改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列

对传统的反向ＰＣＲ 技术作了一些改进： 用巢式ＰＣＲ 扩增含量极少的靶序列； ＰＣＲ 反应体系中加入５ ％ 的甲酰胺以减少非特异性扩增． 结果表明， 改进的反向ＰＣＲ 体系是克隆人基因组已知片段旁侧序列的高度灵敏、高度特异的方法．

基于支持向量机的细菌基因组水平转移基因预测

随着各种生物基因组序列测定工作的完成,大量的DNA序列数据涌现出来,为研究在基因组中寻找水平转移基因提供了极大的便利.将基因序列特征分析和支持向量机技术结合起来,通过分析基因序列的特征差异发现水平转移基因.依据以前研究工作的基础,选取了绝对密码子使用频率(FCU)作为序列特征,主要因为它既包含了基因密码子使用偏性的信息,也包含了基因所编码蛋白的氨基酸组成信息,支持向量机利用这些信息进行水平转移基因分析和预测,可以提高预测的准确性.另外,提出了基于分链的水平转移基因预测新方法,即将细菌基因组前导链和滞后链上的基因区别对待,分别进行水平转移基因预测.结果显示,基本预测方法要优于目前预测结果最好的Tsirigos等提出的基于八联核苷酸频率的打分算法,命中率的相对提高率最高达31.47%,而基于分链的方法对水平转移基因的预测取得了更好的结果.

改良差示PCR技术分离人成骨肉瘤转移基因片段

建立优化的差示PCR体系，通过对转移潜能不同的人成骨肉瘤细胞系进行差示比较，获得人成骨肉瘤转移相关基因片段．方法：以低转移性人成骨肉瘤细胞系SOSP－96O7及由此筛选出的高转移亚系SOSP－M为研究对象，利用优化的差示PCR技术获得两细胞系mRNA的表达差异，选取差异明显、片段较长的条带回收并克隆后，经点杂交和Northern杂交排除假阳性，并进行测序和同源性分析．结果：获得满意的差示PCR反应参数，并以高敏感度荧光染料SYBR””GREENI替代同位素放射自显影，改良了显示系统．以此为基础，得到了两条高转移亚系所特有的差异DNA片段，命名为MGI和MGZ，测序后分析显示它们具有较长的开放读框，与Genebank和EMBL数据库已知基因比较无明显同源性．结论：优化了差示PCR反应体系；分离筛选出2个人成骨肉瘤转移基因片段，已向Genebank申请登录．本实验为骨肉瘤转移的机制研究奠定了实验基础．

抗转移基因nm23-H1在多发性肝癌中的表达

目的 :了解nm2 3 H1基因的表达与多发肝癌临床病理和预后的关系。方法 :30例多发性肝癌选自日本山梨医科大学第一外科的手术病例。组织切片按常规免疫组织化学ABC法染色。结果 :13例为阳性染色 ,17例为阴性染色。两染色组之间 ,肿瘤大小 包膜形成及浸润 侵及浆膜 肝内血管和胆管以及分化程度等方面没有显著性差异。两组相比有显著性差异的是阴性组的肝癌占据肝两叶者常见 (70 .6 % ) ,肝内转移癌居多 (76 .5 % ) ,3年生存率较低 (18.7% )。结论 :nm2 3

心肌直接注射转移基因

心肌直接注射转移基因钱虎声，陈诗书，张柏根（上海第二医科大学，上海２０００２５）关键词转移基因，直接注射肌肉内直接注射裸露ＤＮＡ质粒的基因转移技术为１９９０年美国威斯康星大学的Ｗｏｌｆｆ与圣地亚哥Ｖｉｃａｌ等偶然发现，为观察化学方法对大鼠骨胳肌基因转...

子宫内膜异位症与肿瘤转移基因关系的研究进展

子宫内膜异位症是常见的妇科良性疾病,但却具有恶性肿瘤的侵袭和转移特征,因此,探讨子宫内膜异位症的发病和转移的机制不仅对子宫内膜异位症的临床诊断、治疗有着重要的意义,同时对阐明恶性肿瘤的转移机制也有一定的作用。子宫内膜异位症的发生有一定的遗传基础;目前已知MMPs和TIMPs在子宫内膜重构中起重要的作用,MMPs和TIMPs的异常表达可以促进子宫内膜异位的发生,但其调节和相互作用的机制仍不明确;nm23基因在子宫内膜异位症的发生和发展过程中的作用也不清楚。

宫颈鳞癌组织中肿瘤转移基因1、上皮钙黏素mRNA的表达

目的:探讨肿瘤转移基因1(MTA1)、上皮钙黏素(E-cadherin)mRNA表达与宫颈鳞癌发生发展及转移的关系。方法:应用原位杂交方法检测52例宫颈鳞癌组织、34例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和28例正常宫颈上皮组织中MTA1、E-cadherin mRNA的表达。结果:①宫颈鳞癌组织、CIN组织和正常宫颈黏膜组织中MTA1 mRNA的阳性表达率分别为88.5%(46/52)、63.6%(21/34)和7.1%(2/28),差异有统计学意义(P<0.05);宫颈鳞癌组织、CIN组织和正常宫颈黏膜组织中E-cadherin mRNA的阳性表达率分别为44.2%(23/52)、55.9%(19/34)和100.0%(28/28),差异亦有统计学意义(P<0.05)。②有淋巴结转移组MTA1 mRNA阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05);有淋巴结转移组E-cadherin mRNA阳性表达率低于无淋巴结转移组(P<0.05)。③宫颈鳞癌组织中MTA1与E-cadherin mRNA的表达呈负相关(r=-0.284,χ2=4.204,P<0.05)。结论:MTA1 mRNA的高表达及E-cadherin mRNA表达缺失与宫颈鳞癌的发生发展及转移有关。

结直肠癌微转移基因的研究进展

结直肠癌患者根治术后,其复发和转移率较高。随着研究的不断深入,结直肠癌早期微转移也越来越受到肿瘤学家们的重视。现综述近年来有关结直肠癌微转移检测指标等方面的研究进展。

应用Southern印迹杂交法检测转移基因在宿主细胞中的整合

目的 应用Southern印迹杂交法 (Southernblot)证实转移基因整合至宿主细胞基因组DNA。方法 酚氯仿法提取基因转导的PA317/AIM及K5 6 2 /AIM细胞基因组DNA ,以聚合酶链反应 (PCR)扩增转移基因片段 ;随机引物法标记3 2 P -DNA探针 ,与经BamHI酶切、琼脂糖凝胶电泳、转移至尼龙膜的基因组DNA进行Southern杂交反应 ,检测转移基因的整合。结果 PCR反应和Southernblot分析证实转移基因存在于受体细胞基因组DNA中。结论 Southern印迹杂交法证实转移基因稳定整合至逆转录病毒生产细胞PA317/AIM及靶细胞K5 6 2 /AIM中。

肿瘤转移基因与转移抑制基因的研究进展

肿瘤转移是一个复杂的多阶段过程,它与致瘤性是各由一组遗传因子所决定。应用细胞融合、DNA转染、RFLP分析和减法杂交等方法的研究结果表明,在细胞基因组存在促进浸润、转移的基因(转移基因)和抑制转移的基因(转移抑制基因)。转移基因与转移抑制基因的异常表达及其与宿主因素的相互作用,最终决定了瘤细胞的转移表型。

鲍曼不动杆菌耐药相关基因和水平转移基因的检测及亲缘性分析

【摘要】目的调查耐药鲍曼不动杆菌菌株问的亲缘关系。方法收集2012年1月至2013年12月该院住院患者痰标本中分离的耐药鲍曼不动杆菌共20株，采用聚合酶链反应（PCR）的方法分析3种与耐药相关的看家基因（carO、gyrA、parC）和54种水平转移获得与β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因以及12种接合性质粒、转座子、插入序列、整合子等可移动遗传元件遗传标记，再对检测结果作样本分析。结果20株耐药鲍曼不动杆菌共检出3种与耐药相关的看家基因carO、gyrA、parC突变，6种获得性β-内酰胺类耐药基因（TEM-1、PER、ADC-30、ADC-58、ADC-59、OXA-23），5种获得性氨基糖苷类耐药基因（aac（3）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅰb、ant（3”）-Ⅰ、aph（3’）-I、armA），2种抗菌制剂外排泵基因（adeB、qacE△1），7种可移动遗传元件的遗传标记（int Ⅰ 1、tnpU、tnp513、IS26、IS903、ISabal、ISabag）。样本聚类分析提示，20株耐药鲍曼不动杆菌可分为A与B二个簇，A簇为多耐药鲍曼不动杆菌，B簇为泛耐药鲍曼不动杆菌。结论A簇1，2，13，17，20号株与10，14，16号株之间亲缘关系较近；B簇4-6-8-9-15-19号株为同一克隆，即为克隆传播。获得菌株之间的亲缘关系对院内感染实时监测和控制院内感染意义重大。

垂体肿瘤转移基因在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨喉鳞状细胞癌中垂体肿瘤转移基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)蛋白表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测56例喉鳞癌及13例喉正常黏膜中PTTG的表达,分析PTTG表达与喉鳞癌临床病理指标之间的关系。结果 PTTG蛋白在喉鳞癌组织中的阳性表达率为64.3%,在喉正常黏膜细胞中的阳性表达率为23.1%(P<0.05);PTTG的阳性表达及其强度与喉鳞癌临床病理指标之间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 PTTG基因蛋白阳性表达及其强度可做为判定喉鳞癌生物学行为及其预后的参考指标之一。

猪精子电激法转移基因研究初报 Ⅰ不同电激条件对猪精子活力和死亡的影响

电激法(electroporation),也有译名电脉冲刺激、电场转移基因法等。其基本原理是,生物细胞在外界的高电压,短脉冲电场作用下,细胞膜结构发生变化,使膜产生可逆性的电穿孔。此时若在细胞膜周围放置一定浓度和大小的 DNA 分子,DNA 能在细胞膜产生瞬间电穿孔的时候进入细胞,从而达到向生物细胞导入外源基因的目的。

家蚕核型多角体病毒水平转移基因分析

为了探讨杆状病毒基因组的遗传进化模式,文章利用家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和其宿主家蚕全基因组数据,进行了全基因组的同源性搜索和系统进化分析,结果显示,BmNPV的几丁质酶(Chi)基因、凋亡抑制蛋白3(IAP3)基因和尿苷二磷酸葡萄糖转移酶(UGT)基因为水平转移基因。这3个基因都来源于其宿主昆虫。通过核苷酸组成、密码子偏好性、选择压力等基因特征分析,发现BmNPV水平转移基因与其基因组序列存在明显差异,进一步验证水平转移基因的外源性。对3个水平转移基因的功能分析发现它们有利于杆状病毒在宿主昆虫中的侵染与繁殖,并提高杆状病毒在昆虫中的生存能力。

胃低分化腺癌中T淋巴瘤侵袭转移基因-1、趋化生长因子受体4和血管内皮生长因子的表达及意义

目的检测胃低分化腺癌中T淋巴瘤侵袭转移基因(TIAM)-1、趋化生长因子受体(CXCR)4和血管内皮生长因子(VEGF)的表达,关注其临床意义。方法 103例胃低分化腺癌作为观察组,选择50例高级别上皮内瘤变的胃黏膜组织作为对照组1,选择50例低级别上皮内瘤变的胃黏膜组织作为对照组2,选择50例距肿瘤边缘>5 cm的胃黏膜组织作为正常对照组。均应用免疫组化SP法检测TIAM-1、CXCR4和VEGF的表达。结果四组中TIAM-1、CXCR4和VEGF的阳性率差别有统计学意义,观察组中TIAM-1、CXCR4和VEGF表达的阳性率与肿瘤的肌层浸润深度、网膜累犯、脉管侵犯和淋巴结转移相关。相关性分析显示观察组中TIAM-1和VEGF的表达具有正相关性。结论胃低分化腺癌中TIAM-1、CXCR4和VEGF高表达对促进肿瘤的发生和进展过程有重要意义,TIAM-1和VEGF可能具有正向协同作用。

多聚赖氨酸包被球囊导管转移基因表达的时相特征

目的评估多聚赖氨酸包被球囊导管－重组腺病毒／ＬａｃＺ（Ａｄ５／ＬａｃＺ）局部基因转移系统的基因转移效率与表达时间。方法利用该系统，在体将Ａｄ５／ＬａｃＺ导入兔腹主动脉下段。然后于转基因后不同的时间点对转基因表达进行了定性（Ｘ－Ｇａｌ染色）及定量（β－Ｇａｌ活性）测定。结果基因转移后７天的表达最高。３天与１４天的次之，２１天时表达显著下降。２８天时几乎测不到转基因的表达。结论该基因转移系统能有效地实现直接、在体的基因转移。腺病毒介导的基因表达时间是短暂的。其表达峰值约在７天左右。

贝伐珠单抗联合FOLFOX化疗方案治疗转移性结肠癌的近期疗效及对肿瘤相关转移基因-1、血管内皮生长因子表达的影响

目的探究贝伐珠单抗联合FOLFOX化疗方案治疗转移性结肠癌的近期疗效,并观察不同化疗方案对肿瘤相关转移基因-1(Mta-1)以及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法将80例转移性结肠癌患者按治疗方式不同分为对照组及联合组,每组40例。对照组采用FOLFOX化疗方案,联合组采用FOLFOX化疗方案联合贝伐珠单抗治疗,观察并对比两组患者的近期疗效、疾病进展时间(TTP)、不良反应发生率以及治疗前后Mta-1、VEGF表达的差异。结果两组患者客观有效率和疾病控制率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。两组患者高血压、血栓、蛋白尿发生率及不良反应总发生率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。治疗后,两组患者Mta-1阳性细胞百分比和VEGF水平均降低(P﹤0.05),且联合组患者Mta-1阳性细胞百分比和VEGF水平均明显低于对照组(P﹤0.01)。对照组患者的中位TTP为13个月,短于联合组患者的24个月,差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论贝伐珠单抗联合FOLFOX化疗可有效降低患者Mta-1阳性细胞百分比和VEGF水平,且与FOLFOX化疗方案相比,贝伐珠单抗联合FOLFOX化疗患者的TTP更长,有推广价值。

非配子融合转移基因技术在小麦诱变育种中的应用初探

实验通过同位素示踪和农艺性状基因转移表达两个方面,对非配子融合基因技术在诱变育种实践中应用的可行性,进行了初步研究。结果表明:利用此技术转移遗传物质的方法是可行有效的,质量性状基因较数量性状基因容易进行转移。

高效转移基因组DNA的阳离子法

目前把外源基因引入植物的方法通常是只利用克隆基因作为供体DNA.然而,许多重要的农艺性状是由多基因或未知基因所控制.借助于原生质体融合或染色体转移已完成了未克隆基因组DNA对原生质体的转移,获得了含多基因大片段DNA的转移.但是,这些方法太难且复杂,常常只能采用限定量的基因型. Metapontum Agrobios的N.M.Antonelli和依阿华州立大学的J.Stadler开发了把未克隆基因转移到植物细胞的简便方法.此方法(以前曾用于哺乳动物细胞转化)过程是:(1)先用聚合阳离子Polybrene(Aldrich)预处理原生质体,然后加入DNA或(2)

检索可产生霉味的曲菌甲基化转移基因

霉味是损害清酒品质的重要原因之一，其成分主要是2，4，6-三氯甲氧苯（TCA），一般认为它的污染途径主要是由曲菌将2,4，6-三氯苯酚（TPC）转换成了TCA。其他还有环境因素，如工厂内使用的木制拍子，所有木制工具都可能发霉。还有由消毒剂次氯酸钠等含氯消毒剂产生的氯化物质等。