虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化的体内外实验研究

目的通过体内外实验探讨虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化。方法连续14 d每天肌注氢化可的松粉针剂(20 mg/kg)制造虚寒大鼠模型,观察正常、虚寒大鼠肝、小肠CYP3A活性和小肠P-gp蛋白水平;选用L02细胞和Caco-2细胞作为细胞模型,分别用正常和虚寒状态大鼠血清对其进行干预,分别观察L02细胞中CYP3A活性和Caco-2细胞中P-gp蛋白水平。结果虚寒模型大鼠肝和小肠微粒体CYP3A活性显著降低(P<0.05),小肠P-gp蛋白表达显著降低(P<0.05)。虚寒状态L02细胞中CYP3A活性明显降低(P<0.05),但虚寒状态Caco-2细胞中P-gp蛋白水平没有显著变化。结论体内、外实验共同验证了虚寒状态下CYP3A活性处于低下状态,至于Caco-2细胞中P-gp没变化,可能与Caco-2细胞株本身为癌细胞,P-gp高表达有关。

仙茅对正常/虚寒大鼠孕烷X受体及其介导的药物代谢酶CYP3A和运转蛋白P-gp的影响

目的:明确仙茅对正常、虚寒大鼠孕烷X受体(PXR)调控药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp的作用差异,为探讨其药效表达差异机制奠定基础。方法:连续21d肌注氢化可的松粉针剂20mg·kg-1·d-1塑造虚寒大鼠模型。从第15天开始,正常、虚寒大鼠连续7d分别灌胃仙茅大、小剂量(30、20g/kg)水煎液。观察正常和虚寒状态下仙茅对PXR及其介导的药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp的影响。结果:仙茅大、小剂量分别给予虚寒大鼠后,能使虚寒大鼠降低的肝脏微粒体CYP3A活性、小肠P-gp及肝脏PXR蛋白表达水平不同程度升高(P<0.05,P<0.01)。而仙茅大、小剂量分别给予正常大鼠后,各指标变化均不明显。结论:仙茅对虚寒状态的治疗作用可能与其可升高虚寒大鼠PXR及其介导的CYP3A和P-gp有关。

仙茅及其有效成分对不同状态Caco-2细胞PXR-P-gp的影响

目的:探讨仙茅水提液及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷对正常/虚寒状态Caco-2细胞PXR-CYP3A活性的影响。方法:肌注氢化可的松琥珀酸钠20mg·kg-1·d-1制造虚寒大鼠模型;分别用正常、虚寒大鼠血清培养Caco-2细胞,诱导正常、虚寒两种状态细胞。仙茅水提液(生药0.75mg/m L)及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷(1×10-5mol/L)作用于不同状态细胞后,检测不同状态Caco-2细胞PXR和P-gp蛋白表达。结果:MTT法结果显示,仙茅水提液各浓度(1 000、750、500、250、100μg/m L)及其有效成分苔黑酚葡萄糖苷各浓度(10-3、10-4、10-5、10-6、10-7mol/L)对Caco-2细胞没有明显细胞毒性。虚寒组细胞的P-gp蛋白表达较正常组明显降低(P<0.05);PXR蛋白表达水平有降低趋势,但无统计学意义。仙茅水提液与苔黑酚葡萄糖苷均能使正常和虚寒组细胞P-gp蛋白水平显著升高(P<0.01),而对PXR蛋白水平没有显著影响。结论:仙茅能使正常及虚寒状态Caco-2细胞P-gp高表达,说明仙茅对Caco-2细胞P-gp有诱导作用。

三七总皂苷通过ERK/Akt通路改变HepG2/阿霉素细胞耐药性

目的:观察三七总皂苷对人肝癌阿霉素耐药细胞(HepG2/Adr)耐药性及细胞外调节蛋白激酶(ERK)/蛋白激酶B(Akt)通路主要蛋白表达的影响,从ERK/Akt通路探讨三七总皂苷逆转HepG2/Adr细胞耐药的可能作用机制。方法:利用噻唑蓝(MTT)比色法检测三七总皂苷对HepG2/Adr细胞增殖的影响,利用(100,50,25 mg·L^(-1))三七总皂苷分别与(20μmol·L^(-1))阿霉素联合处理HepG2/Adr细胞,同时设置空白组,采用高内涵筛选平台检测药物作用40 min,3 h,6 h阿霉素在HepG2/Adr细胞内的积累;采用蛋白免疫印迹法检测P-糖蛋白/多药耐药基因1/ATP家族所介导的ABC家族转运蛋白(P-gp/MDR1/ABCB1)等耐药相关蛋白及ERK/Akt信号通路主要蛋白表达量;激光共聚焦显微镜检测MDR1在细胞膜上分布的改变。结果:与人肝癌细胞HepG2比较,HepG2/Adr细胞MDR1表达量显著升高(P<0.01);与阿霉素组比较,三七总皂苷(25,50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药在体外对HepG2/Adr细胞的半数抑制浓度(IC50)显著降低(P<0.01),逆转倍数最高为10倍;与阿霉素组比较,联合给药组3,6 h可明显提高阿霉素在细胞内的积累(P<0.05),呈剂量依赖性;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(50,100 mg·L^(-1))与阿霉素(20μmol·L^(-1))联合给药组MDR1,ABC半转运蛋白(ABCG2),多药耐药相关蛋白1(MRP1),ERK,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK),Akt,磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR),磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达明显降低(P<0.05);与空白组比较,阿霉素组与三七总皂苷(25 mg·L^(-1))组MDR1在细胞膜上的分布差异无统计学意义;与空白组和阿霉素组比较,三七总皂苷(100,50 mg·L^(-1))组可明显减少MDR1在细胞膜上的分布(P<0.05)。结论:三七总皂苷可抑制ERK/Akt通路,降低MDR1的表达,明显提高阿霉素在HepG2/Adr细胞中的积累,可能是三七总皂苷逆转耐药的机制之一。