基因重组草鱼生长激素(r-gGH)对草鱼鱼种生长的促进作用

家蚕多角体病毒表达系统在家蚕体内表达基因重组的草鱼生长激素(r-gGH),具有与天然草鱼生长激素(GH)相似的免疫原性和生物活性。为了节省基因工程研究中的下游工作(基因产物的分离和提纯),本研究将含有r-gGH的家蚕直接作为饵料源,冻干并磨碎后拌在饵料中投喂草鱼鱼种,通过养殖实验及生化测定分析对比r-gGH促进草鱼鱼种生长的剂量依存关系,筛选活性强的处理剂量和处理时间,期望为鱼类养殖生产提供一种较为经济、来源容易、方法简易而又切实可行的促进鱼种生长并且可以大规模应用的方式。实验结果表明,投喂含有r-gGH的家蚕,有相当一部分被鱼体消化道吸收,进入血液循环。投喂2h和6h后,草鱼鱼种的血清GH水平均显著高于对照组(投喂基本饲料)和投喂正常家蚕组;每天投喂和隔2天投喂,均使草鱼鱼种的血清GH水平显著升高,并对草鱼鱼种生长都有明显的促进作用。短期(3d)和长期(42d)投喂含有r-gGH的家蚕,无论是低剂量(10mg.g-1饲料)还是高剂量(20mg.g-1饲料),均极其显著地提高草鱼鱼种的血清GH水平;长期(42d)投喂亦对草鱼鱼种的生长有显著的促进作用,鱼体的相对体重增长率、相对体长增长率、食物转化率和肥满度显著增加。

基因重组金枪鱼生长激素对草鱼鱼种生长的促进作用

本文反映了基因重组金枪鱼生长激素(r-tGH)对草鱼鱼种生长的影响。r-tGH通过注射、灌喂和投喂三种方式都可以提高草鱼鱼种的相对体重和相对体长生长率、食物转化率和血清生长激素水平。同时,用药组的肥满度增加量比对照组的高,说明r-tGH促进草鱼鱼种体重增长的效果比促进体长增长的效果好。

重组人生长激素基因转染细胞的基因表达、低温保存及多肽调控

目的:为了解决腺垂体移植所面临的免疫排斥反应和移植物来源问题。方法:将重组hGH基因用磷酸钙介导导入培养的人皮肤成纤维细胞内,用Northern杂交、RIA和免疫荧光染色检测基因表达。用DMSO做冷冻保护剂,在液氮中保存2个月,用RIA确定低温保存前后转染细胞的功能状态。将GHRF、SS分别加入转染细胞的培养液中,用RIA确定下丘脑多肽对转染细胞的调控情况。结果:转染细胞至少能持续表达hGH90天。低温保存前后hGH无显著差异(P>0.05)。GHRF和SS都促进转染细胞分泌hGH,SS只能部分阻断GHRF的作用。结论:hGH基因转染细胞可取代腺垂体细胞做移植物,由于SS不能抑制hGH的分泌,故移植部位以自体皮下移植为佳,以克服免疫排斥。

大肠杆菌生产基因重组草鱼生长激素的分离纯化

草鱼生长激素cDNA在大肠杆菌细胞中表达后，重组草鱼生长激素在胞内形成不溶性的包含体．这种包含体在洗涤、变性、复性和C12反相层析等步骤后，产物再经快速蛋白液相色谱，重组草鱼生长激素在SDS-聚丙烯酰凝胶电泳中显示均一性，纯度可达90％放射免疫分析表明：重组草鱼生长激素具有草鱼生长激素的免疫活住．分离纯化产率约为1L细菌培养液1～2m重组草鱼生长激素．

草鱼生长激素基因在COS7细胞中转染表达的研究

应用RT-PCR技术克隆草鱼生长激素(gcGH)的cDNA,将此cDNA定向插入真核表达载体VR1020中,构建成重组真核表达质粒VgcGH.利用脂质体法使质粒VgcGH转染哺乳动物细胞COS7,对转染后的COS7细胞进行RT-PCR、ELISA和免疫荧光检测,分别在转录和翻译水平证实gcGH基因在COS7细胞中得到了持续和正确的转染表达.

鱼类生长激素的异源表达、应用及安全性评价

鱼类生长激素对鱼的生长发育起着重要的调节作用,能促进鱼体快速生长,提高饵料转化率,在水产养殖业中具有重大应用价值。转生长激素基因鱼具有快速生长效应,可以缩短养殖周期,降低养殖成本和风险。鱼类生长激素基因异源表达体系的建立和发展,使获得大量廉价的鱼类生长激素产品成为可能,为鱼类养殖业新型饵料添加剂的研制开辟了新的途径。本文综述了转生长激素基因鱼和鱼类生长激素基因的异源表达两方面的研究及其安全性评价。

转基因鱼离市场还有多远

根据本实验室转基因鱼育种研究的现状，讨论了“转基因鱼离市场还有多远”这一令人关注的问题。转草鱼生长激素重组基因（ＣＡｇｃＧＨ）鲤鱼具有明显的快速生长和饵料节省效应，鱼体有高干物质含量及高蛋白低脂肪的生化组成，是一种优质食用鱼。把一种鱼的基因转移到另一种鱼，即转“全鱼”基因后，受体鱼基因组改变的程度，仅相当于两种鱼杂交的１０万分之一左右，因而它对水生态系统的胁迫作用是轻微的，充其量可视为与相应杂交鱼实质等同。我国研制了世界第一尾转基因鱼。现在，在我国把第一个转基因动物养殖品种，即转ＣＡｇｃＧＨ鲤鱼首先推向市场，就技术条件而言已经成熟，问题只是如何获得政府批准以及社会和舆论的认同。

携RSKA/hIGF-1杂交基因重组质粒的构建及表达

背景:骨骼肌肌萎缩的治疗一直是基础和临床研究的难点和热点之一,近年来基因治疗在该领域得到了广泛的研究和关注。目的:拟构建携带大鼠骨骼肌α-肌动蛋白/人胰岛素样生长因子1(rat skeletal α-actin/human insulin-like growth factor-1,RSKA/hIGF-1)杂交基因的重组真核表达质粒,并观察其在C2C12细胞内表达。方法:登录Genbank数据库,查找RSKA启动子序列、hIGF-1cDNA序列和人生长激素3′尾端非编码区序列(3′UTR),把3段基因序列拼接后进行全基因合成,再将合成的全基因融合到PbluescriptⅡSK(+)[PBS]质粒上。用酶切电泳及测序检查质粒重组后序列的正确性;重组质粒转染C2C12细胞,应用RT-PCR和Western blot法分别鉴定转染细胞中hIGF-1 mRNA和蛋白的表达。结果与结论:重组质粒PBS-RSKA/hIGF-1酶切图谱与预期相同,测序验证插入片段全序列无改变。转染C2C12细胞后,RT-PCR及Western blot结果显示有特异条带出现,且差异明显。结果证明成功构建携RSKA/hIGF-1杂交基因的重组质粒,并在C2C12细胞中正确表达。

激素和活性多肽

892611 用固定在琼脂糖微珠上的重组大肠杆菌生产和释放人胰岛素原[英]/Birnba-um,S.…//Enzyme Microb.Technol.-1988,10(10).-601～605[译自 DBA,1989,8(1),89-00221]将释放人胰岛素原的大肠杆菌K-12W3110iq 细胞包裹在含2%琼脂糖的微珠内。