低聚异麦芽糖糖化转苷工艺的优化及成分分析

以玉米面挤压液化后的液化液为原料,使用真菌α-淀粉酶和α-葡萄糖转苷酶完成共同糖化转苷过程。在单因素试验基础上,采用Box-Behnken设计,运用响应面分析法,研究探讨真菌α-淀粉酶加量、α-葡萄糖转苷酶加量、酶解温度、酶解时间与低聚异麦芽糖(IMO)含量的关系。试验结果表明:低聚异麦糖共同糖化转苷的最佳工艺是:真菌α-淀粉酶加量35 U/g,α-葡萄糖转苷酶加量128 U/g,酶解温度55℃,酶解时间18 h,在此条件下进行共同糖化转苷,玉米面的糖化转苷糖液IMO含量可达57.94%。研究为以玉米面为原料高效生产低聚异麦糖提供了参考。

籼米淀粉酶法制备低聚异麦芽糖糖化转苷工艺研究

为提高碎米的综合利用程度和低聚异麦芽糖中异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖的含量,采用碎籼米淀粉酶法制备低聚异麦芽糖。以低聚异麦芽糖中异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖含量为考察指标,采用单因素实验和正交实验对糖化转苷工艺进行优化,确定最佳工艺参数为籼米淀粉液化液DE值为12,α-葡萄糖转苷酶用量为1.0U/(g淀粉),糖化转苷p H5.0、糖化转苷温度55℃、糖化转苷时间36h,在此条件下,低聚异麦芽糖中异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖的含量为(37.86±0.31)%,达到了中国发酵工业协会拟定的低聚异麦芽糖质量标准。

α-转移葡萄糖苷酶的转苷作用机理探究

通过用高效液相色谱(HPLC)全程跟踪转苷反应过程的方法,对α-转移葡萄糖苷酶将麦芽糖转变为异麦芽糖的酶促反应作用机理进行了探讨。结果表明,在转化过程中α-转移葡萄糖苷酶先把麦芽糖的α-1,4糖苷键打断,分解为两个葡萄糖单元,然后再通过α-1,6糖苷键连接的方式重新键合,完成从麦芽糖到异麦芽糖的异构化过程。而由麦芽糖生成异麦芽糖的整个转苷过程是在分子内进行的。与此同时,由麦芽糖分解出来的部分葡萄糖单元通过分子间作用的方式与麦芽糖或异麦芽糖发生反应,生成潘糖或者异麦芽三糖。

离子交换树脂去除糖化酶中转苷酶的研究

本文研究了利用阳离子交换树脂去除液体曲糖化酶中葡萄糖苷转移酶的方法。结果表明：阳离子交换树脂具有较强的交换吸附转苷酶的作用，而糖化酶活力不受损失。液体糖化酶pH值和进液流速对去除转苷酶效果影响较大，在pH3．0，流速2ml／min条件下，转苷酶去除率达90％。

不同生长日龄罗汉果中糖基转苷蛋白凝胶电泳分析

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对不同日龄罗汉果内的主要糖基转苷蛋白进行分析,寻找罗汉果生长过程中皂苷形成的关键蛋白,为生物转化法生产罗汉果甜苷提供科学依据。得到一较清晰的罗汉果糖基转苷蛋白电泳图谱。据电泳图谱分析,初步得出罗汉果糖基转苷蛋白的内在变化规律。结果表明:罗汉果中存在多种糖基转苷蛋白,不同生长日龄罗汉果的糖基转苷蛋白也不一致,在几个关键时期糖基转苷蛋白变化特别明显。

转苷酶活性测定方法

对测定糖化酶中葡萄糖苷转移酶（转苷酶）酶活的方法进行了研究。采用α－ＭＧ为底物，用ｋｎｉｇｈｔ－Ａｌｅｎ法测定转苷酶催化α－ＭＧ分解产生的葡萄糖，计算得转苷酶酶活值。通过条件试验，找到了底物浓度、碱性铜试剂用量、加热时间、滴定剂浓度等的最佳范围。并测定了３×１０４，５×１０４，６×１０４μｍｏｌ／ｍｉｎ糖化酶粉剂和发酵液中的转苷酶活性，做了酶法、光度法与该方法的对比试验。

两种α–葡萄糖苷酶的酶学性质及转苷作用

来源于黑曲霉(Aspergillus niger)的不同α–葡萄糖苷酶,其对底物的水解和转苷活性均存在一定差异,影响了它们在实际生产中的应用.以甲醇毕赤酵母重组菌株分别表达的两种α–葡萄糖苷酶Glu-A和Glu-B为研究对象,分析了两种酶的酶学性质,结果表明Glu-A和Glu-B最适作用温度均为50,℃,最适p H分别为5和6.对底物麦芽糖的转苷作用研究表明,产物低聚异麦芽糖中各种糖的种类和比例差别较大,Glu-A作用麦芽糖后的总低聚糖、异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖的生成率分别为51.04%、15.79%、31.41%和4.18%,而Glu-B作用麦芽糖后的总低聚糖、异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖的生成率分别为35.85%、16.71%、4.15%与15.85%.

酶法转苷生产双歧因子啤酒技术研究图1各种糖含量液相色谱仪图谱23结论及讨论231以麦芽、大米为主要原料,运用麦芽及转苷酶转苷法生产双歧因子啤酒,产品的理化指标与普通啤酒无较大差异,酒精度较同类普通啤酒低,有开发低醇啤酒的可能。232以麦芽及转苷酶法生产的双歧因子功能

通过酶法转苷 ,在普通啤酒中引入双歧因子 ,既扩大了籼米的使用量 ,又赋予啤酒保健功能。进行了单酶转苷试验、发酵糖剔除试验、转苷与啤酒工艺吻合试验 ,结果表明采用单酶转苷可以与啤酒发酵工艺有机结合起来 ,所生产的双歧因子啤酒除啤酒酒精度略低外 ,其它理化指标均符合标准 ,低聚糖含量指标达到30mg/mL左右。这有助于开发低醇啤酒 ,是低醇啤酒生产中控制酒精度的一种有效方法。籼米使用量达到5 0 % ,较普通啤酒的籼米用量增加 10 %～ 2 0 %。

利用葡萄糖转苷酶制备纤维素酶可溶性诱导物的研究

在纤维素酶生产中,常用的诱导物纤维素是不溶性的固体高分子化合物,存在着传质阻力大、不易于流加培养、产酶效率低等问题。今以葡萄糖为原料,利用葡萄糖转苷酶的催化作用,定向合成纤维素酶的可溶性诱导物。经高效液相色谱分析,发现转糖苷产物中含有纤维素酶的强诱导物槐糖。在50℃下,转糖苷反应的适宜葡萄糖浓度为300～500mg·mL-1,pH3～4.5,反应100h,产物中槐糖含量可达40mg·mL-1。将葡萄糖经转苷酶作用后的复合物用于纤维素酶的生产,与直接采用葡萄糖相比,产酶时间提前25h,滤纸酶活力提高14倍。该研究结果为酶法制备纤维素酶的高效可溶性诱导物探明了一条新途径,对于提高纤维素酶的生产效率、加速其工业化应用具有重要意义。

微波辅助酶催化甜菊苷的转苷和水解

分别研究了微波辅助α-环糊精转移酶(α-CGTase)催化甜菊苷(St)转苷,和β-半乳糖苷酶催化St水解的反应。实验表明,微波能够加速来源于Paenibacillus macerans JFB05-01的α-CGTase催化St转苷反应,催化效率提高了21.7倍;但微波对β-半乳糖苷酶催化St的水解反应的影响较小。α-CGTase的加酶量为1 000 U/g时,反应1 min,St的转化率高达71.6%,St-Glc 1的产率为23.7%。

转苷酶在低醇啤酒酿造中的应用

本文采用跳跃式糖化与加转苷酶相结合的方法来调整发酵度,通过对转苷酶的加量、时间、pH值、温度进行正交实验,选择最佳工艺条件:煮沸之前把麦汁温度调到55℃、pH调到5.5、添加量为0.1%、添加时间50min,从而生产出优质的低醇啤酒.

一种快速测定α-葡萄糖转苷酶酶活的方法

参照《QB 2525-2001食品添加剂α-葡萄糖转苷酶》中酶法测定的基本原理,采用α—MG为底物,通过血糖测定试剂盒分析转苷酶转化生成的葡萄糖,来测定转苷酶的酶活。该方法简单,快速,灵敏度高。

转苷法生产双歧因子啤酒的研究

双歧因子即低聚异麦芽糖，通过小试和中试试验，结果表明利用现有啤酒生产设备，以转苷法试制的低聚异麦芽糖啤酒既具有啤酒的清爽口味，又具有双歧因子的保健功能。

黑曲霉产α-葡萄糖转苷酶发酵条件的研究

本文以α-葡萄糖转苷酶为研究对象,研究了啤酒酵母自溶物替代商业酵母膏作为培养基对发酵产酶的影响,通过单因素试验得到最适的酵母自溶物的添加量为120 m L/L。在此基础上,以发酵酶活力为指标,通过正交试验法对黑曲霉发酵产酶的条件进行了优化,结果表明,产酶最佳条件为发酵温度30℃,发酵初始p H 6.5,发酵时间120 h,摇床转速200 r/min,通过验证试验,得出α-葡萄糖转苷酶的酶活力可达200 U/m L。

解脂耶氏酵母表面展示β-淀粉酶与α-葡萄糖转苷酶及一步法由淀粉合成低聚异麦芽糖

低聚异麦芽糖(IMO)所具有的良好理化性质和生理功能,使得其在食品、医药、饲料、化妆品等领域得到广泛应用。但目前工业上采用多酶协同法由淀粉合成低聚异麦芽糖,步骤繁琐、成本较高。因此开发出更加经济简便的方法生产低聚异麦芽糖具有重要的应用价值。通过将β-淀粉酶(βa)和耐热α-葡萄糖转苷酶(GT)以不同的方式进行融合,并利用表面展示系统固定在食品安全微生物解脂耶氏酵母细胞表面,实现自我表达与固定。筛选得到高产菌株Yβa-GT29。大量培养获得细胞,转化液化的淀粉可实现一步法合成IMO,50℃转化20h即可得到纯度为75.3%的低聚异麦芽糖,方便了低聚异麦芽糖的生产。

酶法制备低聚异麦芽糖转苷工艺研究

低聚异麦芽糖(IMO)作为全球寡糖市场重要的组成部分,具有良好的益生元效应。为系统了解酶法合成低聚异麦芽糖的条件对其含量的影响,以玉米淀粉为原料,利用α-葡萄糖苷酶通过转苷工艺合成低聚异麦芽糖,考察不同条件对其含量的影响。结果表明:玉米淀粉经液化和糖化工艺后其麦芽糖含量为(74.24±0.36)%,基于单因素试验和响应面优化确定最佳的转苷工艺参数为α-葡萄糖苷酶添加量为86 U/g淀粉液化液、温度58℃、pH值6.0、时间26 h,在此条件下低聚异麦芽糖含量为(62.21±0.36)%,其中异麦芽糖(IG2)、潘糖(P)和异麦芽三糖(IG3)含量分别为(20.91±0.17)%、(4.62±0.09)%和(12.33±0.19)%。

转糖基β-半乳糖苷酶产生菌Enterobacter agglomerans B1:筛选鉴定、发酵产酶及其合成低聚半乳糖的研究

从土壤中筛选获得一株具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶产生菌,综合其形态学特征、生理生化特征及16SrDNA序列同源分析结果,将其鉴定为成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)B1。通过单因子试验和正交试验,对B1菌株产转糖基β-半乳糖苷酶的培养条件进行了优化。最佳培养基主要组份为:乳糖1%,酵母粉1%,蛋白胨0.5%;发酵条件为:初始pH7.5,发酵温度25℃,发酵时间26h。在该培养条件下产酶量为9.7U/mL。利用薄层层析技术研究了pH、温度、底物浓度和反应时间对该菌株全细胞以乳糖为底物生成低聚半乳糖的影响,确定最适反应条件为:pH7.5缓冲液配制的30%乳糖溶液;50℃反应12h。最优化反应的转糖基产物经HPLC、TLC和MS分析,确定低聚半乳糖产量为40.7%,组分为转移二糖、三糖和四糖。

一步转苷法生产IMO-50型低聚异麦芽糖浆的研究

试验以色谱分离残液为原料,以低聚异麦芽糖浆中功能性成分和有效性成分(IMO)为考察指标,通过单因素和正交试验,确定了IMO-50型低聚异麦芽糖浆的最佳转苷生产工艺条件:加酶量0.7 L/t(干基)、温度55℃、p H5.0、底物浓度30%、反应时间16 h。在此条件下得到的IMO-50型低聚异麦芽糖浆的功能性成分和IMO含量最高,且完全符合GB/T 20881—2007的要求。

不同金属离子和表面活性剂对转糖基β-半乳糖苷酶活性的影响

在巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)发酵产转糖基β-半乳糖苷酶过程中,以单因素试验为基础研究了不同金属离子和表面活性剂对转糖基β-半乳糖苷酶活性的影响,利用Mintab15软件响应面分析法优化在转糖基β-半乳糖苷酶活性最大时的最佳金属离子浓度、表面活性剂的添加量及加入时机。结果表明,发酵培养基中镁离子浓度为0.031%,吐温-80添加量为0.24%,钾离子浓度为0.047%时,最有利于提高转糖基β-半乳糖苷酶的活性且酶的活性最大。为保持产酶过程中β-半乳糖苷酶的最大活性,在菌体生长对数期的初期,OD值为1.6时添加0.2%的吐温-80,添加过早或过晚都会影响转糖基β-半乳糖苷酶的活性。