Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的:研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1(ABCA1/ABCG1)表达的调控作用。方法:体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果:Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1mRNA水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论:Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。

罗格列酮对冠心病患者外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达的影响

目的以冠心病患者外周血单核细胞为研究对象,观察不同浓度的罗格列酮对体外培养的单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达的影响,以探讨罗格列酮对动脉粥样硬化发生发展的影响。方法密度梯度离心法分离冠心病患者外周血单核细胞,再分别与0、0.1、1.0及10.0μmol/L罗格列酮作用24 h,提取各组细胞总RNA,逆转录聚合酶链反应分别检测三磷酸腺苷结合盒转运子A1、过氧化体增殖物激活型受体γ及肝X受体αmRNA的表达,Western blot检测三磷酸腺苷结合盒转运子A1蛋白的表达。结果罗格列酮引起冠心病患者外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1 mRNA与蛋白表达明显增加(P<0.05),过氧化体增殖物激活型受体γ和肝X受体αmRNA表达亦上调(P<0.05)。结论罗格列酮可能通过过氧化体增殖物激活型受体γ-肝X受体α-三磷酸腺苷结合盒转运子A1途径影响外周血单核细胞三磷酸腺苷结合盒转运子A1的表达,从而在动脉粥样硬化的防治过程中发挥重要作用。

盐碱胁迫对尼罗罗非鱼鳃Na^+/HCO_3^-共转运子、碳酸酐酶基因表达的影响

为了探讨盐碱胁迫条件下鱼类渗透生理调节机制,以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验材料,PCR扩增得到了Na^(+)/3HCO^(-)共转运子(NBCe1)基因c DNA部分序列,比较了单盐(盐度10、盐度15)、单碱(1.5 g/L、3 g/L Na HCO3)、盐碱混合(盐度10,碱度1.5 g/L;盐度15,碱度3 g/L)胁迫后不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h)血清渗透压、离子浓度(Na^(+)、K^(+)、Cl–、Ca2^(+))以及鳃碳酸酐酶(CA)活性、CA与NBCe1基因m RNA表达变化。结果显示,不同胁迫条件下,血清渗透压、离子浓度、鳃组织CA酶活、CA与NBCe1基因m RNA表达变化均与胁迫强度呈正相关。随时间推移,血清渗透压、离子浓度呈现先上升后下降的变化趋势,单盐、盐碱混合组血清渗透压值较单碱组高。单盐、单碱、盐碱混合组中,NBCe1基因m RNA在鳃中均呈略微上调,但不显著(P>0.05)。单碱组和盐碱混合组鳃CA活性较单盐组高,低盐碱胁迫(盐度10,碱度1.5 g/L)下CA活性较晚达最高值;不同胁迫条件下,CA基因m RNA表达均表现上调,单碱、盐碱混合组更为显著(P<0.05),推测CA较NBCe1对体内3HCO^(-)转运作用更为显著。研究结果为尼罗罗非鱼盐碱适应生理调节提供了基础资料。

别嘌醇改善果糖诱导的大鼠高尿酸血症与调节肠道葡萄糖转运子表达的关系研究

目的观察别嘌醇和苯溴马隆对高果糖饮水诱导的高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠血尿酸水平、肝脏黄嘌呤氧化酶活性以及肠道果糖转运子(glucose transporter,GLUT)2和5表达的影响。方法 Wistar大鼠连续饮用10%果糖水8周以制备高尿酸血症大鼠模型,其中从第5周开始分别给予大鼠灌胃5 mg·kg^(-1)别嘌醇或10 mg·kg^(-1)苯溴马隆,共4周。磷钨酸法检测大鼠血尿酸水平,比色法检测肝脏XOD活性,Western blot法和免疫组化染色法检测肠道GLUT2和GLUT5的表达。结果别嘌醇明显降低果糖诱导的HUA大鼠血尿酸水平(P<0.01)和肝脏XOD活性(P<0.01),减少了HUA大鼠肠道GLUT5的表达(P<0.01),但对肠道GLUT2的表达无明显影响。与此同时,苯溴马隆也明显降低了果糖诱导的HUA大鼠血尿酸水平(P<0.01),但对HUA大鼠肝脏XOD活性、肠道GLUT2和GLUT5的表达均无明显影响。结论别嘌醇可明显降低果糖诱导的HUA大鼠血尿酸水平,其机制与抑制肝脏XOD活性以减少尿酸产生,抑制GLUT5表达以减少肠道果糖转运吸收,最终减少果糖代谢产生尿酸相关。

植物Pht1家族磷转运子的分子生物学研究进展

植物磷转运子是植物磷营养中的重要蛋白之一。对植物磷转运子蛋白的拓扑结构、功能及其基因的调控和表达位点的研究,揭示了植物磷转运子各家族中各成员在磷代谢中的角色。植物磷转运子中Pht1家族是一类H2PO4-/H+共转运子,该家族主要成员在植物根系中负责磷的吸收、转运,其表达受磷调控,因此是研究得最为深入的植物磷转运子家族。本文总结了植物Pht1家族磷转运子的最新研究进展,讨论了植物磷转运、分配的分子机理,并指出今后研究的主要方向,为开拓改良植物磷效率的新思路提供依据。

小檗碱与梓醇及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运子4蛋白及C-Cb1相关蛋白表达的影响

目的观察梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗及这一过程中葡萄糖转运子4(Glut4)和C-Cb1相关蛋白(CAP)表达的影响。方法采用高糖联合高胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗(IR),分别给予小檗碱、梓醇、小檗碱+梓醇、盐酸罗格列酮进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以Western Blotting法检测Glut4和CAP蛋白的表达。结果与模型组相比,小檗碱能增加培养液中葡萄糖的消耗,但对Glut4蛋白的表达无影响;梓醇、小檗碱+梓醇均能显著增加培养液中葡萄糖的消耗,并使细胞中Glut4蛋白的表达增强,且小檗碱+梓醇组的效应优于梓醇组及小檗碱组;与模型组相比,小檗碱与梓醇及其配伍对CAP的表达没有显著性影响。结论小檗碱、梓醇及其配伍能改善IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素活性,其作用机制与罗格列酮不同。

血管紧张素Ⅱ对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1的影响

目的:以THP-1源性泡沫细胞为研究对象,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达、细胞内胆固醇含量及胆固醇流出的影响。方法:运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和W estern b lotting分别检测AngⅡ对ABCA1 mRNA与ABCA1蛋白表达的影响,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇含量,应用液体闪烁计数仪检测胆固醇流出的变化。结果:AngⅡ能引起THP-1源性泡沫细胞胆固醇含量显著升高(P<0.05)、ABCA1表达显著减少(P<0.05),AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦(Irb)能显著减少细胞内胆固醇含量(P<0.05)、促进细胞内胆固醇流出及减轻AngⅡ对ABCA1的抑制作用(P<0.05)。结论:AngⅡ有通过其受体抑制ABCA1表达,促进泡沫细胞形成,加速动脉粥样硬化的作用。

黄连温胆汤加减对代谢综合征大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运子-4的影响

目的:研究黄连温胆汤加减对代谢综合征大鼠骨骼肌细胞GLU-4的影响及机制。方法:采用膳食诱导建立代谢综合征大鼠模型,将符合成模标准的代谢综合征大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、黄连温胆汤低、高剂量组,并给予相应方法干预4周后,检测大鼠骨骼肌细胞HE染色,免疫组化法观察骨骼肌细胞GLU-4的表达。结果:HE染色结果显示模型组大鼠骨骼肌细胞排列紊乱,部分充血水肿,间隙增宽。药物干预组较模型组明显好转,其中黄连温胆汤高剂量组骨骼肌细胞排列较规整,无明显水肿。免疫组化结果显示各组大鼠骨骼肌细胞均可见GLU-4的表达,其中黄连温胆汤高剂量组与其他组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连温胆汤可减轻代谢综合征大鼠骨骼肌损伤,上调骨骼肌细胞GLU-4的表达。

小麦吸收土壤磷转运子在酵母突变体中的功能互补分析

以小麦磷转运子全长编码cDNA (TaPT2 )为探针与小麦基因组DNA进行Southern杂交 ,结果表明 ,在小麦基因组中存在该基因的不同家族成员。另外 ,将TaPT2基因转入酵母突变体MB192中 ,以野生型菌株YPH0 84为对照 ,分别检测YTaPT2、YPH0 84和MB192酸性磷酸酶分泌情况、生长情况以及对培养基的磷吸收情况 ,得到结论 :TaPT2的功能与酵母磷转运子编码基因PHO84相似 ,具有增强酵母吸收磷的作用。

植物体内磷转运子的研究进展

近年来 ,人们对植物营养的遗传背景有了不断深入的了解 ,特别是磷营养。这一领域的研究工作开展得较早 ,而且随着分子生物学的快速发展已深入到分子水平 ,其中关于植物磷转运子的报道特别多。笔者对其结构。

新转移相关基因ATP结合盒转运子E1在非小细胞肺癌中的表达及其意义

目的观察ATP结合盒转运子E1(ABCE1)的mRNA和蛋白在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织及转移淋巴结中的表达情况,探讨其在肺癌发生、发展中的意义及其与各种临床病理参数的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应、Westernblot和免疫组织化学SP法检测非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况。结果肺癌组织和转移淋巴结中ABCE1 mRNA和蛋白的表达量均高于癌旁肺组织(P<0.05),且mRNA和蛋白的表达呈正相关(r=3.992,P=0.001)。ABCE1蛋白的表达与患者年龄、性别、组织学分级、有无淋巴结转移及pTNM分期无关(P>0.05),与病理类型有关(P=0.036),在肺腺癌中的表达高于鳞癌;ABCE1 mRNA的表达与肺癌组织学分级有关(P=0.026)。结论 ABCE1的表达可能与非小细胞肺癌的侵袭和转移相关,在肺癌的发生发展过程中起到了重要作用,并可能成为潜在的肿瘤标记物及预后指标。

水稻硅转运子基因的克隆与表达载体的构建

提取水稻根中总RNA,根据NCBI中水稻硅转运子基因Lsi1(AB222272)、Lsi2(AB222273)的mR-NA序列设计2对引物,采用RT-PCR技术扩增硅转运子基因Lsi1、Lsi2。并利用DNA重组技术分别构建了两个植物表达载体pCAMBIA2300-35S-Lsi1-OCS和pCAMBIA2300-35S-Lsi2-OCS。克隆的水稻硅转运子基因Lsi1、Lsi2与NCBI中已发表的核苷酸序列的同源性为99.33%、99.65%,氨基酸同源性都为100%。为后续培育其他硅转基因树木或农作物,增加其硅元素转运能力、提高其抗逆性奠定了实验基础。

C57BL/6J小鼠耳蜗血管纹Na-K-2Cl联合转运子-1的年龄相关性变化

目的观察不同周龄C57BL/6J(C57)小鼠听力及血管纹Na-K-2Cl联合转运子-1(Na-K-2Cl co-transporter-1,NKCC1)表达的情况。方法应用听性脑干反应(auditory brainstemresponse,ABR)分别检测4、8、16、32、48、64周龄组C57小鼠的听力;采用免疫组织化学染色法观察其血管纹NKCC1表达的变化。结果C57小鼠随年龄增大出现听力下降,自16周龄时ABR阈值出现显著性增高(P<0.05);血管纹NKCC1表达也出现年龄相关性减少,其灰度值自16周龄时显著增高(P<0.01)。结论C57小鼠血管纹NKCC1蛋白表达随年龄增长而减少,可能与年龄相关性听力损失具有一定相关性。

三磷酸腺苷结合盒转运子基因R219K多态与脑梗死的关系

目的探讨脂代谢相关基因三磷酸腺苷结合盒转运子(ABCA1)的R219K多态与脑梗死及血脂的关系。方法收集国内8家医院神经内科收治的脑梗死患者177例(脑梗死组),另选健康体检者234例(对照组)。全部患者经过头颅MRI或CT确诊,生化指标经全自动生化仪统一测定,用PCR-RFLP方法分析R219K多态。结果ABCA1基因R219K基因型分布为RR 20.20%、RK 52.55%、KK 27.25%。ABCA1基因R219K多态R等位基因频率为46.47%,K等位基因频率为53.53%。ABCA1基因的R219K多态RR型及R等位基因在脑梗死组分布较对照组多,但差异无统计学意义(P>0.05)。性别分层后比较发现,男性R219K多态RR型及R等位基因在脑梗死组分布较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);男性脑梗死患者R219K多态RR型及R等位基因较女性脑梗死患者明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);这种差异在脑梗死组女性与对照组女性中不存在。ABCA1基因的R219K多态在人群中和脑梗死患者中各基因型间血脂水平无统计学差异。结论ABCA1基因的R219K多态RR型可能是男性患脑梗死的易感基因,其机制可能与血脂水平无关。

玉液汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中葡萄糖转运子-4mRNA表达的影响

目的观察玉液汤对胰岛素抵抗大鼠骨骼肌中葡萄糖转运子-4 mRNA(GLUT-4 mRNA)表达的影响。方法采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)方法检测大鼠骨骼肌中GLUT-4 mRNA的水平。结果玉液汤高剂量组能显著增加大鼠骨骼肌中GLUT-4mRNA的表达(P<0.01)。结论玉液汤通过增强骨骼肌中GLUT-4 mRNA的表达改善胰岛素抵抗。

Ⅲ型钠磷共转运子小分子干扰RNA-壳聚糖纳米球的制备及性质分析

目的:制备Ⅲ型钠磷共转运子小分子干扰RNA(NaPi-ⅢsiRNA)-壳聚糖纳米球,并考察其理化性质及体外释放情况。方法:将壳聚糖和NaPi-ⅢsiRNA通过复凝聚方法制备NaPi-ⅢsiRNA-壳聚糖纳米球;透射电镜观察其形态,激光粒度分析仪测定其粒径分布,RNase酶解实验观察其对NaPi-ⅢsiRNA有无保护作用,并计算其包封率、载药量和对NaPi-ⅢsiRNA的体外控释能力。结果:成功制备NaPi-ⅢsiRNA-壳聚糖纳米球。电镜观察发现纳米球呈球形,分布均匀;激光粒度分析仪测定其平均粒径为173 nm;经RNase酶解后,纳米球混悬液D260上升较单纯NaPi-ⅢsiRNA溶液上升缓慢(P<0.05,t=4.32);药剂学分析发现其载药量为28.1%,包封率为73.07%,12 h内NaPi-ⅢsiRNA的体外释放率不足20%。结论:复凝聚方法制备的NaPi-ⅢsiRNA-壳聚糖纳米球包封率高、稳定性好、大小均匀,体外能显著延缓NaPi-ⅢsiRNA释放,可以在一定程度上保护NaPi-ⅢsiRNA免受酶解。

人尿酸盐转运子1第3内含子突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响

目的明确人尿酸盐转运子(h URAT)1第3内含子(h URAT1 IVS-3+11G>A)突变对海南黎族人群高尿酸血症发生的影响。方法海南黎族高尿酸血症患者100例为观察组,同期行体检的海南黎族非高尿酸血症者100例为对照组。采用突变特异性扩增系统(ARMS)对比两组h URAT1 IVS-3+11G>A等位基因突变情况。结果观察组h URAT1基因IVS-3+11G>A多态性A等位基因频率显著高于对照组(P<0.05)。经单因素及Logistics回归分析显示:饮酒、体重超重及携带h URAT1 IVS-3+11G>A多态性A等位基因为影响海南黎族高尿酸血症发生的独立风险因素(P<0.05)。结论 h URAT基因突变可能影响了海南黎族人高尿酸血症的发生,这一结果为此类疾病的遗传学病因探索提供了参考。

2型糖尿病患者三磷酸腺苷结合盒转运子G1表达下调不依赖于肝X受体的调节

目的:研究2型糖尿病患者胆固醇外流的功能改变及调节基因三磷酸腺苷结合盒转运子G1(ATPbinding cassette transporter G1,ABCG1)的表达,并探讨肝X受体(liver X receptor,LXR)对ABCG1表达的调节作用。方法:选取2型糖尿病和健康对照组各30例,抽取外周静脉血40 m L,分离人外周血单核细胞,经巨噬细胞集落刺激因子诱导分化为巨噬细胞。以[3H]胆固醇标记巨噬细胞,用液闪计数法测定胆固醇外流率。实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT PCR)法检测人单核巨噬细胞ABCA1/G1的mRNA表达,Western blot法检测ABCA1/G1的蛋白表达;siRNA法抑制LXRα、LXRβ,观察其对ABCG1mRNA表达的影响;电泳迁移率试验方法(electrophery mobility supershift assay,EMSA)检测LXR与ABCG1启动子区LXR反应元件(liver X receptor element,LXRE)结合的DNA结合蛋白的表达。结果:与健康对照组相比,2型糖尿病患者ABCG1的mRNA及蛋白表达水平与高密度脂蛋白介导的胆固醇外流率显著降低(19.0%±1.2%vs.12.8%±3.6%,t=2.532,P=0.016),而ABCA1的mRNA及蛋白表达水平与载脂蛋白A1(Apolipoprotein A1,Apo A1)介导的胆固醇外流率差异无统计学意义(12.0%±1.2%vs.10.2%±2.3%,t=1.771,P=0.109)。LXRα、LXRβ的mRNA表达水平以及LXR-LXRE DNA结合蛋白的表达差异均无统计学意义(t=1.025,P=0.315;t=-0.531,P=0.600;t=1.483,P=0.164),且LXR的siRNA抑制对ABCG1mRNA的表达也无显著影响(t=2.143,P=0.061)。结论:2型糖尿病患者巨噬细胞胆固醇外流功能的下降与ABCG1表达下调相关,而ABCG1的表达下调可能不依赖于LXR。

三磷酸腺苷结合盒转运子A1基因多态性与冠心病及缺血性脑卒中的关系研究

目的探讨三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)基因多态性与广西汉族人群冠心病(CHD)及缺血性脑卒中(IS)易感的相关性。方法选择住院患者1134例,根据诊断分为CHD组565例、IS组569例,同时选择年龄、性别匹配的健康人群541例作为对照组,进行临床资料分析,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测ABCA1基因的单核苷酸多态性(SNP)位点rs2066715和rs2740483的基因分型,探讨其与CHD及IS易感的相关性。结果 3组rs2066715基因型及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05),该SNP与CHD及IS的易感无相关性(P>0.05);与对照组比较,CHD组和IS组rs2740483等位基因和基因型频率分布差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);该SNP与CHD及IS的易感有相关性(P<0.05)。结论 ABCA1rs2740483与广西汉族CHD和IS易感相关,携带野生型等位基因的个体有更高的罹患风险。

茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因CsPPT的克隆与表达分析

以白叶1号为试验材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因Cs PPT(Gen Bank登录号:KJ652972)。Cs PPT完整ORF长度为1 227 bp,编码408个氨基酸,蛋白分子量为44.7k Da,理论等电点为10.16;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;建立了茶树Cs PPT蛋白的系统发育树;磷酸化修饰预测该蛋白质多肽链中共有26个磷酸化位点;TMHMM预测表明Cs PPT蛋白为跨膜蛋白;亚细胞定位发现,Cs PPT蛋白定位于叶绿体上,推测Cs PPT蛋白可能定位于叶绿体膜上。荧光定量PCR结果表明Cs PPT基因在茶树花中表达量最高,其次为芽、叶和嫩茎,根中最低。