转移黏附基因在乳腺癌组织中的表达及其与肺转移的相关性研究

目的研究转移黏附基因(MTDH)在乳腺癌组织中的表达及与肺转移的相关性,为进一步研究乳腺癌侵袭转移奠定基础。方法将40只裸小鼠随机分为空白对照组及乳腺癌模型组a、b、c,分别于接种第10、15、22日处死模型组a、b、c和空白对照组(与模型组c同时处死),取原位瘤及肺组织,肺表面结节计数,免疫组化检测瘤组织中MTDH表达水平。结果模型组a、b、c乳腺癌组织中MTDH阳性表达率分别为30.3%、62.7%、88.2%,表达逐渐增高;对3组裸鼠肺转移数目进行统计发现,有肺转移者,MTDH表达量更高(χ~2=7.473,P<0.01),且肺转移数目越多,其表达量越高(Spearman=0.859,P<0.01)。结论 MTDH在乳腺癌组织中的表达显著高于正常乳腺组织,且与肿瘤的进展、肺转移的数目呈正相关,提示MTDH与乳腺癌的发生、发展密切相关,与乳腺癌肺转移密切相关。

99Tcm-甲氧基异丁基异腈乳腺断层双时相显像与乳腺癌肿块血液中转移-黏附基因表达的关系

目的探讨99Tcm-甲氧基异丁基异腈断层双时相显像(99Tcm-MIBI SPECT)与乳腺癌肿块血液中转移-黏附基因(MTDH)之间的关系。方法选择2010年9月—2012年11月南华大学附属南华医院收治的72例乳腺癌患者为研究组,同期112例乳腺良性肿块患者为对照组,分别于注射99Tcm-MIBI 5 min后采集早期相、180 min后采集延迟相平面像,明确99Tcm-MIBI SPECT的阳性标准;收集乳腺活检后肿块内血液,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MTDH的mRNA表达,明确乳腺癌不同病理分期MTDH的mRNA表达情况;分析乳腺癌患者99Tcm-MIBI SPECT显像和肿块内血MTDH mRNA表达的关系。结果 (1)99Tcm-MIBI SPECT显示,对照组和研究组99Tcm-MIBI SPECT早期相T/NT间差异有统计学意义〔(1.94±1.55)和(4.82±4.13),t=6.691,P<0.001〕;研究组早期相和延迟相T/NT间差异无统计学意义〔(4.82±4.13)和(6.56±10.95),t=1.262,P=0.209〕。据此99Tcm-MIBI SPECT阳性标准可确立。(2)不同病理分期的乳腺癌患者肿块血MTDH mRNA表达量间差异有统计学意义(P<0.001),且Ⅳ期高于Ⅲ期(P<0.05),Ⅲ期高于Ⅱ期(P<0.05),Ⅱ期和Ⅰ期间差异无统计学意义(P>0.05)。(3)99Tcm-MIBI SPECT对乳腺癌患者MTDH mRNA表达的阳性预测值为96.8%,阴性预测值为66.7%,敏感度为95.3%,特异度为75.0%。一致性检验显示,99Tcm-MIBI SPECT和肿块内血MTDH mRNA表达量的Kappa系数为0.67。结论 RT-PCR检测乳腺肿块血MTDH mRNA的表达,可有效预测中-晚期乳腺癌患者病理分期和预后;99Tcm-MIBI SPECT对乳腺癌MTDH的表达有较高的阳性预测值、敏感度和特异度,可用于乳腺癌化疗耐药和内分泌耐药的评估,可为MTDH的靶向性治疗提供依据,但需注意99Tcm-MIBI SPECT对乳腺癌MTDH表达的阴性预测值较低。临床试验注册注册机构为中国临床试验注册中心,注册号为ChiCTR-DDT-09000356。

缺氧环境下shRNA下调MTDH基因对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨缺氧环境下MTDH表达下调对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法 1利用二氯化钴模拟缺氧环境,采用RT-PCR及Western blot法检测HIF-1α及MTDH基因在缺氧环境下表达水平的改变;2缺氧环境下将加入MTDH-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧MTDH-shRNA组)、control-shRNA转染质粒的MCF-7细胞(缺氧Control-shRNA组)及仅予单纯二氯化钴缺氧处理的MCF-7细胞(单纯缺氧组)分别转染,24 h后观察转染率,再应用RT-PCR及Western blot法检测MTDH基因在mRNA和蛋白水平上的变化;3MTT实验检测下调MTDH基因表达对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖的影响,并采用Hoechst33258染色及流式细胞术检测3组细胞的凋亡情况;4采用RT-PCR及Western blot法观察下调MTDH基因对单纯缺氧组、缺氧Control-shRNA组和缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α表达的影响。结果 1缺氧环境下MCF-7细胞HIF-1α基因表达无变化,HIF-1α蛋白表达在一定范围内随缺氧时间延长而升高(P<0.05),MTDH基因及蛋白表达随缺氧时间延长均逐渐升高(P<0.05);2MCF-7细胞转染率约60%,与单纯缺氧组和缺氧Control-shRNA组相比,缺氧MTDH-shRNA组MTDH基因及蛋白表达均减低(P<0.05);3下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组MCF-7细胞增殖抑制率减弱(P<0.05),凋亡细胞数量增加(P<0.05);4下调MTDH基因表达后,与单纯缺氧组及缺氧Control-shRNA组比较,缺氧MTDH-shRNA组HIF-1α蛋白表达减低(P<0.05)。结论缺氧环境下,下调MTDH基因可调控MCF-7细胞HIF-1α蛋白表达,同时降低MCF-7细胞增殖能力,并促进其凋亡。

下调MTDH基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨下调MTDH基因表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法乳腺癌MCF-7细胞株常规消化并接种,按照LipofectamineTM2000说明书进行转染,转染组转染MTDH-homo-1432,对照组转染等剂量的control-FAM。转染24 h后检测转染效率。琼脂糖凝胶电泳检测MTDH抑制效果。Western blotting法检测转染前后MTDH蛋白表达。通过MTT和流式细胞术检测MTDH基因表达下调后对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡坏死的影响。结果 MTDH-siRNA的转染率达90%,转染后MTDH-siRNA-1432对MTDH表达的干扰作用最为显著,抑制效率达89%。Western blotting检测结果显示,转染后MTDH蛋白表达降低。转染组乳腺癌细胞增殖受到抑制。转染组、对照组G1期细胞比例分别为67.81%±1.07%、46.81%±0.26%(P<0.05),G2+S期细胞比例分别为29.08%±1.14%、55.55%±0.27%(P<0.05)。转染组细胞凋亡比例10.60%±0.46%,坏死比例12.90%±3.63%;对照组细胞凋亡比例4.80%±0.20%,坏死比例6.10%±0.44%,转染组细胞凋亡和坏死比例高于对照组(P均<0.05)。结论下调MTDH基因表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,并促进细胞凋亡和坏死。