金雀异黄酮通过调控转胶蛋白-2表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的研究金雀异黄酮(GEN)对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及可能分子机制。方法本研究的起止时间为2018年10月至2019年11月。建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型(H/R组),以常规培养的细胞作为对照组;用浓度分别为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L的GEN处理H9c2细胞后再进行H/R处理,记为GEN低、中、高浓度组;将小干扰RNA阴性对照(si-NC)、转胶蛋白-2(TAGLN2)小干扰RNA(si-TAGLN2)转染至H9c2细胞中再进行H/R处理,记为H/R+si-NC组、H/R+si-TAGLN2组;将空载体质粒(pcDNA)、TAGLN2过表达质粒(pcDNA-TAGLN2)转染至H9c2细胞中用20 mg/LGEN处理再进行H/R处理,记为H/R+GEN+pcDNA组、H/R+GEN+pcDNA-TAGLN2组。试剂盒检测丙二醛含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测TAGLN2蛋白表达;结果与对照组比较,H/R组H9c2细胞凋亡率[(25.36±2.14)%比(7.25±0.71)%]、丙二醛含量[(11.02±1.17)nmol/L比(3.54±0.34)nmol/L]、TAGLN2表达水平[(0.83±0.07)nmol/L比(0.39±0.03)nmol/L]升高,SOD、GSH-Px活性降低。与H/R组比较,GEN低、中、高浓度组H9c2细胞凋亡率[(19.68±1.87)%,(14.02±1.58)%,(10.22±1.03)%比(25.36±2.14)%]、丙二醛含量[(8.82±0.79)nmol/L,(6.33±0.61)nmol/L,(4.87±0.46)nmol/L比(11.02±1.17)nmol/L]、TAGLN2表达水平[(0.71±0.06),(0.59±0.05),(0.47±0.04)比(0.83±0.07)]降低,SOD、GSH-Px活性升高。与H/R+si-NC组比较,H/R+si-TAGLN2组H9c2细胞凋亡率[(12.48±1.24)%比(26.14±2.33)%]、丙二醛含量降低[(5.26±0.51)nmol/L比(11.46±1.13)nmol/L],SOD、GSH-Px活性升高。与H/R+GEN+pcDNA组比较,H/R+GEN+pcDNA-TAGLN2组H9c2细胞凋亡率[(22.65±2.41)%比(10.98±1.07)%]、丙二醛含量[(9.36±0.94)nmol/L比(4.88±0.48)nmol/L]降低,SOD、GSH-Px活性升高。结论GEN通过下调TAGLN2表达可保护H/R诱导的心肌细胞损伤。

日本蟾蜍TAGLN2 cDNA的克隆与生物信息学分析

为研究蟾蜍皮肤中多肽类有效成分,通过菌落PCR(polymerase chain reaction)对日本蟾蜍(Bufojaponicus formosus)皮肤cDNA质粒文库进行筛选,对测序结果进行分析及同源性比较,获得转胶蛋白-2(transgelin-2,TAGLN2)的5′端缺失的部分cDNA序列(GenBank登录号为JX197456),长为997 bp,包括348 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF)、5'端31 bp及3'端618 bp的非翻译区(untranslated region,UTR),编码由115个氨基酸残基组成的蛋白质。推导的氨基酸序列含有一个调宁蛋白同源性结构域(calponin homology,CH)、两个可形成二硫键的半胱氨酸残基、3个α螺旋区域和5个潜在的磷酸化位点。氨基酸序列同源性分析显示,本文获得的日本蟾蜍N-端截短型TAGLN2与热带爪蟾(Xenopus(Silurana)tropicalis)和非洲爪蟾(Xenopus laevis)相对应部分的同源性分别为90%和89%,与其他7种动物的同源性介于71%～85%之间。