丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白6基因转染肝癌细胞的基因表达谱芯片分析

目的:筛选并克隆丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的肝细胞结合蛋白基因,并对新基因转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制。方法:应用酵母双杂交技术,以HCV的核心蛋白作为“诱饵(bait)”,筛选鉴定与其结合的肝细胞中蛋白的编码基因。应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析其中筛选得到的人HCV核心蛋白结合蛋白6(HCBP6)基因的全长编码序列,并构建HCBP6基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-HCBP6。应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-HCBP6转染的HepG2细胞和空载体处理的相同细胞差异表达的mRNA进行检测。结果:通过酵母双杂交技术的筛选和鉴定,结合生物信息学分析,确定人的HCBP6基因由456 nt组成,编码152 aa的蛋白。基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,HCBP6表达质粒转染的细胞有20条差异表达基因,其中13条基因表达增强,7条基因表达降低。这些差异表达的基因与细胞信号转导、增生、分化及生长调节密切相关。结论:酵母双杂交技术结合生物信息学技术,是克隆蛋白结合蛋白的有效方法,基因表达谱芯片技术对于初步全面探索新基因的功能提供重要的资料。本实验结果为进一步阐明HCV核心蛋白与Hcbp6相互作用后的肝细胞生物大分子变化提供了理论依据。

人类NET-1基因正、反义真核表达载体的构建及在肝癌SMMC-7721细胞中的表达

肝癌是全球发病率最高的恶性肿瘤之一，其中约55％发生在中国，至今仍缺乏有效的治疗手段。NET-1属于四次跨膜蛋白（TM4S）家族成员，具有显著上调癌形成的作用。在研究人体组织中NET-1表达及分析肝与肝癌组织NET-1表达差异的基础上，作者采用分子克隆和基因转染技术将构建的NET-1正、反义真核表达载体分别转染肝癌细胞SMMC-7721，为进一步探讨NET-1基因在肝癌发生发展中的作用提供实验模型。

小RNA干扰技术在治疗肝细胞肝癌中的应用

目的探讨利用小RNA干扰技术作用缺氧诱导因子1α2α稳定转染肝癌细胞后VEGFR蛋白表达情况。方法构建HIF1α、HIF2α基因的真核表达载体HIF1α、HIF2α-pcDNA3.1,检测48 h(Western Blots);同时用Western Blots方法检测VEGFR蛋白表达。结果缺氧诱导因子1α2α小RNA干扰稳定转染肝癌细胞。与未转染组和转染空载体组相比,伴随HIF-1α、HIF-2α基因沉默同时VEGF的蛋白表达也下降。结论缺氧诱导因子1α2α小RNA干扰转染肝癌细胞有效抑制HIF-1α与HIF-2α的表达。为肝癌治疗的新策略奠定了基础。