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枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA突变文库构建及其生物柴油转酯研究
被引量:
2
1
作者
李璟
童晋
+2 位作者
罗明银
黎宸位
鲜洁
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期864-869,共6页
采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn^(2+)浓度为0.2 mmol·L^(-1)时,产生...
采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn^(2+)浓度为0.2 mmol·L^(-1)时,产生了突变菌株。对该条件下构建的文库中124株突变菌株进行p NPP高通量筛选,突变株4B_2的吸光度值A_(405)为1.395,与未突变株PET32a-lipase A(A_(405)=0.448)差异显著。测序结果表明,突变株4B_2脂肪酶基因lipase A有5个核苷酸位点发生了突变,其中3个是同义突变,2个是错义突变,分别是82位的天冬酰胺(AAU)突变为酪氨酸(UAU),143位的赖氨酸(AAG)突变为苏氨酸(ACG)。突变株4B_2发酵上清液转化生物柴油的转酯效率较对照菌PET 32a-lipase A有明显提高,前者为79.5%,后者为49.72%。本研究为枯草芽孢杆菌脂肪酶lipase A转酯活性位点的探索奠定了基础。
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关键词
枯草芽孢杆菌
脂肪酶
易错PCR
对硝基苯棕榈酸酯
转酯效率
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职称材料
题名
枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA突变文库构建及其生物柴油转酯研究
被引量:
2
1
作者
李璟
童晋
罗明银
黎宸位
鲜洁
机构
成都理工大学材料与化学化工学院
成都理工大学矿产资源化学四川省高校重点实验室
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016年第5期864-869,共6页
基金
四川省教育厅科研项目(SZS013)
文摘
采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn^(2+)浓度为0.2 mmol·L^(-1)时,产生了突变菌株。对该条件下构建的文库中124株突变菌株进行p NPP高通量筛选,突变株4B_2的吸光度值A_(405)为1.395,与未突变株PET32a-lipase A(A_(405)=0.448)差异显著。测序结果表明,突变株4B_2脂肪酶基因lipase A有5个核苷酸位点发生了突变,其中3个是同义突变,2个是错义突变,分别是82位的天冬酰胺(AAU)突变为酪氨酸(UAU),143位的赖氨酸(AAG)突变为苏氨酸(ACG)。突变株4B_2发酵上清液转化生物柴油的转酯效率较对照菌PET 32a-lipase A有明显提高,前者为79.5%,后者为49.72%。本研究为枯草芽孢杆菌脂肪酶lipase A转酯活性位点的探索奠定了基础。
关键词
枯草芽孢杆菌
脂肪酶
易错PCR
对硝基苯棕榈酸酯
转酯效率
Keywords
Bacillus subtilis
lipase
error-prone PCR
p-nitrophenyl-palmitate
transesterification efficiency
分类号
TQ925.6 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA突变文库构建及其生物柴油转酯研究
李璟
童晋
罗明银
黎宸位
鲜洁
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2016
2
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