左归丸对去势大鼠钙转运通路相关蛋白的影响

目的探讨左归丸去势大鼠骨密度和骨、肾组织中钙转运通路相关蛋白的影响。方法选取48只雌性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,西药组,中药低、高剂量组。除假手术组和正常组,其余组切除大鼠卵巢,造模成功后3个月进行各组干预。3个月后处死大鼠,检测大鼠骨密度(BMD);Westernblotting法检测钙转运通路(肾组织)蛋白表达;免疫组化检测去势大鼠骨组织中新型上皮钙通道5(TRPV5)蛋白的表达。结果与模型组相比,左归丸高剂量组与西药组大鼠骨密度均有改善(P<0.05);与假手术组比较,模型组各蛋白表达均有不同程度下降(P<0.01,P<0.05);尼尔雌醇和左归丸均能不同程度上调去势大鼠肾组织中TRPV5蛋白、钠钙交换器(NCX1)蛋白、钙结合蛋白-D28K(CaBP-D28K)和细胞膜钙汞(PMCA1b)蛋白表达,差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01);免疫组化显示模型组较假手术组的TRPV5蛋白表达率增加(P<0.05),而西药组和中药高、低剂量组较模型组蛋白表达率均下降(P<0.05)。结论左归丸可通过上调肾钙转运通路中相关蛋白的表达和降低大鼠破骨细胞中TRPV5蛋白的表达,而发挥骨质疏松症治疗作用,肾、骨组织中钙转运过程相关蛋白可能成为骨质疏松症治疗的新方向、新靶点。

拟柱孢藻N8全基因组测序及磷吸收转运通路的比较分析

为从分子水平解析热带特征性蓝藻-拉氏拟柱孢藻(Cylindrospermopsis raciborskii,简称拟柱孢藻)环境适应机制,研究以广东省镇海水库中分离的拟柱孢藻藻株N8为材料,采用PacBio单分子实时测序技术(Single Molecule Real-Time, SMRT)进行测序,并初步进行全基因组特征的比较分析。结果显示拟柱孢藻N8全基因组大小为3.857 Mb, GC含量为40.13%,预测编码基因个数为3598个,在COG、KEGG和GO数据库中注释到的基因数分别为2429、1664和2244个。N8藻株与美国国立生物技术信息中心(NCBI)上公布的27株拟柱孢藻基因组大小和GC含量基本一致,但N8的编码基因数最多。基于拟柱孢藻全基因组单拷贝基因的系统进化树表明N8藻株与韩国藻株GIHE 2018的亲缘关系最近。N8藻株的基因组中未发现拟柱孢藻毒素(CYN)和石房蛤毒素(STX)合成酶基因簇,表明该藻株不产蓝藻毒素CYN和STX。对N8藻株和其他7藻株的磷吸收转运通路比较分析表明,这些藻株均拥有较为完整的磷吸收转运基因(双组分调节系统、低亲和力无机磷转运基因、高亲和力无机磷转运系统、有机磷酸盐转运复合体、C-P裂解酶和碱性磷酸酶),表明拟柱孢藻具有灵活利用环境中不同形态磷源的潜能;而不同藻株间的基因拷贝数和排列顺序存在差异,如拟柱孢藻N8基因组中有2个C-P裂解酶复合体蛋白phnF和phnM,其余7株拟柱孢藻则只有1个,表明拟柱孢藻存在株系特异性。N8藻株为中国首株公开完成全基因组测序数据的拟柱孢藻,对其基因组分析和磷吸收转运通路的解析将有助于阐明华南地区拟柱孢藻水华优势形成的分子机制。

产毒和非产毒拟柱孢藻的磷吸收转运通路基因比较及对低磷的响应表达特征分析

拥有完整的磷吸收转运通路基因(Pho调节子)是蓝藻适应环境磷波动的分子基础,目前对这些基因在拟柱孢藻(Cylindrospermopsis raciborskii)中的响应表达特征还知之甚少。本研究在拟柱孢藻非产毒株N8前期工作的基础上,分析产拟柱孢藻毒素(cylindrospermopsin, CYN)藻株QDH7中Pho调节子基因的组成,并比较两藻株在高磷和低磷下的生长、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性及8个Pho调节子基因的时序表达。结果表明, QDH7和N8的Pho调节子基因均很完整,主要在排列和少数基因的拷贝数上存在差异。低磷下两藻株的生长都受到明显抑制, ALP活性在第14~18天显著升高,而产毒和非产毒藻株在相同磷浓度下的生长趋势基本一致。基因的时序表达分析表明,低磷下两藻株的双组份系统基因phoB和phoR在第4~6天和第14~16天有显著的表达升高,而2个高亲和力无机磷结合蛋白基因中仅pstS1的表达显著升高, 2个ALP基因中phoA1的表达与酶活性的增加基本同步,表明pstS1和phoA1基因在对低磷的响应中起主要作用;低亲和力无机磷转运系统pit在低磷处理第16~18天的表达上调可能是QDH7和N8极度缺磷状态的指示。我们发现低磷下产毒株QDH7有6个基因的最高相对表达量高于非产毒株N8,这种差异在磷不足的环境中可能会影响共存于自然水体中的2种基因型藻株对磷的竞争和相对优势的形成。

基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

葛根素口服油基纳米乳大鼠体内吸收转运通路研究

考察葛根素油基微乳在大鼠小肠的吸收动力学特征和最佳吸收部位,研究微乳的吸收转运通路。大鼠在体肠回流实验考察小肠吸收行为,通过阻断和未阻断淋巴液及药物浓度的变化确定吸收转运通路。葛根素油基微乳在各肠段均有吸收,各肠段的Ka、Papp大小顺序是回肠>十二指肠>空肠>结肠,且回肠的Ka、Papp值显著大于其他肠段,不同浓度的药物吸收速率差异不显著(P>0.05)。经胃肠道生物转运的葛根素中约有36.8%经淋巴途径进入体循环,63.2%经非淋巴途径吸收。葛根素微乳在回肠吸收最好,属被动转运;转运通路是淋巴和非淋巴转运。

熊果苷调节PI3K/Akt/GLUT1信号通路对胃癌细胞恶性进展的影响

目的 探讨熊果苷(Arb)调节磷脂酰肌醇-3激酶B/蛋白激酶B/葡萄糖转运蛋白1(PI3K/Akt/GLUT1)信号通路对胃癌细胞恶性进展的影响。方法 使用不同浓度(12.5、25、50、100、200、400 mol/L)Arb处理SNU-601细胞,检测细胞活性,筛选最佳浓度;将细胞分为对照组(Control组)、熊果苷低、中、高浓度组(L-Arb组、M-Arb组、H-Arb组)、熊果苷高浓度+PI3K/Akt激活剂组(H-Arb+740 Y-P组),分别检测细胞凋亡率、细胞周期、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数和细胞侵袭数;Western blot检测Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达。结果 12.5~400 mol/L的Arb可显著抑制SNU-601细胞增殖,选择50、100、200 mol/L的Arb进行后续实验。与Control组比较,L-Arb组、M-Arb组、H-Arb组细胞活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数、细胞侵袭数及Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达降低,细胞凋亡率和Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05);与H-Arb组比较,H-Arb+740 Y-P组细胞活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数、细胞侵袭数及Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达增加,细胞凋亡率和Bax、cleaved-caspase3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Arb通过抑制PI3K/Akt/GLUT1信号通路抑制胃癌细胞恶性进展。

遗传性痉挛性截瘫与转运通路

遗传性痉挛性截瘫(HSP)是一组具有明显临床和遗传异质性的神经系统遗传病,发病机制复杂,分子遗传学研究发现8个疾病基因与HSP相关,其编码的蛋白中spartin、spastin、atlastin、kinesin、paraplegin和PLP1蛋白都与轴突转运通路有关,提示细胞转运通路异常可能是某些HSP亚型的共同发病机制。

急、慢性运动对2型糖尿病大鼠脂肪PI3K/AKT/GLUT4通路的影响

目的:探讨急性和慢性运动对2型糖尿病(T2DM)大鼠脂肪组织明磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/葡萄糖运载体4(GLUT4)信号通路的影响。方法:15月龄SD雄性大鼠52只随机分为正常对照组(n=13)和高脂组(n=39),分别喂养普通和高脂饲料。8周后,高脂组体重>正常对照组20%,注射小剂量STZ后,血糖>16.7 mmol/l,造模成功。将糖尿病模型组随机分为糖尿病对照组(DC,n=13),糖尿病慢性运动组(DCE,n=13),糖尿病急性运动组(DAE,n=13)。DCE组进行8周的游泳运动,DAE组进行一次性游泳运动。测定血脂,血糖和血清胰岛素,Western blot法测定脂肪PI3K、AKT和GLUT4蛋白含量。结果:糖尿病组体重、血脂、血糖、胰岛素显著高于正常对照组(P均<0.01);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平降低(P<0.05),脂肪组织中PI3K、AKT和GLUT4蛋白表达下降(P均<0.01)。糖尿病慢性运动组体重、血脂、血糖、胰岛素均出现显著性下降(P均<0.01);HDL-C升高(P<0.05),脂肪PI3K、AKT和GLUT4蛋白表达上升(P<0.01)。糖尿病急性运动组血脂、血糖、胰岛素下降(P均<0.05);HDL-C升高(P<0.05),脂肪PI3K、AKT和GLUT4含量显著上升(P均<0.05)。结论:①高脂饮食结合小剂量STZ诱导的T2DM大鼠脂肪组织PI3K/AKT通路受损,降低了胰岛素的敏感性。②急性、慢性有氧运动,均可以通过PI3K/AKT通路,改善糖脂代谢紊乱,慢性运动略优于急性运动。

荭草苷通过PPAR-γ/LXR-α/ABCG1信号通路改善MSU晶体诱导的大鼠急性关节炎

目的基于过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)/肝X受体-α(LXR-α)/ATP结合盒转运体G1(ABCG1)信号通路明确荭草苷改善MSU晶体诱导的大鼠急性关节炎的作用。方法SD大鼠随机分为对照组、急性关节炎模型组、荭草苷组、GW9662(PPAR-γ抑制剂)组、荭草苷+GW9662组,每组12只。模型组和给药组以踝关节注射单钠尿酸盐(MSU)晶体的方法诱导大鼠急性关节炎模型。给药组给予荭草苷或/和GW9662干预,1次/d,共14 d。对大鼠步态进行评分;评测大鼠左踝关节炎症指数及左踝关节横截面周长;酶联免疫试剂盒检测大鼠左踝关节滑膜组织和血清炎性因子IL-6、IL-18水平;HE染色观察大鼠左踝关节滑膜组织病理形态;免疫印迹检测大鼠左踝关节滑膜组织PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠步态评分、炎症指数、左踝关节横截面周长、IL-6及IL-18水平明显升高(P<0.05);关节滑膜组织肌纤维坏死、核破裂,结缔组织明显增生,伴有大量中性粒细胞、巨噬细胞及淋巴细胞等炎性细胞浸润;关节滑膜组织PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组、荭草苷+GW9662组分别相比,荭草苷组大鼠步态评分、炎症指数、左踝关节横截面周长、IL-6及IL-18水平降低(P<0.05),关节滑膜组织病理损伤明显减轻,关节滑膜组织PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白表达升高(P<0.05);GW9662组大鼠步态评分、炎症指数、左踝关节横截面周长、IL-6及IL-18水平升高(P<0.05),关节滑膜组织病理损伤明显加重,关节滑膜组织PPAR-γ、LXR-α、ABCG1蛋白表达降低(P<0.05)。结论荭草苷可通过激活PPAR-γ/LXR-α/ABCG1通路,抑制MSU晶体诱导的大鼠急性关节炎症,减轻关节滑膜组织损伤,改善关节功能。

芒果苷改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱的作用及机制研究

为探讨芒果苷改善大鼠2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)糖脂代谢紊乱的作用及潜在机制,将T2DM大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍组(100 mg/kg)及芒果苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),另设正常对照组,10只/组;灌胃给药,1次/d,持续8周。评价空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(insulin resistance index,HOMA-IR)及血清游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)等指标,并检测肝组织谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)及胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter 4,Glut4)信号通路相关m RNA和蛋白表达。结果发现,芒果苷可以改善T2DM大鼠毛色、活动及精神等一般状态,减缓体重下降趋势;与模型对照组比较,经芒果苷治疗8周后,各治疗组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR及血清FFA、TG、TC含量均显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01);各治疗组大鼠肝组织GSH-Px、CAT、SOD活力显著或极显著高于模型对照组(P<0.05,P<0.01),而MDA含量极显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,芒果苷低、中、高剂量组大鼠肝组织IRS-1 mRNA表达无显著差异(P>0.05),Akt、Glut4 mRNA及p-IRS-1(Tyr)、Akt、Glut4蛋白表达显著或极显著增加(P<0.05,P<0.01),而p-IRS-1(Ser)蛋白表达显著或极显著降低(P<0.05,P<0.01)。上述结果表明,芒果苷具有改善T2DM大鼠糖脂代谢紊乱的作用,该作用与抗氧化应激及调节IRS-1/Akt/Glut4信号通路有关。

鼻腔给药治疗中枢神经系统疾病的研究进展

鼻腔给药可以避免药物的胃肠道降解和肝脏首过效应,具有脑靶向性,能够有效提高中枢神经系统疾病的治疗效果。本文从鼻腔给药治疗中枢神经系统疾病的可行性、转运通路、作用机制、影响因素和体内外评价方法等方面进行综述,为经鼻给药脑靶向制剂的研究提供理论依据。

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明。

基于PPARγ/LXRα/ABCG1信号通路探讨黄芪总皂苷-荷叶总生物碱防治高脂血症的机制

目的:观察黄芪总皂苷-荷叶总生物碱配伍对高脂血症大鼠胆固醇逆转运(RCT)的影响,探讨其作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、高脂饮食组和黄芪总皂苷-荷叶总生物碱低(17 mg·kg^(-1)+40 mg·kg^(-1))、中(34 mg·kg^(-1)+80 mg·kg^(-1))、高(68 mg·kg^(-1)+160 mg·kg^(-1))剂量组及辛伐他汀(2.1 mg·kg^(-1))组,每组10只。采用高脂饲料连续喂养6周复制高脂血症大鼠模型,从第3周开始除正常组和高脂饮食组给予蒸馏水外,其余各组均灌胃相应药物治疗,给药4周。全自动生化分析仪检测大鼠血脂及肝功能变化;苏木素-伊红(HE)及油红O染色法观察大鼠肝组织病理形态及脂肪变性情况;半自动生化分析仪检测大鼠肝组织和粪便总胆固醇(TC)和总胆汁酸(TBA)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体α(LXRα)、三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)和胆固醇7α羟化酶(CYP7A1)mRNA和蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,高脂饮食组大鼠血清TC、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、TBA、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量或活性显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量显著降低(P<0.01),肝细胞肿胀明显,部分呈气球样改变,肝细胞内含有大量脂肪空泡和红色脂滴,肝组织和粪便TC和TBA含量显著升高(P<0.01),肝组织PPARγ、LXRα、ABCG1和CYP7A1 mRNA和蛋白的表达显著降低(P<0.01)。与高脂饮食组比较,各给药组大鼠血清TC、TG、LDL-C、TBA、AST、ALT的含量或活性显著降低(P<0.01),HDL-C的含量显著升高(P<0.01),肝细胞肿胀明显减轻,肝组织中气球样变、脂滴空泡和红色脂滴明显减少,肝组织TC和TBA含量明显下降(P<0.05,P<0.01),粪便TC和TBA含量明显升高(P<0.05,P<0.01),肝组织PPARγ、LXRα、ABCG1和CYP7A1 mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪总皂苷-荷叶总生物碱对高脂血症大鼠具有较好的防治效果,其作用机制可能与激活PPARγ/LXRα/ABCG1信号通路,调节RCT有关。

鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq调控基因的筛选

为筛选鼠伤寒沙门菌伴侣蛋白Hfq所调控的基因,本实验基于本研究室前期对指数生长期和稳定期的鼠伤寒沙门菌hfq基因缺失株转录组测序结果,从中随机挑选6个在转录水平差异表达的基因,并通过荧光定量PCR技术验证转录组数据的可靠性,然后在转录组数据可靠的前提下将两个转录组中所有显著差异表达(log2FoldChang>1)的基因GO富集细菌致病机制生物学过程,Pathway富集细菌ABC转运通路和群体感应通路,在富集得到的基因中筛选指数生长期和稳定期均表现为转录水平差异表达且趋势相同的基因。荧光定量PCR检测结果显示,6个基因转录水平差异上调或下调的趋势与转录组分析结果中一致,表明转录组数据可靠,可进行后续的研究。GO与Pathway富集结果显示,在鼠伤寒沙门氏菌hfq基因缺失株指数期和稳定期中均表现为转录水平差异上调或下调且差异倍数均大于2的基因共26个。其中,与细菌致病机制生物学过程相关的13个基因均上调;与细菌ABC转运通路相关的基因11个,其中9个基因转录水平均上调2个基因转录水平均下调;与细菌群体感应相关的2个基因转录水平均上调。26个基因中仅rpoE经验证受Hfq直接调控。以上结果表明,Hfq主要参与细菌致病机制生物学过程以及细菌ABC转运通路的负调控。本研究为后续Hfq靶基因的鉴定及其作用机理的研究提供了理论基础,同时丰富了Hfq调控基因的数目。

金匮肾气丸通过调控PI3K-AKT-mTOR及PI3K-AKT-GLUT4通路干预多囊卵巢综合征大鼠的作用机制研究

目的:基于PI3K-AKT-mTOR、PI3K-AKT-GLUT4两通路探讨金匮肾气丸对多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome, PCOS)大鼠的干预作用及机制。方法:60只雌性SD大鼠随机为正常对照组、模型对照组、达英-35+二甲双胍(0.2 mg/kg+0.23 g/kg)组和金匮肾气丸0.5、1、2 g/kg,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠每天灌胃来曲唑1 mg/kg以建立PCOS模型,连续21 d。造模第16 d开始阴道涂片检测动情周期,见阴道上皮细胞持续角化者即为PCOS模型大鼠,第22 d开始灌胃给予相应药物或者CMC-Na, 1次/d,连续21 d。末次给药24 h后,腹主动脉取血,ELISA法测定血清雌二醇(Estrogen, E2)、睾酮(Testosterone, T)、促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone, GnRH)、促卵泡素(Follicle stimulating hormone, FSH)和促黄体生成素(Luteinizing hormone, LH)含量;取大鼠双侧卵巢,称质量,计算卵巢系数;HE染色法观察卵巢病理变化;免疫组织化学法检测卵巢组织中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)和葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白阳性表达;实时荧光定量PCR法检测Pi3k、Akt、Mtor、Glut4 mRNA表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠卵巢系数明显增加,血清T、GnRH、LH含量明显升高,FSH和E2含量明显降低(P<0.05);卵巢组织中闭锁卵泡增多,囊性病变增加,卵巢组织中PI3K、p-AKT、p-mTOR、GLUT4蛋白表达及mRNA表达明显下调(P<0.05);与模型对照组比较,各给药组大鼠卵巢系数明显减小,血清T、GnRH、LH含量明显降低,FSH和E2含量明显升高(P<0.05);卵巢组织囊性病变明显减轻,卵巢组织中PI3K、p-AKT、p-mTOR、GLUT4蛋白阳性表达及mRNA表达明显上调(P<0.05)。结论:金匮肾气丸通过调节雌、雄激素分泌及PI3K-AKT-mTOR、PI3K-AKT-GLUT4两通路相关因子表达来实现其对PCOS大鼠的干预作用。

鹿茸健骨滴丸对骨质疏松症大鼠肾组织TRPV5表达的影响

目的:通过观察鹿茸健骨滴丸对糖皮质激素性骨质疏松症(GIO)大鼠股骨骨密度(BMD)及肾组织钙转运通路蛋白(TRPV5)mRNA和蛋白表达的影响,探讨GIO的病理机制及鹿茸健骨滴丸的疗效。方法:将82只Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、鹿茸健骨滴丸组(C组)及骨疏康组(D组)。采用后肢肌注地塞米松(2.5 mg·kg-1,每周2次)造模,造模同时,C,D组分别按0.88,2.1 g·kg-1·d-1剂量ig给药,造模及给药9周后,应用XR-26型双能X射线骨密度仪测定BMD,采用实时定量PCR法及Western blot法测定肾组织TRPV5 mRNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠BMD明显降低(P<0.01),肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达均明显下降(P<0.01);与模型组比较,鹿茸健骨滴丸组BMD明显升高(P<0.01),TRPV5 mRNA与蛋白表达亦明显上调(P<0.01)。结论:地塞米松对肾钙转运过程产生抑制作用,是其诱发GIO的重要病理机制之一,鹿茸健骨滴丸通过上调肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达而促进肾钙重吸收,达到治疗GIO的作用。

丹参来源纳米囊泡通过PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路抑制平滑肌细胞泡沫化

目的:探讨丹参来源纳米囊泡(SDNV)通过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-γ)/肝X受体α(LXR-α)/三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)信号通路抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的平滑肌细胞源性泡沫细胞形成的作用机制。方法:采用透射电镜、纳米颗粒跟踪分析对超高速差速离心法提取的SDNV进行鉴定;选择MOVAS小鼠主动脉血管平滑肌细胞株和ox-LDL诱导建立泡沫细胞模型;通过激光共聚焦观察MOVAS细胞对SDNV的摄取情况;采用CCK8法检测SDNV对MOVAS细胞存活率的影响;将细胞分为对照组、模型组、SDNV组及辛伐他汀组,微板法检测各组细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)含量,并计算CE/TC比值;油红O染色观察各组细胞内脂质蓄积的情况;WesternBlot分析各组细胞中PPAR-γ、LXR-α、ABCAI蛋白表达水平。结果:SDNV通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析鉴定SDNV符合纳米囊泡的表征及粒径要求;激光共聚焦观察到SDNV可以被MOVAS细胞摄取;CCK8实验结果显示SDNV对MOVAS细胞无明显毒性;油红O染色及CE/TC值的改变表明SDNV能够抑制MOVAS细胞的脂质蓄积,抑制泡沫细胞的形成;与模型组比较,SDNV组PPAR-γ、LXR-α、ABCA1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:SDNV可以通过PPAR-γ/LXR-α/ABCA1信号通路抑制平滑肌源性泡沫细胞的形成,进而防治动脉粥样硬化.