒载体;2周后,A组和B组各处死10只,观察斑块的自发破裂情况。然后两组剩余实验兔给予中国斑点蝰蛇毒(CRVV)和组胺药物触发,比较两组发生斑块破裂的发生率。应用免疫组织化学染色、流式细胞仪、原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及电镜检测基因转染部位的平滑肌细胞的凋亡情况。结果A组TUNEL测定的凋亡阳性细胞率显著高于B组(分别为2.5%±0.8%,1.0%±0.3%,P<0.05),流式细胞仪测定的细胞凋亡率亦明显高于B组(分别为20.04%±6.20%,6.89%±1.20%,P<0.01);电镜结果显示胞核中异染色体边聚明显,凋亡小体多见;斑块中的VSMC显著减少,纤维帽变薄以及纤维帽/内中膜厚度明显少于B组(纤维帽厚度分别为132.9±56.7,181.8±59.7,P<0.05;纤维帽/内中膜厚度0.20±0.18,0.21±0.11,P<0.05),药物触发后斑块破裂的发生率显著高于B组(分别为85.7%,23.1%,P<0.01)。结论外源性人野生型p53基因转染As家?

野生型p53基因转染对人HCC-9204细胞端粒酶活性影响

目的 :探讨肿瘤抑制基因 p5 3对人肝癌细胞端粒酶活性及其催化亚单位hTERT (humantelomerasereversetranscriptase)的影响 ,并探讨可能的机制。方法 :用脂质体介导基因转染法将野生型p5 3(wt p5 3)导入端粒酶 /hTERTmRNA阳性、内源性 p5 3突变的HCC 92 0 4人肝癌细胞中 ;用Westernblot鉴定转染效率 ;PCR ELISA、TRAP 银染、原位杂交和RT PCR法检测细胞端粒酶活性和hTERTmRNA表达 ;用流式细胞仪观察细胞凋亡改变。结果 :外源wt p5 3基因转染后HCC 92 0 4细胞端粒酶活性明显受抑 ,hTERTmRNA表达水平下调 ,bcl 2表达减少 ,细胞呈现凋亡改变。结论 :外源wt p5 3基因表达可抑制人肝癌细胞端粒酶活性 ;端粒酶活化、hTERTmRNA表达存在 p5 3依赖性调节途径。

野生型p53基因转染对宫颈癌HeLa细胞生长及药物敏感性的影响

目的 探讨转染外源野生型 p5 3基因对宫颈癌 He L a细胞生长的抑制作用 ,并了解 p5 3基因与He L a细胞对顺铂敏感性之间的关系。方法 利用脂质体介导 ,将含人野生型 p5 3c DNA的 p CB6 .p5 3质粒导入人宫颈癌 He L a细胞株中 ,筛选阳性克隆 ,用免疫组化 ABC法检测 p5 3基因的表达情况。加入顺铂 72小时后 ,用四唑盐比色试验检测存活的 He L a细胞数。结果 在 G418选择培养基中培养两周后 ,成功地生长出阳性细胞克隆。免疫组化法证实外源性 p5 3基因在瘤细胞中稳定存在并传给子代 ,p5 3基因转染对 He L a细胞的生长有明显的抑制作用。p5 3表达阳性的 He L a细胞对顺铂的敏感性明显增强。结论 野生型 p5 3基因转染能使 He L

野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系A549 VEGF表达和肿瘤生长的影响

目的 :研究外源性野生型p5 3(wtp5 3)基因对人肺腺癌细胞系A5 4 9血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响 .方法 :将含有wtp5 3基因的 pcDNA3.1 wtp5 3和空载体 pcDNA3.1 neo质粒 ,通过阳离子脂质体转染A5 4 9细胞 ,应用半定量RT PCR和ELISA技术检测其对VEGF表达情况的影响 ;将A5 4 9,A5 4 9/ pcDNA3.1 neo和A5 4 9/ pcDNA3.1 wtp5 3细胞分别接种至裸鼠皮下 ,观察成瘤时间及瘤块大小 ;免疫组化法计数VEGF阳性细胞百分数并进行半定量分级 .结果 :pcDNA3.1 wtp5 3转染组VEGFmRNA和蛋白表达均明显低于其他 2组 .pcDNA3.1 wtp5 3转染后裸鼠成瘤时间延长 ,瘤块生长缓慢 .结论 :wtp5

转染野生型p53基因稳定表达后早期肝癌细胞的自发性凋亡

目的：研究外源性野生型ｐ５３基因（ｗｔ－ｐ５３）对ＨＣＣ－９２０４肝癌细胞系的作用和意义。方法：通过脂质体介导方式将人ｗｔ－ｐ５３基因转染至肝癌细胞中。结果：转染ｗｔ－ｐ５３稳定表达早期，肝癌细胞发生自发凋亡，流式细胞仪检测结果显示典型的凋亡峰，其凋亡细胞数为５２．８％，细胞周期分析结果显示，转染ｗｔ－ｐ５３细胞中Ｇ１、Ｓ和Ｇ２期细胞分别为７９．１％，２０．５％和０．４％，亲本细胞则分别为４８．５％，２７．０％和２３．７％。琼脂糖电泳显示ＤＮＡ断裂呈梯状，透射电镜观察肝癌细胞发生染色质浓聚并边集。结论：转染的外源性ｗｔ－ｐ５３具有介导肝癌细胞凋亡的作用。

人肺癌细胞转染野生型P^(53)基因对生长的影响

研究转染野生型 P5 3基因对人肺癌细胞的生长影响作用。方法 :将带有野生型 P5 3基因的 p CEP4质粒 ,通过 L ipo-fectin转染肺癌细胞 ,用四甲基偶氮唑 (MTT)法观察细胞的生长情况。结果 :转染野生型 P5 3 基因 ,可使肺腺癌、肺鳞癌和小细胞肺癌细胞的生长明显受到抑制。结论 :野生型 P5 3基因有效抑制肺癌细胞的生长 ,可作为肺癌基因治疗的一种手段。

野生型p53基因转染对人胃癌细胞的作用

目的评价外源性p53基因对人胃癌细胞生物学行为的影响。方法以复制缺陷型重组腺病毒为载体,将人野生型p53基因导入不同p53状态的3种人胃癌细胞系,用免疫组化法检测p53基因在胃癌细胞中的表达;用流式细胞计数、细胞DNA片段化分析检测细胞周期分布和凋亡。结果在高MOI病毒剂量下,外源p53基因在3种胃癌细胞的胞核中均高效表达,并可使细胞产生明显的G2／M阻滞和凋亡,而且这种作用不依赖细胞内在的p53基因状态。结论无论体外还是体内实验,野生型p53基因转染胃癌细胞后均有明显的生物效应。该实验为进一步开展p53基因治疗的临床研究提供了理论依据。

转染野生型p53基因对人肺腺癌细胞作用的研究

目的 研究外源性野生型 p5 3基因对人肺腺癌细胞系GLC 82的生物学作用。 方法 将含有野生型 p5 3基因的pDOR neo逆转录病毒载体 ,通过Lipofectin转染GLC 82细胞 ,采用流式细胞分析、电镜下观察、3 H TdR掺入试验、软琼脂培养集落形成率测试及裸小鼠成瘤性实验 ,观察野生型p5 3基因对GLC 82细胞的生物学效应。结果 电镜下观察可见 ,转染野生型p5 3基因可使GLC 82细胞出现一些病理现象 ,如细胞质中有明显的空泡及线粒体肿胀 ;流式细胞仪分析结果显示 ,野生型 p5 3基因可阻止GLC 82细胞周期停止于G1 S区域 ;3 H TdR掺入试验结果提示野生型 p5 3基因能够抑制GLC 82细胞的DNA合成 ,软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤减慢。结论 转染野生型p5 3基因可抑制GLC 82细胞恶性增殖。

野生型P53基因转染对肝肿瘤细胞系的影响

随着肿瘤发生的分子机制研究取得重要进展，肿瘤的治疗技术除外科手术、放疗、化疗以及生物治疗外，人们目前正寻求一种新的治疗方法——基因治疗。P53基因是当今研究的热点之一，它与人类许多肿瘤的发生发展有关。野生型P53基因是显性基因，单拷贝基因的表达就可抑制肿瘤的生长，因此，将野生型P53基因导入肿瘤细胞，

新型阳离子聚合物非病毒载体介导野生型p53基因体外转染效果的研究

目的:研究新型阳离子聚合物非病毒载体———尿刊酸修饰的壳聚糖(UAC)介导野生型p53(wt-p53)基因体外转染人肝癌细胞系HepG2的效果。方法:载体UAC包裹含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因和wt-p53治疗基因的质粒(pEGFP-p53)转染HepG2细胞,利用流式细胞术和荧光显微术检测细胞内GFP的表达,优选最佳转染条件;采用RT-PCR法检测细胞内p53mRNA的表达,流式细胞术评价基因转染对细胞周期的影响,Western blot法检测细胞内p53及其下游细胞周期调控蛋白的表达。结果:在低pH(pH=6.9)条件下,采用低壳聚糖分子量(20000)的UAC作为载体,与pEGFP-p53形成高N/P(N/P=30)的UAC/pEGFP-p53复合物转染HepG2细胞,可获得最佳转染效果;载体UAC介导wt-p53基因转染细胞后,p53mRNA表达水平明显上调,G0/G1期出现显著阻滞,p53、p21和Rb蛋白表达水平明显上调,cyclin D1和CDK4蛋白表达水平明显下调。结论:载体UAC可成功介导wt-p53基因转染HepG2细胞,并诱导其产生细胞周期阻滞。

野生型p53基因转染对卵巢癌细胞株端粒酶活性的影响

目的 :探讨野生型 p5 3(wt- p5 3)基因转染对卵巢癌细胞端粒酶活性的影响。方法 :利用脂质体介导 ,将含有人全长 wt- p5 3基因 c DNA的真核表达载体质粒 p CEP4 / p5 3和空载体质粒 p CEP4分别转染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌 SKOV3细胞株 ,分别命名为 SKOV3- p CEP4 / p5 3细胞 (C组 )、SKOV3- p CEP4细胞 (B组 ) ,另设 SKOV3细胞为空白对照组 (A组 ) ,观察 3组细胞周期和端粒酶活性变化。结果 :外源性 wt- p5 3基因在 C组细胞中获表达 ,而 A、B组细胞中无 wt- p5 3基因的表达。流式细胞仪检测示 C组细胞 G0 ～ G1 期百分比 (5 7.79% )及凋亡细胞率 (13.91% )均高于 B组 (46 .0 2 %、2 .0 8% )和 A组 (43.6 2 %、0 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,A、B、C3组细胞中端粒酶活性均呈阳性 ,但 3组细胞端粒酶活性无显著性差异 (P =0 .6 5 )。结论 :wt- P5 3基因转染可介导 SKOV3细胞 G0 ～ G1 期停滞和诱导细胞凋亡 ,但对

转染野生型p53基因介导的HL-60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的 :探讨野生型p5 3基因对HL - 6 0细胞的作用机制 ,并检测p2 1的表达 ,探讨二者在白血病中的关系。方法 :用脂质体介导的方法将野生型p5 3基因导入p5 3基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL - 6 0中 ,用形态学 ,电镜 ,流式细胞仪 ,间接免疫荧光等方法检测p5 3对HL - 6 0细胞的促凋亡作用及对p2 1表达的调节作用。结果 :野生型p5 3基因能促进HL - 6 0细胞凋亡及上调p2 1表达。结论 :p2 1可能在p5 3促HL - 6

吲哚美辛对野生型p53转染的结肠癌细胞株SW480的影响

目的:探讨吲哚美辛抗结肠癌作用是否呈 p53依赖性及其部分分子机制.方法:采用含突变型 p53的 SW480细胞株为研究对象.利用基因转染技术,将野生型 p53转染 SW480细胞.不同浓度的吲哚美辛进行干预,采用吖啶橙、溴化乙锭荧光染色,荧光显微镜及透射电镜下观察 wtp53/SW480细胞凋亡;Western 斑点免疫印迹检测 wtp53/SW480细胞中 Bcl-2、Bax 及 p21^(WAF1/CIPI)蛋白表达.结果:吲哚美辛诱导野生型 p53转染的 wtp53/SW480细胞凋亡,出现形态学改变:即细胞核固缩、裂解,核碎片及凋亡小体形成.凋亡细胞计数显示该作用呈浓度-时间依赖性,其中600μmol/LIN 作用于 wtp53/SW480细胞72h,其凋亡细胞百分率为60.1±2.5%;而对照组其凋亡细胞百分率为5.0±2.0%,P<0.01,二者比较有显著性差异.吲哚美辛作用于 wtp53/SW480细胞24h,其 Bcl-2蛋白表达水平下调,呈浓度依赖性,而 Bax 蛋白表达无改变;未转染的 SW480细胞中 Bcl-2,Bax 蛋白均无影响.吲哚美辛作用于 wtp53/SW480细胞24h,其 p21^(WAF1/CIPI)蛋白表达水平随着一定范围内吲哚美辛浓度的增加而逐渐上调以400μmol/L 吲哚美辛作用最强,600μmol/L 吲哚美辛作用后回到基础水平.而在未转的 SW480细胞中 p21^(WAF1/CIPI)蛋白的表达无明显改变.结论:IN 通过下调 Bcl-2蛋白,上调 p^(21WAF1/CIPI) 蛋白的表达来诱导 wtp53/SW480细胞凋亡.

脂质体载体法将外源性野生型p53转染SHG_(44)细胞及验证

目的验证脂质体法将wtp53有效转染SHG44细胞。方法G418筛选,DNA分子班点杂交。结果用脂质体法将wtp53质粒转染SHG44细胞,G418筛选,24d形成新生细胞克隆,呈集落状;以wtp53cDNA为探针进行斑点杂交,放射自显影,wtp53pLXSN/SHG44细胞为阳性杂交信号,而亲代SHG44细胞及转染pLXSN的SHG44细胞为阴性信号,说明wtp53基因已成功地转导入SHG44细胞中。结论斑点分子杂交显示,基因转染成功,初步证实脂质体介导法能有效地将外源性p53基因转导入SHG44细胞。