转谷氨酰胺酶2通过mTOR通路和自噬调控全反式维甲酸诱导的白血病细胞HL60和U937的髓系分化

全反式维甲酸(ATRA)是具有融合基因PML-RARα的急性早幼粒细胞白血病(APL)特异的靶向治疗药物。此外,ATRA在无PML-RARα融合的急性髓系白血病及其它一些肿瘤中也有一定治疗效果。但ATRA治疗也会引起一些并发症或发生愈后复发。因此,对ATRA诱导分化调控机制的研究非常重要。转谷氨酰胺酶2(TGM2)是一种多功能酶,能调控mTOR信号通路和自噬等。ATRA能诱导APL细胞中TGM2表达上调,TGM2敲低抑制ATRA诱导的细胞分化。但其调控机制及涉及的信号通路尚不明确。本研究发现,在HL60和U937细胞中,ATRA能够上调CD11b和TGM2的表达(P<0.05),抑制mTOR信号通路,并增强自噬;与对照相比,敲低TGM2,mTOR信号通路增强,自噬被抑制,而ATRA诱导的CD11b表达被抑制(P<0.05),分化减弱,被ATRA抑制的mTOR信号通路得到部分恢复,而被ATRA增强的自噬适当减弱。这表明ATRA使HL60和U937细胞发生髓系分化,并诱导TGM2表达升高;而TGM2通过mTOR信号通路和自噬途径调控ATRA诱导的髓系分化。该研究将有利于更深入地了解ATRA诱导白血病细胞分化的过程和机制,也有利于加深对TGM2的多功能性的认识;有助于对APL等白血病及其它癌症的药物诱导疗法的探讨。

转谷氨酰胺酶2基因敲低对肺癌细胞增殖和侵袭的抑制作用

目的分析转谷氨酰胺酶2(TGM2)基因的敲低对肺癌细胞A549恶性增殖和侵袭的影响。方法将对数生长期的A549细胞分为对照组、shRNA-NC组和TGM2-shRNA1组。转染后,采用RT-PCR和Western blot检测转染后TGM2 mRNA和蛋白表达水平,检测A549细胞的克隆形成情况、增殖能力、细胞凋亡率和侵袭细胞数,显微镜下观察各组A549细胞的小管形成数,Western blot检测各组A549细胞的E钙黏蛋白(E-cad)、N钙黏蛋白(N-cad)、纤连蛋白(FN)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果与shRNA-NC组相比,TGM2-shRNA1组细胞TGM2 mRNA水平和蛋白表达下降(P<0.05),细胞的克隆形成率、增殖活性、侵袭细胞数和小管形成数下降(P<0.05),细胞凋亡率、E-cad蛋白表达升高(P<0.05),N-cad、FN和VEGF蛋白表达下降(P<0.05)。结论TGM2基因沉默可以抑制VEGF蛋白表达,抑制A549细胞的恶性增殖和侵袭,促进细胞凋亡。

组织型转谷氨酰胺酶2在鼻黏膜间充质干细胞分化过程中的表达

背景:外胚层间充质干细胞可在特定的外环境中定向分化为其他类型细胞,分化过程中一些特殊蛋白的表达可能直接影响其命运的方向。目的:探讨大鼠鼻黏膜间充质干细胞在成骨细胞分化和成神经样细胞分化过程中组织型转谷氨酰胺酶2的表达。方法:组织贴壁法分离培养并鉴定大鼠鼻黏膜间充质干细胞,分别进行成神经样细胞、成骨细胞诱导分化。在诱导不同时间点,采用免疫荧光检测神经相关蛋白GAP-43、TUBB3和骨相关蛋白OCN、COLⅠ的表达,免疫印迹法检测神经相关蛋白GAP-43、TUBB3,骨相关蛋白OCN、COLⅠ,神经营养因子NT-3、BDNF,细胞外基质FN、LN以及组织型转谷氨酰胺酶2的表达水平。结果与结论:①成神经诱导3 d,免疫荧光法观察可见神经元细胞特征性蛋白GAP-43和TUBB3呈阳性表达;成骨诱导7 d,免疫荧光法观察可见成骨细胞特征性蛋白COLⅠ和OCN呈阳性表达;②成神经诱导培养3,5,7 d,免疫印迹法检测神经细胞相关蛋白GAP-43、TUBB3和组织型转谷氨酰胺酶2表达水平随诱导时间延长而增高;成骨诱导7,14 d,免疫印迹法检测成骨细胞相关蛋白COLⅠ、OCN以及组织型转谷氨酰胺酶2水平随诱导时间延长而增高;③成神经诱导7 d,免疫印迹法检测神经营养因子NT-3、BDNF和组织型转谷氨酰胺酶2水平高于未诱导对照组;成骨诱导14 d,免疫印迹法检测细胞外基质FN、LN和组织型转谷氨酰胺酶2水平高于未诱导对照组;④结果表明,组织型转谷氨酰胺酶2可能参与和调控鼻黏膜间充质干细胞向神经样细胞和成骨细胞分化过程。

组织转谷氨酰胺酶2对乙型肝炎相关性肝细胞癌进展的影响

目的探讨组织转谷氨酰胺酶(TGM) 2表达对乙型肝炎相关性肝细胞癌(HCC)进展的影响。方法选择乙型肝炎相关的HCC患者,按照TNM分期分为Ⅰ～Ⅳ期,同时对HCC癌细胞株进行培养,进行基因芯片分析及Western印迹分析TGM2基因及蛋白的表达及其与HCC分期之间的相关关系,最终使用胱胺竞争性抑制TGM2作用通路,探究其对细胞凋亡的作用。结果微阵列分析结果显示与Ⅰ期HCC相比,Ⅳ期时TGM2的基因表达显著升高(P<0. 05);免疫染色分析显示TGM2的大量表达主要见于HCCⅢ期及Ⅳ期,显著高于Ⅰ～Ⅱ期肿瘤组织水平(P<0. 05);使用胱胺后48 h后HCC细胞的存活率下降至最大值的36. 5%左右,其可使caspase-3的活化降低1. 5倍,其最终导致磷酸化的AKT表达显著减少,诱导细胞凋亡。结论乙型肝炎病毒相关的HCC中TGM2的表达水平与肿瘤的侵袭性及分期相关,通过竞争抑制TGM2的作用通路可促使肿瘤细胞凋亡。

转谷氨酰胺酶2在特应性皮炎中的致病作用

目的观察特应性皮炎病人皮损组织中转谷氨酰胺酶2(TG2)表达的变化,以及血液中TG2特异性IgE水平的改变,探讨TG2在特应性皮炎致病中的作用。方法选取特应性皮炎病人47例,另取同期我院皮肤科痣切除病人正常皮肤标本40例作为对照。实时荧光定量PCR方法检测TG2基因表达,ELISA法检测外周血TG2蛋白特异性IgE表达水平,自动血细胞计数仪检测嗜酸性粒细胞数。结果特应性皮炎病人TG2mRNA表达显著高于对照组,差异有显著性(t=7.614,P<0.01)。特应性皮炎病人TG2蛋白特异性IgE表达水平显著高于对照组(t=7.835,P<0.01)。特应性皮炎病人嗜酸性粒细胞计数显著高于对照组(t=2.527,P<0.05)。Spearman相关分析显示,特应性皮炎病人TG2mRNA和外周血TG2蛋白特异性IgE表达与病人的性别和年龄无显著相关性,但是TG2mRNA和TG2蛋白特异性IgE与病人的特应性皮炎积分(SCORAD)评分和外周血嗜酸性粒细胞计数呈显著正相关(r=0.317～0.336,P<0.05)。结论 TG2和其特异性IgE在特应性皮炎中高表达,可能参与了特应性皮炎的发生过程。

特应性皮炎患者皮肤中转谷氨酰胺酶2蛋白的检测

目的检测特应性皮炎患者皮肤中转谷氨酰胺酶2(TG2)蛋白表达的变化,探讨其在特应性皮炎致病中的作用。方法收集2017年1月—2018年1月我院皮肤科诊治的特应性皮炎患者52例的皮损组织,另取我院同期痣切除患者切缘周围正常皮肤标本30例作为正常对照。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测皮肤组织TG2蛋白表达水平。结果特应性皮炎患者皮损组织TG2蛋白为(11.57±3.25)ng/ml,显著高于对照组的(0.16±0.03)ng/ml(P <0.01)。特应性皮炎患者嗜酸粒细胞计数为(0.52±0.13)×10~9/L,显著高于对照组(0.31±0.07)×10~9/L(P<0.01)。特应性皮炎患者特应性皮炎积分(SCORAD)为(8.46±1.54)分,显著高于对照组(0.09±0.02)分(P <0.01)。TG2蛋白与特应性皮炎患者的嗜酸粒细胞计数(r=0.473,P <0.05)和SCORAD评分呈显著正相关(r=0.462,P <0.05)。结论特应性皮炎患者皮损组织中TG2蛋白高表达,TG2蛋白表达与患者的嗜酸粒细胞计数和临床SCORAD评分呈显著正相关。

转谷氨酰胺酶2和Mer受体酪氨酸激酶基因共沉默在小鼠动脉粥样硬化斑块失稳中的作用

目的观察受体转谷氨酰胺酶（TG2）和Mer受体酪氨酸激酶（Mertk）共沉默的腺病毒干扰载体在小鼠动脉粥样硬化（As）斑块失稳中的作用。方法建立小鼠As模型，随机分为pAdTrack/TG2/Mertk组（n=10）、pAdTrack/TG2组（n=10）以及pAdTrack／Mertk组（n=10），于一侧髂总动脉斑块局部分别转染上述腺病毒干扰载体，另一侧髂总动脉转染pAdTraek/绿色荧光蛋白（GFP）作为对照组。转染8周后，采用Westernblot法检测各组斑块内TG2和Mertk蛋白表达，采用显微超声检测斑块的偏心指数和重构指数，并计算易损指数，采用免疫组织化学法检测斑块的脂质、胶原、巨噬细胞和平滑肌细胞含量。结果pAdTrack/TG2/Mertk组和pAdTrack/TG2组的TG2蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05），但两组均显著低于pAdTrack/Mertk组和pAdTrack/GFP组的TG2蛋白表达（P〈0．01），pAdTrack/TG2/Mertk组和pAdTrack/Mertk组的Mertk蛋白表达比较差异无统计学意义（P〉0．05），但两组均显著低于pAdTrack/TG2组和pAdTrack/GFP组的Mertk蛋白表达（P〈0．01）；与其他3组比较，pAdTrack/TG2/Mertk组的偏心指数和重构指数显著增高（P〈0．05），pAdTrack/TG2/Mertk组易损指数显著增高（P〈0．01），pAdTrack/TG2/Mertk组脂质含量显著增高（P〈0．01），pAdTrack/TG2/Mertk组胶原含量显著降低（P〈0．05），pAdTrack/TG2/Mertk组巨噬细胞含量显著增高（P〈0．05），而每组的平滑肌数量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论TG2和Mertk共沉默的腺病毒干扰载体在小鼠AS斑块失稳中起着重要作用。

TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p在胃癌组织中的表达及与疾病演进的相关性

目的研究转谷氨酰胺酶2(transglutaminase,TGM2)、核富集转录本1(nuclear paraspeckle assembly transcript1,NEAT1)、miRNA-17-5p在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达及与疾病演进的相关性。方法选取病理科保存的GC组织标本74例,为研究组,另选取同一时间段病理科保存的正常胃黏膜(距离癌组织>5 cm)74例,为对照组,检测TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p表达水平,统计研究对象一般资料及GC患者与疾病演进的相关性。结果与对照组比较,研究组TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。与无淋巴转移比较,有淋巴转移患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与临床Ⅲ~Ⅳ期比较,Ⅰ~Ⅱ期患者TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低;与黏膜下层比较,TGM2、NEAT1阳性表达率较高,miRNA-17-5p阳性表达率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p阳性表达率升高与发生GC独立相关(P<0.05)。受试者工作特征曲线(ROC)分析TGM2、NEAT1、miRNA-17-5p预测发生GC曲线下面积(AUC)分别为0.662、0.716、0.754。结论GC患者组织中TGM2、NEAT1阳性表达率增高,miRNA-17-5p阳性表达率降低,其阳性表达的高低与患者淋巴转移、临床分期、病灶深度显著相关,在临床诊断中具有重要意义。

结肠癌组织中MEG8、TGM2 mRNA的表达变化及其意义

目的观察结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)母源性表达基因8(MEG8)、转谷氨酰胺酶2(TGM2)mRNA的表达变化,并探讨其意义。方法采用实时荧光定量PCR法检测85例份结肠癌组织及其癌旁正常组织MEG8、TGM2 mRNA,分析两者间及其与结肠癌临床病理参数、患者预后的关系。结果结肠癌及其癌旁正常组织MEG8 mRNA相对表达量分别为0.62±0.23、1.87±0.55,TGM2 mRNA相对表达量分别为2.03±0.95、0.98±0.36,两者比较,P均<0.05。MEG8、TGM2 mRNA表达均与结肠癌TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05)。结肠癌组织中MEG8 mRNA和TGM2 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.798,P<0.05)。MEG8 mRNA高表达者5年总生存率为77.78%(35/45)、生存时间为(43.62±8.31)个月,低表达者分别为52.50%(21/40)、(31.07±7.25)个月,两者比较,P均<0.05;TGM2 mRNA高表达者5年总生存率为54.55%(24/44)、生存时间为(37.21±9.68)个月,低表达者分别为78.49%(32/41)、(49.18±8.76)个月,两者比较,P均<0.05。结肠癌患者预后Cox回归模型分析显示,高级别TNM分期、有淋巴结转移、MEG8 mRNA低表达、TGM2 mRNA高表达是影响结肠癌患者预后的危险因素(P均<0.05)。结论结肠癌组织中MEG8 mRNA呈低表达,TGM2 mRNA呈高表达,两者表达均与TNM分期、淋巴结转移有关,检测两指标有助于评估疾病病情及患者预后。

TGM2基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症的关联性分析

目的:探讨组织转谷氨酰胺酶2(TGM2)基因多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病的关系,阐明精神分裂症发病的遗传因素。方法:收集428例中国北方汉族人群精神分裂症患者和555名健康对照者全血样品,提取基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测TGM2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点基因型。应用拟合优度χ2检验分析4个单核苷酸多态性(SNPs)位点基因型频数分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律,应用χ2检验和数量性状分析分别进行等位基因、基因型的关联性分析。结果:TGM2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点的基因型频数分布在精神分裂症病例组和健康对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。等位基因关联分析,病例组和对照组中各SNPs位点等位基因的频数分布比较差异无统计学意义(均P>0.05)。基因型关联分析,病例组和对照组中各SNPs位点基因型的频数分布比较差异无统计学意义(均P>0.05)。临床表型分析,各SNPs位点与精神分裂症阳性、阴性临床表型无关联(P>0.05)。结论:TMG2基因rs2076380、rs7270785、rs4811528和rs6023526位点多态性与中国北方汉族人群精神分裂症发病无关联。

MEG8、TGM2在胃癌组织中的表达及临床意义

背景胃癌(gastric cancer, GC)是常见恶性肿瘤之一,发病率、死亡率均排在全国、乃至全世界前列,是影响人类健康的重要问题.目前仍缺乏GC早期诊断、治疗及GC预后相关的基因靶点.目的探讨母源性表达基因8(maternally expressed gene 8,MEG8)及转谷氨酰胺酶2(transglutaminase2,TGM2)在GC组织中的表达及临床意义.方法通过荧光定量聚合酶链式反应检测30对GC及癌旁组织中MEG8、TGM2表达情况,分析表达情况与GC患者临床病理特征相关性,通过摘录Oncomine数据库中相关研究数据,分析TGM2表达差异性及与GC患者的生存状态的相关性.结果MEG8在GC组织中的表达量低于癌旁组织(0.462±0.082 vs 1.048±0.149), TGM2在GC组织中的表达量高于癌旁组织(1.202±0.143 vs 0.742±0.083),差异具有统计学意义(P <0.05);MEG8表达与年龄、临床分期有关(P<0.05), TGM2表达与临床分期有关(P <0.05);T G M2表达高低与G C患者生存状态无关(P>0.05).结论MEG8、TGM2参与GC的发生发展过程,可作为GC诊断及预后的潜在靶点.

TGM2在过敏性紫癜肾损伤中的意义

目的探讨转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)在过敏性紫癜(HSP)肾损伤中的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测HSP患儿(HSP组,20例)、HSPN患儿[HSPN组,20例,其中HSPN(Ⅱ,ISKD)4例,HSPN(Ⅲ,ISKD)12例,HSPN(Ⅳ,ISKD)4例]和健康对照组20例外周血有核细胞TGM2mRNA的表达;应用免疫组织化学的方法检测HSPN组患儿和对照组(5例)肾组织TGM2蛋白的表达。结果 HSPN组外周血TGM2mRNA表达高于健康对照组和HSP组(P<0.05),健康对照组和HSP组外周血TGM2mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。HSPN组和对照组肾组织的表达差异有统计学意义(P<0.01),且TGM2的表达水平与HSPN病理分级严重程度有关联,即病理分级越重,TGM2的表达越强(P<0.001)。结论 TGM2的表达与HSP肾脏损害有关,且与肾脏损害病理程度有关,TGM2可能参与了HSPN的发病机制。

TGM2、CtBP2在胃癌及癌旁组织中的表达及意义分析

目的探讨转谷氨酰胺酶2(TGM2)、转录辅阻遏因子2(CtBP2)在胃癌及癌旁组织中的表达及意义。方法收集124例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,采用免疫组化染色和半定量积分方法检测TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁组织中的表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理及预后的关系。结果TGM2和CtBP2在胃癌组织中的表达量高于癌旁组织(P<0.05);TGM2表达水平与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄和肿瘤直径无关(P>0.05);CtBP2表达只与分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05);TGM2阴性患者3年生存率高于阳性患者(P<0.05),CTBP2阴性患者3年生存率高于阳性患者(P<0.05)。结论TGM2和CtBP2在胃癌组织中的表达率更高,可以作为胃癌疾病早期诊断的标志物;TGM2的表达水平与分化程度、临床分期和淋巴结转移有关,CtBP2的表达只与分化程度有关,TGM2和CtBP2均与患者预后密切相关,可以用于胃癌病情评估和预后判断。

TG2在宫颈癌及卵巢癌中的作用

2型转谷氨酰胺酶(transglutaminase 2,TG2)是转谷氨酰胺酶家族成员之一,其作为一种多功能酶可通过激活多条信号通路(如PI3K/AKT途径、NF-κB途径、m TOR途径、RAS/MAPK途径等)调控肿瘤(如胰腺癌、肠癌、肝癌等)发生、发展、侵袭及耐药,在妇科肿瘤尤其是宫颈癌及卵巢癌的病理生理进程中可能也扮演了重要的角色,但具体机制尚不清楚。故本文通过对TG2结构和分布、活性调控以及当前关于TG2在宫颈癌和卵巢癌的研究进展进行综述,为宫颈癌及卵巢癌的治疗提供一些新的思路。

二甲双胍干预肺纤维化发病机制的研究进展

肺纤维化是一种慢性、进行性和不可逆的呼吸系统疾病,其特征是细胞外基质过度沉积导致炎症和广泛的肺重塑。目前尚无有效的治疗方法。多项研究表明二甲双胍是一种具有抗纤维化潜力的经典抗血糖药物。但目前关于二甲双胍发挥抗纤维化作用的具体机制尚未达成共识,本文就近几年来二甲双胍在肺纤维化领域的研究进展进行综述,主要从IGF-1/IGF-1R/PI3K信号、AMPK/mTOR信号、TGF-β/Smad信号通路以及干预肌成纤维细胞增殖和凋亡、改善氧化应激、抑制上皮间质转化及转谷氨酰胺酶2多种途径展开讨论,以期未来能够更深入和全面地理解二甲双胍抗纤维化机制与临床应用范围,为肺纤维化治疗提供新的思路。

基于纳米材料提取肝细胞癌患者血浆外泌体的研究

目的建立一种快速、高效提取肿瘤患者血浆外泌体的新方法。方法采用ExoQuick新型纳米材料分离外泌体,考马斯亮蓝染色进行蛋白定量,透射电子显微镜观察外泌体的形态。蛋白质印迹法分析外泌体标记和肝细胞癌相关蛋白。结果以纳米材料为基础的新提取方法分离出的胞外泌体直径为30~100 nm,与传统方法分离的外泌体直径相似;蛋白浓度是传统方法提取的外泌体蛋白浓度的19倍;鉴定到典型的外泌体蛋白:跨膜蛋白CD63和热休克蛋白70(HSP70)。肝细胞癌患者外泌体中含有TGM2,而无膜联蛋白A2表达。结论基于纳米材料提取外泌体方法快速有效。肝癌相关蛋白TGM2可以通过外泌体介导的非经典分泌途径分泌,可能是一种有价值的肿瘤标志物。

IgA肾病相关的免疫细胞膜分子及系膜细胞激活的研究进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是最常见的原发性肾小球肾炎,以系膜区IgA或IgA免疫复合物沉积为主要表现。参与的主要免疫细胞膜分子有转铁蛋白受体(transferrin receptor,CD71)、转谷氨酰胺酶2(transglutaminase 2,TG2)和可溶性CD89(soluble CD89,sCD89)等,它们在IgAN发病中占有非常重要的地位。同时,新的研究认为系膜细胞的激活可能并不是由半乳糖缺乏的IgA1及其复合物所造成的。因此,深入研究IgAN相关的免疫细胞膜分子及系膜细胞激活方式对于阐明该病的发病机制及靶向治疗具有非常重要的意义。

胱胺抑制5-羟色胺诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖及机制

目的研究胱胺对5-羟色胺(5-HT)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖以及Ras同源基因家族成员A(RhoA)信号通路的影响。方法培养人PASMC,用1μmol/L 5-HT进行刺激,以胱胺进行干预。采用CCK8法观察细胞增殖情况;采用Western blot、免疫共沉淀检测RhoA信号通路各蛋白分子。结果5-HT诱导人PASMC增殖,使RhoA 5-HT化、RhoA膜转位、Rho蛋白激酶2(ROCK2)表达以及肌球蛋白磷酸酶目标亚基1(MYPT1)、蛋白激酶B(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化明显增加。胱胺抑制5-HT诱导的PASMC增殖、RhoA 5-HT化及MYPT1、Akt、ERK磷酸化,但对RhoA膜转位、ROCK2蛋白表达无显著影响。结论胱胺通过抑制RhoA 5-HT化从而抑制5-HT诱导的人PASMC增殖。

TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干扰载体的构建及其基因沉默作用

目的构建转谷氨酰胺酶2(TG2)和Mer受体酪氨酸激酶(Mertk)基因共沉默腺病毒干扰载体,并检测其基因沉默作用。方法首先构建能干扰TG2和Mertk蛋白表达的质粒载体pSUPER/TG2及pSUPER/Mertk,再将其干扰序列和H1启动子序列切下并连接到pAdTrack上,构建成pAdTrack/TG2/Mertk载体。将其转入含有pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中,回收并酶切鉴定重组腺病毒载体。将阳性腺病毒载体感染HEK293细胞,收集病毒,反复扩增后测定病毒滴度。分别以pAdTrack/TG2/Mertk、pAdTrack/TG2、pAdTrack/Mertk及pAdTrack/绿色荧光蛋白(GFP)感染RAW264.7细胞,采用免疫印迹法检测其TG2蛋白和Mertk蛋白的表达水平。结果pAdTrack/TG2/Mertk载体的病毒滴度为6.13×1010GFU/mL。经酶切鉴定,pAdTrack/TG2/Mertk含有插入的2个启动子和2个干扰序列,载体构建成功。pAdTrack/TG2和pAdTrack/TG2/Mertk组TG2蛋白的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/Mertk组(P<0.01),后两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。pAdTrack/Mertk和pAdTrack/TG2/Mertk组Mertk蛋白的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但均低于pAdTrack/GFP和pAdTrack/TG2组(P<0.01),后两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TG2和Mertk基因共沉默腺病毒干扰载体pAdTrack/TG2/Mertk构建成功,其能显著降低小鼠巨噬细胞样RAW246.7细胞中TG2蛋白和Mertk蛋白的表达水平。