悬浮细胞电穿孔转染参数的选择研究

目的以凋亡抑制蛋白家族成员Survivin为目的基因,对采用电穿孔转染悬浮培养的小鼠原代淋巴细胞的各种参数进行选择,以提高转染效率。方法通过选择不同的电压、温度、细胞状态等转染参数,采用不同参数组合将化学合成靶向Survivin的siRNA导入悬浮培养的小鼠原代淋巴细胞,用倒置显微镜观察细胞计数,台盼兰拒染试验来评估siRNA的转染率和细胞存活率。结果小鼠原代淋巴细胞在350 V,40μs条件下,可获得最大转染率,约为31%;良好的细胞状态以及低温条件等参数均可获得更好的转染效果。结论电穿孔转染法是一种高效的基因转染方法 ,通过选择经优化的针对悬浮细胞的转染参数,可以获得较高的转染率。

Jurkat T细胞电穿孔转染条件的优化

目的优化人急性淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat T细胞)的电转染条件。方法通过选择不同的电压、质粒浓度、细胞状态等转染参数,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒转入Jurkat T细胞。通过锥虫蓝拒染实验和荧光显微镜分析转染效率。结果 Jurkat T细胞在电压150 V条件下转染效率达到(62.10±2.13)%;处于对数生长期的细胞转染效率较高;质粒浓度低于0.5 g·L-1时影响转染效率;短时期内温度对转染效率的影响不大。结论本实验通过选择优化Jurkat T细胞的转染参数、控制影响因素,可有效提高Jurkat T细胞电转染效率。

电穿孔法转染人乳腺癌细胞MCF-7的条件优化研究

通过控制电穿孔时的电压、电脉冲时长、电脉冲次数、质粒浓度和细胞状态等转染条件,将pcDNA3.1(+)-EGFP质粒转入MCF-7细胞,于倒置荧光显微镜下观察EGFP表达情况以检测转染效率,探讨不同电穿孔条件对人乳腺癌MCF-7细胞转染效率的影响,确定MCF-7细胞的最佳电转染条件。结果表明:人乳腺癌细胞MCF-7在电压150 V、质粒浓度1μg/μL左右、脉冲数2次、脉冲时长5 ms、传代时间24 h时可达到较高的电转染率。