芽枝霉菌Lcxs9产两种耐热β-葡萄糖苷酶的快速纯化及酶学特性研究

以高产β-葡萄糖苷酶的芽枝霉菌(Cladosporium cladosporioides)Lcxs9为研究对象,对其进行固态发酵,采用硫酸铵沉淀及强阴离子交换柱对其所产β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其分子质量,并研究其酶学性质。结果表明,快速纯化获得两种β-葡萄糖苷酶,分别命名为BG CC1和BG CC2,分子质量分别为41 kDa、53 kDa,比酶活力分别为8.6 U/mg、12.2 U/mg。两种酶都具有水解活性,可以水解纤维二糖得到葡萄糖;同时具有转苷活性,可以利用低分子质量的单糖合成纤维三糖和纤维四糖。两种酶的最适作用pH及温度均分别为6.0、60℃,均在pH 4~10和20~80℃条件下较稳定,Ag^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Hg^(2+)对两种酶均有抑制作用,而Mn^(2+)、Ca^(2+)和Mg^(2+)均有明显的激活作用,Zn^(2+)和Ni^(+)无明显影响。利用4-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,两种酶的动力学常数Km和最大反应速率(V_(max))均分别为2.76 mg/mL、20.6 U/mg。