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转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因真核表达质粒的构建及生物学活性鉴定
1
作者
付素珍
原志庆
《实用儿科临床杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第7期567-569,i001,共4页
目的 构建小鼠转粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,转染红白血病细胞系FBL 3,并鉴定其活性。方法 采用分子克隆技术 ,构建mGM CSF真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,电穿孔法将其导入红白血病细胞系FBL ...
目的 构建小鼠转粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,转染红白血病细胞系FBL 3,并鉴定其活性。方法 采用分子克隆技术 ,构建mGM CSF真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,电穿孔法将其导入红白血病细胞系FBL 3,G4 18筛选G4 18抗性细胞 ,限制性稀释法筛选G4 18抗性细胞克隆。PCR和RT PCR方法鉴定GM CSF基因整合和稳定表达。骨髓造血祖细胞增殖实验和骨髓造血祖细胞集落刺激实验鉴定其生物学活性。结果 采用PCR方法扩增mGM CSFcDNA序列 ,BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后装入 pcDNA3质粒 ,构建真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,酶切和测序结果与预期相符 ,无插入、丢失、突变 ,方向正确。PCR和RT PCR结果显示 ,GM CSF基因整合到受体细胞染色体中并稳定表达。表达GM CSF的FBL 3 GM CSF细胞培养上清可明显刺激小鼠骨髓单个核细胞增殖 ,并能刺激干细胞形成克隆 ,形成克隆数为 (5 4 .6 7± 4 .83)个 ,形成率为 0 .5 4 7%。结论 构建mGM CSF真核表达质粒pcDNA3 GM CSF ,获得稳定表达该基因并具有生物学活性的细胞克隆 ,为制备转GM CSF基因瘤苗 。
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关键词
转粒细胞
巨噬
细胞
集落刺激因子基因
真核表达质粒
红白血病
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职称材料
题名
转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因真核表达质粒的构建及生物学活性鉴定
1
作者
付素珍
原志庆
机构
新乡医学院第一附属医院儿科
新乡医学院病理学教研室
出处
《实用儿科临床杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第7期567-569,i001,共4页
基金
河南省自然科学基金资助项目 (0 1 1 1 0 2 1 2 0 0 )
文摘
目的 构建小鼠转粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,转染红白血病细胞系FBL 3,并鉴定其活性。方法 采用分子克隆技术 ,构建mGM CSF真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,电穿孔法将其导入红白血病细胞系FBL 3,G4 18筛选G4 18抗性细胞 ,限制性稀释法筛选G4 18抗性细胞克隆。PCR和RT PCR方法鉴定GM CSF基因整合和稳定表达。骨髓造血祖细胞增殖实验和骨髓造血祖细胞集落刺激实验鉴定其生物学活性。结果 采用PCR方法扩增mGM CSFcDNA序列 ,BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后装入 pcDNA3质粒 ,构建真核表达质粒 pcDNA3 GM CSF ,酶切和测序结果与预期相符 ,无插入、丢失、突变 ,方向正确。PCR和RT PCR结果显示 ,GM CSF基因整合到受体细胞染色体中并稳定表达。表达GM CSF的FBL 3 GM CSF细胞培养上清可明显刺激小鼠骨髓单个核细胞增殖 ,并能刺激干细胞形成克隆 ,形成克隆数为 (5 4 .6 7± 4 .83)个 ,形成率为 0 .5 4 7%。结论 构建mGM CSF真核表达质粒pcDNA3 GM CSF ,获得稳定表达该基因并具有生物学活性的细胞克隆 ,为制备转GM CSF基因瘤苗 。
关键词
转粒细胞
巨噬
细胞
集落刺激因子基因
真核表达质粒
红白血病
Keywords
granulocyte-macrophage colony stimulating factor
eukaryotic expressing plasmid
erythroleukemia
分类号
R733.7 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因真核表达质粒的构建及生物学活性鉴定
付素珍
原志庆
《实用儿科临床杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
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