土壤分离转谷氨酰胺酶生产菌株

根据转谷氨酰胺酶催化反应结果的特性 ,设计了一个利用廉价的酶作用底物实施的蛋白质交联凝絮 -沉淀性能测定方法 ,并将其作为初筛手段 ,用于从土壤中分离生产转谷氨酰胺酶微生物菌种。从 13 9株放线菌中经初筛和摇瓶发酵测定酶活的复筛试验筛选得到 10株产酶菌株 ,其中一株酶活达 0 2 4U/mL ,并对其进行分类鉴定实验 ,确定为链霉菌属 ,编号为Streptomycessp .WZFF .W 12。

转谷氨酰胺酶生产菌株的诱变选育方案

来源于微生物的转谷氨酰胺酶(MTG)是一种十分重要的酶制剂,它作为一种多功能的蛋白质,具有催化蛋白质或多肽之间发生共价交联反应的活性,在食品、医药等工业中有着广泛的应用前景.本文简述了对转谷氨酰胺酶的研究发展历程,以及本实验室设计的对其生产菌种的诱变选育方案。

微生物谷氨酰胺转胺酶生产菌株的育种研究

在简要介绍微生物谷氨酰胺转胺酶的主要功能、应用和国外研究成果与目前状况后 ,指出该酶生产微生物菌种选育的重要性以及实际难度和艰巨性 ,阐述了进行初筛、复筛和常规诱变育种试验的关键技术手段及其成果效益。利用这些有效方法获得性能优良的高产酶突变菌株 ,进行规模化发酵工艺条件和酶制剂产品分离提纯技术研究 ,并在此基础之上 ,进一步开展通过“神舟”四号飞船搭载的微生物空间诱变育种研究强化产酶菌株的各种优良性能 ,说明了空间多种复合因素引发的综合搭载效果显著。

产谷氨酰胺转胺酶菌株的筛选及其产酶条件研究

利用设计的低廉简便的凝胶法从土壤中分离得到1株高产谷氨酰胺转胺酶(microbialtransglutami-nase,MTG)的菌株,初步鉴定属于放线菌纲的链霉菌属(Streptomycessp.)。摇瓶发酵试验表明,其最适产酶氮源和碳源分别是蛋白胨和葡萄糖,通过正交试验确定最适产酶培养基为(g/L):葡萄糖20.0,蛋白胨20.0,酵母提取物3.0,MgSO4·7H2O2.0,K2HPO4·3H2O2.0,KH2PO42.0,CaCO35.0。单因素试验确定最佳培养时间和最适pH分别为72h和7.0;在优化条件下,发酵液中MTG酶活达1.04U/mL。

微生物谷氨酰胺转胺酶高产菌株的诱变选育

以本实验室筛选的Streptomyces sp.WZFF.W-12(谷氨酰胺转胺酶活0.24U/ml)为出发菌株,孢子经预培养处理处于萌发状态后制备成单孢子悬浮液,用1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(NTG)单独和结合羟胺进行多次复合诱变处理。实验发现,诱变处理后菌落的形态变异等特征与产酶能力呈相关关系,并被用于最初的突变菌落挑选。接着先后采用蛋白质交联凝絮-沉淀性能分析的初筛试验和摇瓶测定酶活的复筛试验分离选育高产酶突变菌株,最后获得一产酶活力达2.18U/ml的高产菌株W-12var HZ3,酶活相对提高了8倍。对该菌株进行分类鉴定方面的理化性能测试和传代实验结果表明,该菌遗传性较为稳定,而且其理化性能与已报道的产酶菌种明显不同。

微生物转谷氨酰胺酶的生产菌种诱变和发酵生产分析

对本研究室从土壤分离得到的链霉菌(Streptomyces sp.)WZFF.W-12菌株的斜面孢子预培养处于初萌发状态后,以亚硝基胍(NTG)进行诱变育种试验,并根据诱变处理后菌落的某些形态变化状况与产酶能力相结合的特征。初步判断产酶性能,挑选高酶活菌株,再经过初筛和复筛,获得一性能良好的产酶突变菌株WZFF.W-12.varMN-35,转谷氨酰酶活达0.53 U/mL,比原始菌株提高了1.2倍。然后在摇瓶条件下,对其发酵过程中的主要培养基组成及各种培养条件对菌体生长和产酶的影响作用进行了研究,结果表明该菌株发酵生产转谷氨酰酶的适宜碳源为可溶性淀粉+葡萄糖,氮源是多价胨外加少量的酵母膏,优化工艺条件为种龄时间24 h、接种量10％、初始pH值6.5、温度30℃和搅拌速度200 r/min,产酶能力显著提高,用小型生化反应器可以稳定生产2.0U/mL以上的酶产品。

产转谷氨酰胺酶链霉菌的发酵罐生产工艺研究

针对研究室分离筛选的链霉菌 (Streptomycessp )WZFF W 12 varMN 3 5发酵生产微生物转谷氨酰胺酶 (MTG) ,首先采用自行设计的 2L小型生化反应器 ,研究以多价胨为主的有机氮源的影响作用 ,并在此基础上逐级扩大发酵罐规模 ,以 8L小型罐及 2 0～ 2 0 0L发酵罐组合并利用在线监控手段直接监测分析环境条件对MTG发酵过程中菌体生长和产酶的影响 ,进一步确定培养条件。研究结果表明 ,以 2 0 0L发酵罐发酵生产MTG时采用两级种子培养 ,氮源采用多价胨和豆饼粉 ,发酵过程中在线控制通气量和搅拌速度分别为 0 9～ 1 1vvm和 3 5 0～ 45 0r/min等优化条件最有利于菌体持续稳定生产MTG ,当发酵至 72h时酶活达到最高 ,在 2

转谷氨酰胺酶交联对溶菌酶潜在致敏性的影响

目的 探讨转谷氨酰胺酶催化的交联对鸡蛋过敏原溶菌酶IgG和IgE结合能力的影响,为低敏鸡蛋制品加工提供理论依据和数据支撑。方法 首先利用离子交换层析分离制备溶菌酶纯品。将溶菌酶与转谷氨酰胺酶共孵育后,通过SDS-PAGE观察交联情况,利用兔抗溶菌酶特异性血清验证交联产物IgG结合能力的变化,利用鸡蛋过敏患者血清验证交联产物IgE结合能力,同时确定交联降低溶菌酶致敏性的最适反应条件。结果 转谷氨酰胺酶能够催化溶菌酶发生交联反应,在变换转谷氨酰胺酶添加量和交联时间后,能够形成不同分子量的交联产物。交联后的溶菌酶IgG结合能力显著降低,然而IgE结合能力仅在转谷氨酰胺酶与底物质量比为10 U/g、反应时间为6 h时较未加工溶菌酶降低,最低值下降32%。结论 转谷氨酰胺酶能够催化鸡蛋过敏原溶菌酶发生交联反应,然而交联后产物的IgE结合能力降低结果并不理想。

转谷氨酰胺酶产生菌的筛选和鉴定

主要介绍了转谷氨酰胺酶产生菌的筛选以及菌种的鉴定。用稀释涂布方法进行初筛以期得到链轮丝菌 ,再通过 N-苄酯基 - L-谷氨酰甘氨酸比色法确定此菌是否产转谷氨酰胺酶。然后根据其在不同培养基上的培养特征以及生理生化特征来进行产酶菌的菌种鉴定。

灰色链轮丝菌产转谷氨酰胺酶发酵条件的优化

以诱变后的灰色链轮丝菌L-18'作为研究对象,对它的摇瓶液体发酵条件进行优化得到其液体发酵的最佳条件为:以48h种龄的种子液接种1%液体发酵培养基,在30℃、pH为7.5条件下发酵;培养基的组成为0.8%甘油、0.4%胰蛋白胨、0.6%酵母膏、100×10-6 CaCl2 、500×10-6 K2HPO4 、0.1%Tween40。发酵液转谷氨酰胺酶活由0.962U/ml提高到1.623U/ml。

ASP-1号菌株谷氨酰胺酶的固定化及其性质的研究

本研究以聚乙烯醇为载体，包埋黑曲霉ASP－1号菌丝体进行固定化，固定化后的谷氨酰胺酶活力远高于游离细胞。固定化谷氨酰胺酶的最适催化温度为38C、最适pH值为7．2、催化的高峰为40h、耐盐（NaCl）性较强。植物原料中含有的谷氨酸有46％是作为谷氨酸胺存在的，谷氨酸胺是没有鲜味的，必需经过谷氨酸胺酶催化水解形成谷氨酸后，才呈鲜味。为了提高调味助鲜产品和氨基酸营养液中的谷氨酸含量，国内皆采用选育谷氨酰胺酶活力高的菌种发酵[1、2]。但是，由于谷氨酰胺酶是胞内酶，只有在自溶后才能发挥作用，所以在应用过程中不能充分发挥作用。本文采用我们选育的谷氨酰胺酶活力高的ASP－1号菌株，将其固定，提高了谷氨酰胺酶的活性，而且可以多次使用。本研究主要探讨了谷氨酰胺酶的固定化方法和固定化后酶的性质。

谷氨酰胺转氨酶催化酪蛋白涂层的羊毛溶菌酶固定化

以谷氨酰胺转胺酶(TG)为催化剂,以酪蛋白(casein)为涂层剂,对羊毛的溶菌酶固定化进行了研究.结果表明,酪蛋白经过谷氨酰胺转胺酶催化交联成的聚合物能更好地吸附于羊毛织物上并进行涂层,且酪蛋白的耐水洗稳定性好,同时溶菌酶也能更好地固定到羊毛织物上.通过对固定化工艺的探讨,得出了比较适合的固定化条件,即pH值7.0,时间2h,温度37℃,酶用量2g/L,浴比1∶20.另外,在此工艺条件下整理的羊毛织物对金黄色葡萄球菌的抑菌率达到71.75%,具有良好的抗菌效果.

L-谷氨酰胺高产菌株的诱变育种

采用谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经γ-射线和硫酸二乙酯诱变处理,定向选育出一株生产菌SH44。在适宜的条件下积累谷氨酰胺平均为41.1mg/ml,最大达41.5mg/ml。

L-谷氨酰胺的发酵生产方法

本文对L—谷氨酸胺(L-Gln)用发酵生产的三种方法作了综述。即采用野生型谷氨酸产生菌通过改变发酵条件来生产谷氨酰胺,采用各种谷氨酸生产菌的变异菌株和酶法生产。

加拿大允许添加剂转谷氨酰胺酶在预包装分割肉等产品中使用

2017年2月28日，加拿大卫生部发布G／SPS／N／CAN／1037／Add．1通报，允许转谷氨酰胺酶作为添加剂在预包装分割肉等产品中使用，使用最大限量应符合良好生产规范的要求，并要求在产品标签中予以标示。具体详见：

利用柑橘皮固体发酵生产复合酶菌株的选育

本试验对14个菌株以柑橘皮为主要原料固体发酵生产复合酶的生产性能进行了比较, 发现宇佐美曲霉Aspergillus usaanii具有较好的复合酶产率,为进一步提高该菌株的产酶能力, 我们利用γ-射线辐射对其进行了诱变育种,选育得到一株纤维素酶活提高26%、酸性蛋白酶提高28%、木聚糖酶提高24.5%的突变菌株AU—C33。采用正交试验方法对该菌株的基础培养基进行了优化,结果表明豆粕和尿素含量对各酶活具有极显著影响。以柑橘粉计,当添加23% 豆粕、8%麸皮、3%尿素,水分含量在60%,28℃培养60h后,CMCase、FPA、β-葡萄糖苷酶、酸性蛋白酶和木聚糖酶分别达到了20.8U/g、7.25U/g、74.7U/g、7248.4U/g和3222.6U/g。

一种果胶酶生产菌株的分离及其产酶条件优化

为了从自然界中寻找一种果胶酶生产菌株,在果胶平板上经过筛选、复筛,分离出产果胶酶生产菌株,并将分离得到的菌株在摇瓶发酵培养、测定其酶活力,其发酵培养基的初始pH、最适温度、最适接种量及发酵周期进行初步研究.结果表明:经过筛选得到的产果胶酶菌株在发酵培养基的初始pH为7.0、培养温度为33℃、接种量为30%、发酵周期为56 h时,此菌株产酶的酶活力最高,优化后的条件大大提高了菌株的产酶能力.

内切型菊粉酶生产菌株的筛选及诱变选育

采用透明圈法筛选得到了产菊粉酶的多株菌株，并得到了１株产内切型菊粉酶较高的隐球酵母属（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）菌株Ｌ１，以Ｌ１作为出发菌株经Ｃｏ６０诱变后，得到１株产内切型菊粉酶最好菌株Ｃ１０，其诱变后低聚果糖得率比诱变前提高了５２．６％，酶活力提高了５１．９％。